葡胺葡胺肝動(dòng)脈給藥對(duì)新西蘭大白兔血液生化指標(biāo)的影響

在過去30年中，放射學(xué)的發(fā)展迅速。隨著血管栓塞技術(shù)不斷完善,血管內(nèi)栓塞材料層出不窮。聚乙烯醇(Polyvinylalcohol,PVA)作為永久性栓塞劑,常應(yīng)用于腫瘤、出血、血管疾病等,尤其是近年來在子宮肌瘤、動(dòng)靜脈瘺、動(dòng)靜脈畸形、脾亢等的栓塞治療上的應(yīng)用有增多的傾向,但所使用的PVA多為進(jìn)口產(chǎn)品,價(jià)格昂貴,廣泛使用受到限制。自制PVA是川北醫(yī)學(xué)院和四川大學(xué)化學(xué)學(xué)院共同研制的適合于介入治療的栓塞劑,鑒于栓塞劑臨床上多用于治療原發(fā)性肝癌的特殊給藥途徑,我們采用與臨床相似的給藥方式,從新西蘭大白兔肝固有動(dòng)脈注入PVA,探討其急性毒性反應(yīng),為臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。1材料和方法1.1實(shí)驗(yàn)材料和設(shè)備1.1.1塞劑的制備直徑130～300μm;由四川大學(xué)化學(xué)學(xué)院提供。聚乙烯醇顆粒栓塞劑是以聚乙烯醇縮甲醛泡沫塑料為基礎(chǔ)制備所得。先將四川大學(xué)化學(xué)學(xué)院提供PVA顆粒用130目和60目的分樣篩分離,選取粒徑130～300μm包裝成5～10mg/包,用環(huán)氧乙烷消毒后備用。1.1.276%泛影葡胺注射液由上海新益藥業(yè)廠生產(chǎn)；速睡新素注射液0.2ml/kg(吉獸藥試字2002～005004,由長春軍需大學(xué)獸醫(yī)研究所生產(chǎn))。1.1.3數(shù)字減影血管造影機(jī)130目(近似于130μm)、60目(近似于300μm)和40目(近似于440μm)三種規(guī)格(重慶市藥檢所購進(jìn))。(2)GE公司數(shù)字減影血管造影機(jī)(DSA);(3)短導(dǎo)絲(0.021吋)、3FSP微導(dǎo)管(日本泰爾茂公司)。1.2許可證scxk渝新西蘭大白兔30只(購自重慶市渝達(dá)試驗(yàn)兔場,許可證SCXK(渝)20020009),合格證號(hào):0000568,體重1.75～2.6kg,經(jīng)重慶市檢測(cè)中心檢疫符合普通級(jí)標(biāo)準(zhǔn)。1.3方法1.3.1微創(chuàng)微創(chuàng)、微創(chuàng)等皮膚電泳觀察和術(shù)后拔管、粘結(jié)股動(dòng)脈、縫合皮膚的形成動(dòng)物用速眠新Ⅱ注射液肌注麻醉后,仰臥位固定,腹股溝備皮、消毒、鋪巾后,在股動(dòng)脈搏動(dòng)處縱軸切開皮膚,游離股動(dòng)脈約1.5cm,用2ml注射器穿刺針向心方向穿刺股動(dòng)脈形成一針眼,噴血后,直接送入短導(dǎo)絲(0.021吋)和3FSP微導(dǎo)管,先用導(dǎo)絲在T12和L1椎體平面前方偏右側(cè)或偏左側(cè)的腹主動(dòng)脈壁尋找腹腔動(dòng)脈的開口。見導(dǎo)絲“嵌入”或頭端形態(tài)改變說明已到腹腔動(dòng)脈開口。在透視監(jiān)視下,導(dǎo)管跟入腹腔動(dòng)脈內(nèi)導(dǎo)管前端選擇性插入腹腔動(dòng)脈,手推造影,總量2～3ml,行DSA證實(shí)后,按分組處理。術(shù)后拔管、結(jié)扎股動(dòng)脈、縫合皮膚,抗感染(青霉素20萬U/d,肌注,共3d)。送動(dòng)物房飼養(yǎng)。1.3.2不同劑量pva組、對(duì)照組肝動(dòng)脈給藥劑量及動(dòng)物數(shù)將30只新西蘭大白兔分成6組:高、較高、中、較低、低劑量PVA組、對(duì)照組(40%泛影葡胺2ml/只劑量肝動(dòng)脈給藥),各組劑量及動(dòng)物數(shù)見表1。1.3.3不同粒徑泛影葡胺溶液混懸液對(duì)肝有動(dòng)脈采血后肝損傷大鼠肝臟功能的影響①60%泛影葡胺溶液。②不同粒徑PVA的配制:使用時(shí)用40%泛影葡胺溶液將不同粒徑PVA配制成混懸液,然后一次性注入。手術(shù)對(duì)照組則從肝固有動(dòng)脈插管后給予40%泛影葡胺溶液2～3ml/只。③速眠新Ⅱ注射液0.2ml/kg。1.3.4動(dòng)物的活性測(cè)定指標(biāo)(1)觀察注藥后動(dòng)物的一般行為表現(xiàn);(2)測(cè)定肝功、腎功:對(duì)瀕死動(dòng)物采血測(cè)定肝功、腎功(或觀測(cè)點(diǎn)術(shù)前、1d、3d、7d、14d),測(cè)定指標(biāo)為丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、總膽紅素(TBiL)、直接膽紅素(DBiL)、總蛋白(TP)、清蛋白(ALB)、堿性磷酸酶(ALP)、γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶(γ-GT)、血肌酐(Cr)及尿素氮(BUN);(3)各組動(dòng)物的死亡數(shù)和動(dòng)物的存活時(shí)間;(4)病理組織學(xué)檢查:死亡動(dòng)物進(jìn)行尸檢,觀察心、肝、脾、肺、腎等重要器官的變化,并取有明顯病變者進(jìn)一步作病理檢查。1.4統(tǒng)計(jì)評(píng)估LD50采用Bliss法計(jì)算;生化指標(biāo)用多元方差分析(使用SPSS統(tǒng)計(jì)軟件,8.0版);病理觀察采用定性描述。2結(jié)果與討論2.1pva的給藥劑量對(duì)領(lǐng)域內(nèi)不良反應(yīng)的影響高劑量PVA組新西蘭大白兔給藥后出現(xiàn)精神不振、靜臥、不食、腹瀉等現(xiàn)象,均在44h內(nèi)死亡;較高劑量PVA組新西蘭大白兔(5只)死亡高峰時(shí)間在給藥后18～60h,而1只存活新西蘭大白兔精神不振、松毛、消瘦、活動(dòng)和飲食減少,第4天逐漸恢復(fù),觀察14d;中劑量PVA組新西蘭大白兔有3只死亡,死亡高峰時(shí)間在給藥后16～50h;較低劑量PVA組新西蘭大白兔僅1只死亡,死亡時(shí)間在給藥后40h;低劑量PVA組新西蘭大白兔給藥后無死亡,術(shù)后1～3d,精神欠佳、飲食及活動(dòng)減少,第4天基本恢復(fù),觀察14d;而對(duì)照組給藥后新西蘭大白兔未見明顯的不適反應(yīng),飲食、活動(dòng)正常。PVA肝動(dòng)脈插管給藥的LD50為1.94(1.65～2.28)mg·kg-1,結(jié)果見表1。實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示,隨著PVA給藥劑量的增大,動(dòng)物的不良反應(yīng)越明顯,死亡率增高,有較明顯的劑量依賴性;對(duì)照組新西蘭大白兔未見明顯的不適反應(yīng)。2.2alt、ast、alp、bun與對(duì)照組新西蘭大白兔的血生化指標(biāo)相比,各組新西蘭大白兔血中ALT、AST、ALP、BUN于術(shù)后1～3d明顯升高,7～14天上述指標(biāo)逐漸恢復(fù);TP、ALB、γ～GTTbiL、DbiL、BCr則變化不大。2.3pva顆粒及血管栓塞劑的制備目視觀察各種劑量PVA組新西蘭大白兔的損傷,均可見肝、膽囊、脾、胃、小腸組織損傷,其中以高、較高、中劑量PVA組明顯。高、較高、中劑量PVA組還見7只出現(xiàn)血性腹水、5只出現(xiàn)胃穿孔(3只進(jìn)入腹腔,2只進(jìn)入胸腔);較大、小劑量PVA組還各見1只14天出現(xiàn)透亮腹水,未見心、肺、腎等重要組織異常變化。對(duì)照組動(dòng)物心、肝、脾、肺、腎等重要組織未見異常變化。在顯微鏡下觀察各種劑量PVA組新西蘭大白兔的損傷情況,均可見肝組織損傷,表現(xiàn)為灶、片性壞死,肝細(xì)胞濁腫,血管、肝竇擴(kuò)張、充血,血栓形成,匯管區(qū)炎細(xì)胞侵潤;膽囊、胃、十二指腸粘膜壞死、脫落、出血、淤血,脾臟充血、出血;其中以高、較高、中劑量PVA組損傷程度重、范圍大。同時(shí)可見腎近曲小管壞死,而各劑量組腎組織梗死考慮與腎動(dòng)脈誤栓有關(guān),并非PVA毒性作用;低、較低、中、較高、高劑量PVA組動(dòng)物脾組織均出現(xiàn)損傷,但無明顯的劑量依賴關(guān)系。對(duì)照組動(dòng)物心、肝、脾、肺、腎等重要組織未見異常變化。PVA顆粒的制備和作用PVA顆粒是由聚乙烯醇泡沫與甲醛合制而成,即將聚乙烯醇溶于水中,借助于機(jī)械攪拌作用,加入制孔劑,使空氣分散于溶液中,形成泡沫,在酸(催化劑)的作用下,與甲醛縮合反應(yīng),固化而生成聚乙烯醇縮甲醛泡沫塑料,再經(jīng)粉碎得到產(chǎn)品。聚乙烯醇縮甲醛泡沫塑料性能取決于聚乙烯醇縮甲醛的縮合程度,而其反應(yīng)程度又取決于反應(yīng)物的濃度和反應(yīng)時(shí)間。溫度和催化劑用量決定反應(yīng)速度?？梢酝ㄟ^有效控制原料配比、反應(yīng)條件等來控制聚乙烯醇縮甲醛的分子結(jié)構(gòu),如乙?；⒘u基和縮甲醛基的比例,使泡沫材料具有不同的理化性能,滿足栓塞劑的要求。PVA顆粒為非水溶性,遇水性液體可有20%膨脹率,其生物相容性好,對(duì)機(jī)體無活性作用而不被吸收。PVA顆粒經(jīng)導(dǎo)管注入靶血管,發(fā)生機(jī)械性阻塞并誘發(fā)血栓形成,從而達(dá)到閉塞血管的作用。國內(nèi)PVA作為栓塞劑的研究始于鄒英華等,魏樹禮等制備了PVA與5Fu-PVA微球用于動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和肝癌患者的初步臨床應(yīng)用,獲得肯定效果。張宏文等進(jìn)行國產(chǎn)聚乙烯醇動(dòng)脈栓塞的實(shí)驗(yàn),發(fā)現(xiàn)國產(chǎn)PVA與進(jìn)口PVA具有相似的栓塞效果,適合作血管栓塞劑。聚乙烯醇顆粒的急性毒性反應(yīng)未見報(bào)道。鑒于PVA顆粒是介入栓塞材料的特殊劑型及特殊給藥途徑,我們采用與臨床相似的給藥方式,從新西蘭大白兔腹腔動(dòng)脈注入PVA來觀察聚乙烯醇顆粒的急性毒性反應(yīng)。我們發(fā)現(xiàn),PVA毒性的大小與劑量有較明顯依賴關(guān)系,隨著劑量的加大,新西蘭大白兔的死亡率增加,肝、膽囊、脾、胃、小腸等臟器的損害越嚴(yán)重,瀕死新西蘭大白兔血生化指標(biāo)有明顯的改變,而未見對(duì)照組動(dòng)物心、肝、脾、肺、腎等重要組織引起明顯毒性反應(yīng),推測(cè)PVA毒性的大小可能源于PVA的異位栓塞,而與PVA無關(guān)或關(guān)系不大?？梢姳狙芯拷Y(jié)果提示,和其他微球一樣,副作用的產(chǎn)生可能不是制劑本身,而是反流造成的非靶器官栓塞,如胃穿孔、膽囊壞死等,此觀點(diǎn)與北京軍區(qū)總院李京雨、廣州中醫(yī)藥大學(xué)鄧時(shí)貴觀點(diǎn)一致。3pva在醫(yī)藥中的應(yīng)用上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,PVA的急性