拉氏菌素的毒理學(xué)安全性試驗(yàn)研究

莎拉菌素是艾瑞公司首次開(kāi)發(fā)的抗動(dòng)物疾病藥物，具有廣闊的抑制和殺死寄生蟲(chóng)的效果，包括跳蚤、真菌病、寄生蟲(chóng)、鉤蟲(chóng)、虱、線蟲(chóng)和狗細(xì)蟲(chóng)。由于其方便、愈合效果好、毒性低等優(yōu)點(diǎn)，深受寵物喜愛(ài)。本研究以《化學(xué)藥物急性毒性試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則》為指導(dǎo),按照簡(jiǎn)化寇氏法對(duì)塞拉菌素原料藥及制劑進(jìn)行了急性毒性試驗(yàn),為該藥的毒性研究和臨床合理、有效用藥提供依據(jù)。1材料和方法1.1浙江海正藥業(yè)股份有限公司塞拉菌素原料藥,白色粉末狀物質(zhì),純度98.2%,批號(hào):S070401,浙江海正藥業(yè)股份有限公司提供。塞拉菌素制劑,無(wú)色、透明液體,規(guī)格0.75mL:45mg塞拉菌素,批號(hào):090301,浙江海正藥業(yè)股份有限公司提供,密度0.8435g/mL。1.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心昆明種小鼠(普通級(jí))154只,雌雄各半,體重18～22g,購(gòu)自蘭州大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心,許可證號(hào):SCXK(甘)2009-0004。Wistar大鼠(清潔級(jí))154只,雌雄各半,體重180～220g,購(gòu)自蘭州大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心,許可證號(hào):SCXK(甘)2009-0004。1.3測(cè)試方法1.3.1不同劑量對(duì)拉伸菌素的影響每個(gè)試驗(yàn)組4只試驗(yàn)動(dòng)物,雌雄各半,小鼠和大鼠一次性口服不同劑量的塞拉菌素原料藥和制劑,測(cè)定LD0和LD100。此外小鼠和大鼠分別透皮給予高劑量塞拉菌素制劑10g/kg,觀察動(dòng)物的毒副反應(yīng)。1.3.2大鼠和大鼠的急性毒性試驗(yàn)根據(jù)預(yù)試驗(yàn)獲得的最高致死量和最低致死量的比值對(duì)正式試驗(yàn)進(jìn)行分組,每組試驗(yàn)動(dòng)物數(shù)為10只,雌雄各半。透皮給藥的小鼠和大鼠的數(shù)量分別增至20只,雌雄各半。給藥后觀察大鼠和小鼠的死亡情況以及出現(xiàn)的癥狀,癥狀起始的時(shí)間,嚴(yán)重程度,持續(xù)時(shí)間,給藥后連續(xù)觀察20d。對(duì)試驗(yàn)中死亡的動(dòng)物以及試驗(yàn)結(jié)束時(shí)處死的動(dòng)物進(jìn)行大體解剖,對(duì)組織器官出現(xiàn)的體積、顏色等的改變做詳細(xì)記錄。統(tǒng)計(jì)死亡率,計(jì)算LD50及其95%可信限。2結(jié)果2.1小鼠口服拉伸菌素制劑的ld0和ld200小鼠口服塞拉菌素原料藥的LD0、LD100分別為4g/kg、12.6g/kg;大鼠口服塞拉菌素原料藥的LD0、LD100分別為1.6g/kg、5g/kg;小鼠口服塞拉菌素制劑的LD0、LD100分別為4.2g/kg、8.4g/kg;大鼠口服塞拉菌素制劑的LD0、LD100分別為3.4g/kg、8.4g/kg。小鼠和大鼠分別透皮給予高劑量塞拉菌素制劑10g/kg,未見(jiàn)任何毒副反應(yīng)。2.2正式測(cè)試2.2.1小鼠的急性毒性試驗(yàn)測(cè)得的LD50=8.72g/kg,Sx50=0.027,LD50的95%可信限為7.73～9.82g/kg。由于LD50值在5001～15000mg/kg之間,故塞拉菌素原料藥對(duì)小鼠是實(shí)際無(wú)毒的。在小鼠口服原料藥急性毒性試驗(yàn)中給藥3h后開(kāi)始出現(xiàn)臨床癥狀,表現(xiàn)為弓背、精神沉郁、食欲降低、活動(dòng)困難等臨床癥狀有的小鼠還表現(xiàn)為瞇眼、流淚、腹瀉等癥狀。死亡時(shí)間出現(xiàn)在給藥后的26h～9d內(nèi)。死后剖檢癥狀如下:皮下、腹膜、腸系膜、胸膈膜、心被膜、睪丸、子宮充血,十二指腸、空腸腸壁較薄,腸黏膜易剝落,肝、腎暗紅色,有的小鼠肝、腎腫大、腺胃有出血點(diǎn)或出血帶。雄性小鼠和雌性小鼠的死亡率無(wú)顯著性差異(P>0.05)。詳見(jiàn)表1。2.2.2急性毒性試驗(yàn)測(cè)得的LD50=2.51g/kg,Sx50=0.025,LD50的95%可信限為2.24～2.82g/kg。由于LD50值在501～5000mg/kg之間,故塞拉菌素原料藥對(duì)大鼠是低毒的。在大鼠口服原料藥急性毒性試驗(yàn)中給藥后1h開(kāi)始出現(xiàn)精神沉郁、弓背、被毛聳立、腹瀉、食欲降低等癥狀。死亡時(shí)間出現(xiàn)在給藥后的5～12d內(nèi),多數(shù)大鼠在死亡時(shí)有鼻孔有出血的跡象。死后剖檢癥狀如下:皮下、腹肌嚴(yán)重充血,腸系膜、腸膜、胃壁、胸膈膜、心被膜、睪丸、子宮輕度充血,小腸腸壁較薄,腸黏膜易剝落,肝、腎暗紅色,有的脾也為暗紅色,有的大鼠肝、脾和腎腫大。雄性小鼠和雌性小鼠的死亡率無(wú)顯著性差異(P>0.05)。詳見(jiàn)表2。2.2.3小鼠的急性毒性試驗(yàn)測(cè)得的LD50=7.71g/kg,Sx50=0.013,LD50的95%可信限為7.26～8.19(g/kg)。由于LD50值在5001～15000mg/kg之間,故塞拉菌素制劑對(duì)小鼠是實(shí)際無(wú)毒的。在小鼠口服制劑急性毒性試驗(yàn)中給藥后1min幾乎所有小鼠均反應(yīng)遲鈍,四肢發(fā)紫,給藥后1h幾乎所有小鼠均不能活動(dòng),俯臥,呼吸急促,發(fā)出叫聲。試驗(yàn)中未死亡的小鼠在給藥后的24h能正常活動(dòng)。死亡時(shí)間出現(xiàn)在給藥后的2～26h內(nèi)。尸體剖檢可見(jiàn)皮下、腹膜、腸系膜、胸膈膜、心被膜、睪丸、子宮充血,十二指腸、空腸腸壁較薄,腸黏膜易剝落,肝暗紅色,有的小鼠腎為暗紅色,肝、脾和腎腫大。雄性小鼠和雌性小鼠的死亡率無(wú)顯著性差異(P>0.05)。詳見(jiàn)表3。2.2.4急性毒性試驗(yàn)測(cè)得的LD50=6.62g/kg,Sx50=0.023,LD50的95%可信限為6.10～7.53(g/kg)。由于LD50值在5001～15000mg/kg之間,故塞拉菌素制劑對(duì)大鼠為實(shí)際無(wú)毒。在大鼠口服制劑急性毒性試驗(yàn)中所有大鼠在給藥后2min內(nèi)反應(yīng)遲鈍、四肢發(fā)紫,給藥后1h幾乎所有小鼠均不能活動(dòng),俯臥,呼吸急促,發(fā)出叫聲。試驗(yàn)中未死亡的小鼠在給藥后24h能正?；顒?dòng)。死亡時(shí)間出現(xiàn)在給藥后的5～16d內(nèi)。尸體剖檢可見(jiàn)皮下、腹肌、腸系膜、胸膈膜、心被膜、睪丸、子宮充血,十二指腸、空腸腸壁較薄,腸黏膜易剝落,肝暗紅色,有出血點(diǎn),有的小鼠腎為暗紅色,肝、脾和腎腫大。雄性小鼠和雌性小鼠的死亡率無(wú)顯著性差異(P>0.05)。詳見(jiàn)表4。2.2.5大鼠和大鼠皮膚下的制劑試驗(yàn)小鼠和大鼠分別透皮給予制劑10g/kg未見(jiàn)任何毒副反應(yīng),飲食正常。3劑量和給藥劑量小鼠和大鼠口服塞拉菌素原料藥的LD50分別是8.72g/kg和2.51g/kg;小鼠和大鼠口服塞拉菌素制劑的LD50分別是7.71g/kg和6.62g/kg。由于LD50值均在501～15000mg/kg之間,故將塞拉菌素原料及制劑判為低毒或?qū)嶋H無(wú)毒物質(zhì)。在制劑的透皮試驗(yàn)中,大鼠和小鼠的給藥劑量是10g/kg,該劑量大于臨床推薦劑量6mg/kg(原料藥)的100倍,未見(jiàn)任何不良反應(yīng),結(jié)果提示塞拉菌素制劑臨床用藥劑量是安全的。口服原料藥急性毒性試驗(yàn)中由于原料藥的給藥體積會(huì)影響藥物的吸收,從而影響動(dòng)物的死亡率,故本試驗(yàn)選擇了合適的給藥體積,大鼠為4mL,小鼠為0.8mL。在口服給藥時(shí)因?yàn)樵囼?yàn)動(dòng)物胃內(nèi)容物會(huì)