液質聯(lián)用法測定果蔬中氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留褚乾梅;黃大明;朱夢潔;王雪;張姝娟;董菁;王盾【期刊名稱】《《湖北農(nóng)業(yè)科學》》【年(卷)，期】2019(058)021【總頁數(shù)】4頁(P163-166)【關鍵詞】高效液相色譜-串聯(lián)質譜;果蔬;QuEchERs;氨基甲酸酯類農(nóng)藥;檢測【作者】褚乾梅;黃大明;朱夢潔;王雪;張姝娟;董菁;王盾【作者單位】襄陽市農(nóng)業(yè)科學院湖北襄陽441057【正文語種】中文【中圖分類】O657.7+2;S481+.8氨基甲酸酯類農(nóng)藥以其殘效小、選擇性強、對人畜毒性較低等特點而被國內外廣泛應用于病蟲害的防治［1,2］。作為高毒有機氯農(nóng)藥的替代品，氨基甲酸酯類農(nóng)藥通過抑制乙酰膽堿酯酶的活性而引起神經(jīng)遞質乙酰膽堿的積累，造成神經(jīng)功能紊亂，其在果蔬中的過量殘留或長期暴露在環(huán)境中會對人們的身體健康造成一定的危害［3,4］。目前果蔬中該類農(nóng)藥的殘留分析有高效液相色譜熒光法［5］、液相色譜-質譜聯(lián)用法［6-8］、氣相色譜法［9］和氣相色譜質譜法［10］。而液相色譜-飛行時間質譜法用于農(nóng)產(chǎn)品中農(nóng)藥殘留分析為目前殘留分析研究的熱點［11］。高效液相色譜熒光法靈敏度高，選擇性強，但在實際樣品中，由于基質不同，個別蔬菜種類有較強干擾，無法做出進一步的確證［12］。液相色譜一三重四極桿串聯(lián)質譜靈敏度高，抗干擾能力強，是目前痕量分析的首選方法［13］。快速、簡單、廉價、高效、可靠和安全的分散固相萃取（QuEchERs）技術可用于果蔬中農(nóng)藥殘留檢測［14-16］。試驗采用改進的QuEchERs方法提取、凈化樣品，結合高效液相色譜-串聯(lián)質譜儀檢測，建立12種氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留的快速檢測方法，以期為果蔬中氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留的檢測方法作補充，為襄陽市農(nóng)產(chǎn)品質量安全監(jiān)管部門日常監(jiān)督提供科學、客觀的技術依據(jù)。1材料與方法1.1材料與儀器果蔬樣品：采用四分法取適量樣品，用食品加工機將樣品粉碎，裝入保鮮盒中，于-18°C冰柜中保存，備用；氨基甲酸酯類農(nóng)藥標準品儲備液（100pg/mL）:多菌靈、啶蟲瞇克百威、甲萘威、嘧霉胺、苯醚甲環(huán)唑、噠螨靈、甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽（甲維鹽）、咪鮮胺、烯酰嗎啉、嘧菌酯、涕滅威亞砜均購于天津環(huán)保所;甲醇、乙酸銨為色譜級（JetBaker）;乙腈，甲酸為色譜級（Fisher）;試驗用水為娃哈哈純凈水；0.22pm有機濾膜（津騰）；BondElutEN萃取鹽包（內含4gMgSO4、1gNaCl,1g檸檬酸氫鈉及0.5g檸檬酸氫二鈉）和15mL凈化管（內含885mgMgSO4、150mgPSA及15mgGCB）均購自美國Agilent公司。1.2儀器與設備Agilent1260超高效液相色譜系統(tǒng)，包括四元泵，在線真空脫氣機，柱溫箱，自動進樣器（安捷倫公司）；API3200質譜儀，配有電噴霧離子源（ESI）（美國AB公司）；食品加工機（上海博朗）；CP4102電子天平（上海奧豪斯）；超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；5810R低溫冷凍離心機（美國Eppendorf公司）；MS3渦旋混勻器（德國IKA公司）。1.3方法1.3.1標準溶液的配制分別取400pL100pg/mL的12種標準溶液加入到10mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，混勻，配制成4pg/mL的混合標準中間液，-18°C避光保存?；旌蠘藴使ぷ饕焊鶕?jù)需要用甲醇配制。1.3.2樣品制備準確稱取10.0g粗粉碎的蔬菜樣品置于50mL離心管中，加10mL乙月青和陶瓷均質子，渦旋振蕩1min，加入BondElutEN萃取鹽包，渦旋振蕩1min,8000r/min離心5min,取6mL乙青上清液加入到含有凈化吸附劑和硫酸鎂的15mL凈化管中，渦旋振蕩1min,8000r/min離心5min。準確吸取1mL上清液過0.22pm有機濾膜，待HPLC-MS/MS分析。1.3.3儀器條件）色譜條件。色譜柱：ZOBRAXEclipseXDB-C18（150mmx4.6mm,5pm）;流動相：A為5mmol/L乙酸銨溶液（含0.1%甲酸），B為甲醇；梯度洗脫程序：0~6min,90%A^10%A;6-10min,10%A;10-10.01min,10%A-90%A;10.01~13min,90%A。流速1mL/min;進樣量5pL;柱溫40C。）質譜條件。電噴霧離子源（ESI）;正離子掃描；多反應監(jiān)測（MRM）;毛細管電壓：5500V;干燥氣溫度500C;Gas1:60mL/min;Gas2:65mL/min。2結果與分析2.1質譜條件優(yōu)化采用電噴霧離子源，在正離子模式下分別對0.5pg/mL的12種氨基甲酸酯類標準溶液進行母離子全掃描，確定其分子離子。再分別以以上離子作為母離子進行子離子掃描，篩選響應值較高、干擾較小、穩(wěn)定的兩個離子作為子離子，峰形較高的離子作為定量離子，并優(yōu)化DP和CE。各目標化合物優(yōu)化質譜條件見表1。表112種農(nóng)藥質譜參數(shù)名稱多菌靈啶蟲脒克百威甲萘威嘧霉胺苯醚甲環(huán)唑噠螨靈甲維鹽咪鮮胺烯酰嗎啉嘧菌酯涕滅威亞砜母離子192.1223.1222.2202.0200.2406.0365.1886.4376.0388.0372.1207.1子離子160.1（定量）/132.1126.0（定量）/90.0165.1（定量）/123.1145.1（定量）/127.1107.1（定量）/168.1251.1（定量）/237.1309.1（定量）/147.1158.3（定量）/126.1308.0（定量）/266.1301.1（定量）/165.1344.1（定量）/172.189.0（定量）/132.0碎裂電壓//V475244325769579740578027碰撞能量//eV40/2729/4519/3018/4240/3533/3013/3454/669/1431/4318/6325/122.2色譜條件優(yōu)化圖112種農(nóng)藥混合標準溶液的LC-MS/MS色譜采用梯度洗脫能較好地分離12種目標化合物，總離子流見圖1。通過在流動相中加入適量的甲酸和乙酸銨，不但可以增加分離度，改善峰形，而且可以使氨基甲酸酯類農(nóng)藥在ESI正離子模式的質譜信號得到增強，提高檢測靈敏度。梯度洗脫條件的優(yōu)化：經(jīng)過反復試驗，改變不同時間段流動相中有機相和水相的比例，最終確定了最佳梯度洗脫程序：0~6min,10%甲醇-90%甲醇；6~10min,90%甲醇;10-10.01min,90%甲醇-10%甲醇；10.01~13min,10%甲醇。2.3樣品前處理方法的選擇以未檢出農(nóng)藥殘留的蔬菜為基質，添加0.05mg/kg氨基甲酸酯類混合標準農(nóng)藥，分別采用NY/T761-2008[17]中氨基甲酸酯類農(nóng)藥多殘留測定的前處理方法和QuEchERs前處理方法進行加標回收試驗，兩種方法處理后12種農(nóng)藥的回收率見表2。其中回收率100%，表示樣品中所含農(nóng)藥在檢測過程中無損失，結果越接近100%，則前處理方法越好。結果表明，QuEchERs前處理方法簡單、快捷、安全，除多菌靈、嘧霉胺和涕滅威亞砜回收率與761方法接近，其他9種農(nóng)藥的回收率均優(yōu)于761方法，且QuEchERs方法所得回收率的相對標準偏差均低于761方法，平行性更好，可作為測定12種氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留測定的前處理方法。表2QuEchERs與761方法前處理后12種農(nóng)藥的回收率結果QuEchERs761農(nóng)藥名稱多菌靈啶蟲脒克百威甲萘威嘧霉胺苯醚甲環(huán)唑噠螨靈甲維鹽咪鮮胺烯酰嗎啉嘧菌酯涕滅威亞砜回收率//%80939610090931088790949986RSD//%2.52.14.22.04.42.31.92.34.43.42.02.3回收率//%115120811169212811912612712713492RSD//%8.74.26.34.35.63.84.24.08.04.07.45.62.4標準曲線和檢出限將混合標準貯備液分別稀釋成不同濃度的標準液，按上述操作條件進行測定，以濃度對相應的峰面積進行線性回歸，獲得氨基甲酸酯類農(nóng)藥的標準曲線及相關系數(shù)。12種農(nóng)藥的線性范圍、線性方程和相關系數(shù)見表3。標準曲線在線性范圍內呈良好的線性關系，線性相關系數(shù)為0.9966~0.9999，線性范圍為5-100pg/L,使用該儀器的方法檢出限為0.1pg/kg，表明該方法可對氨基甲酸酯類農(nóng)藥進行準確定性、定量分析。表3LC-MS/MS測定的12種農(nóng)藥的標準曲線、線性范圍、相關系數(shù)農(nóng)藥名稱多菌靈啶蟲脒克百威甲萘威嘧霉胺苯醚甲環(huán)唑噠螨靈甲維鹽咪鮮胺烯酰嗎啉嘧菌胺涕滅威亞砜線性方程y=1339381x-3157y=1898930x-2039y=2124282x-160y=2005881x-3344y=3003663x-2841y=2402582x-3345y=1339260x-2177y=6646341x-10727y=9934123x+260y=1946562x-983946y=2418284x-3437y=782572x-1094線性范圍//pg/L5-1005~1005-1005-1005-1005-1005-1005-1005-1005-1005-1005-100相關系數(shù)0.99940.99990.99990.99990.99990.99760.99980.99990.99660.99970.99990.99912.5回收率和精確度取10.0g未檢出農(nóng)藥殘留的蔬菜為空白樣品，在線性范圍內分別添加高、中、低3個濃度的標準氨基甲酸酯類農(nóng)藥按“1.3”方法提取后進行回收率試驗。每個添加濃度重復3次，結果見表4。由表4可以看出，方法回收率為80%~127%，標準偏差為1.1%~10.2%，滿足農(nóng)藥多殘留分析的要求。2.6實際樣品的測定按照上述方法，分別對120份果蔬樣品進行氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留檢測，結果烯酰嗎啉超標樣品2個，合格率為98.33%。3小結與討論試驗建立了分散固相萃取-高效液相色譜-串聯(lián)質譜法同時測定果蔬中12種氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留的快速檢測方法。與傳統(tǒng)761方法相比，樣品前處理過程簡單，試劑消耗量少，前處理時間短，樣品分析成本低，在實際大量檢測樣品中有較強的可行性和實用性。GB2763-2016《食品安全國家標準-食品中農(nóng)藥最大殘留限量》標準中12種氨基甲酸酯類農(nóng)藥的最大殘留限量的最低值為0.01~1.00mg/kg,本試驗中12種農(nóng)藥的定量限均為0.005mg/kg,滿足果蔬樣品中氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留的監(jiān)測要求。表412種農(nóng)藥的加標回收率與相對標準偏差（n=3）農(nóng)藥名稱多菌靈啶蟲脒克百威甲萘威嘧霉胺苯醚甲環(huán)唑添加量//pg/kg105010010501001050100105010010501001050100平均回收率//%9880811089388106969611710099108908712193107RSD//%10.22.51.29.12.16.89.34.22.18.32.06.19.14.42.32.94.33.7農(nóng)藥名稱噠螨靈甲維鹽咪鮮胺烯酰嗎啉嘧菌脂涕滅威亞砜添加量//pg/L105010010501001050100105010010501001050100平均回收率//%12710810812187821189092114949412099931108686RSD//%6.31.910.28.32.33.78.44.41.19.16.47.4參考文獻:【相關文獻】[1]翟德業(yè)，魏善明，周圍，等.蔬菜中氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留的固相微萃取分離和HPLC法檢測[J].應用化學，2009,26(4):498-500.[2]陳笑梅，胡貝貝，劉海山.高效液相色譜-串聯(lián)質譜法測定糧谷中9種氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留[J].分析化學，2007,35(1):106-110.龐國芳，方曉明，余建新，等.農(nóng)藥獸藥殘留現(xiàn)代分析技術[M].北京：科學出版社，2007.198-212.達晶，王鋼力，曹進，等.QuEchERs-液相色譜串聯(lián)質譜法測定植物性食品中30種氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留[J].色譜,2015,33(8):830-837.邵金良，黎其萬，劉宏程，等.高效液相色譜法測定蔬菜中8種氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留[J].現(xiàn)代食品科技,2011,27(7):856-860.[6]王連珠，周煜，黃小燕，等.基于QuEChERS提取方法優(yōu)化的液相色譜-串聯(lián)質譜法測定蔬菜中51種氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留[J].色譜，2013,31(12):1167-1175.[7]王云鳳，劉友序，左峰，等.應用QuEChERS和液相色譜-串聯(lián)質譜技術檢測食品中21種氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留[J].分析試驗室，2010,29(增刊)：281-284.[8]馬合勤，岑嘉茵.超高效液相色譜-串聯(lián)質譜法測定蔬菜中4種氨基甲酸酯類農(nóng)藥及其代謝物殘留[J].現(xiàn)代農(nóng)藥，2019,18(1):37-40.[9]蘇建峰，盧聲宇，陳晶，等.溶劑轉移-氣相色譜-質譜法和選擇洗脫-氣相色譜法測定大蒜中289種農(nóng)藥多殘留[J].色譜，2011,9(7)