實(shí)驗(yàn)八、酵母菌子囊孢子的觀察目的要求學(xué)習(xí)并掌握酵母菌子囊孢子的觀察方法基本原理子囊孢子是子囊菌類(lèi)真菌有性生殖有性孢子。在酵母菌中,能否形成子囊孢子及其形態(tài)是酵母菌分類(lèi)鑒定的重要依據(jù)之一。酵母菌形成子囊孢子需要一定條件，所以對(duì)不同屬的酵母要選擇適合形成子囊孢子的培養(yǎng)基。麥?zhǔn)吓囵B(yǎng)基有利于釀酒酵母子囊孢子的形成。子囊孢子形成過(guò)程細(xì)胞（＋）細(xì)胞（－）管狀突起管狀突起接觸、融合質(zhì)配核配減數(shù)分裂4或8個(gè)子核結(jié)合原生質(zhì)形成孢子壁子囊孢子兩個(gè)鄰近的細(xì)胞各伸出一根管狀原生質(zhì)突起，然后相互接觸并融合而成一個(gè)通道，細(xì)胞質(zhì)結(jié)合(質(zhì)配)，兩個(gè)核在此通道內(nèi)結(jié)合(核配)，形成雙倍體細(xì)胞，并隨即進(jìn)行減數(shù)分裂，形成4個(gè)或8個(gè)子核，每一子核和其周?chē)脑|(zhì)形成孢子。含有孢子的細(xì)胞稱(chēng)為子囊，子囊內(nèi)的孢子稱(chēng)為子囊孢子。

圖1、S.cerevisiae（釀酒酵母）的生活史

——引自周德慶《微生物學(xué)教程》營(yíng)養(yǎng)體即可以單倍體，也可以二倍體形式存在

特點(diǎn)：①營(yíng)養(yǎng)體一般以出芽繁殖

②營(yíng)養(yǎng)體可以單倍體又可以二倍體形式存在

③特定條件下才可進(jìn)行有性生殖。

圖2、Schizosaccaromycesoctsporus（八孢裂殖酵母）的生活史

——引自周德慶《微生物學(xué)教程》營(yíng)養(yǎng)體只以單倍體形式存在

特點(diǎn)：①以無(wú)性的裂殖方式進(jìn)行繁殖②二倍體不能獨(dú)立生活，此階段很短。

圖3、Saccharomycodesludwiggi（路德類(lèi)酵母）的生活史

——引自周德慶《微生物學(xué)教程》營(yíng)養(yǎng)體只以二倍體形式存在

特點(diǎn)：①營(yíng)養(yǎng)體為二倍體，且不斷進(jìn)行芽殖②單倍體的子囊孢子在子囊內(nèi)發(fā)生接合③單倍體階段以子囊形式存在，不能獨(dú)立生活。

實(shí)驗(yàn)材料菌種：釀酒酵母培養(yǎng)基：豆芽汁瓊脂斜面麥?zhǔn)檄傊泵嫒芤夯蛟噭?%的孔雀綠水溶液0.5%的番紅水溶液95%的乙醇液。儀器或其他用具：載玻片顯微鏡等。實(shí)驗(yàn)方法菌種活化產(chǎn)孢培養(yǎng)制片染色脫色復(fù)染鏡檢菌種活化釀酒酵母菌種用接種環(huán)無(wú)菌挑取少許菌種25～28C培養(yǎng)24hr無(wú)菌操作接種在新鮮豆芽汁斜面新鮮豆芽汁斜面連續(xù)轉(zhuǎn)接種3次產(chǎn)孢培養(yǎng)活化酵母菌種用接種環(huán)無(wú)菌挑取少許菌種25～28C培養(yǎng)1周無(wú)菌接種在新鮮麥?zhǔn)檄傊泵嫔消準(zhǔn)檄傊泵娉Ｒ?guī)制片生理鹽水

1、滴生理鹽水

滴半滴生理鹽水在載玻片中央

挑取少量菌苔與生理鹽水混勻均勻涂布2、涂片或電吹風(fēng)吹干3、干燥室溫自然晾干固定、染色、脫色5%孔雀綠染液2、染色滴孔雀綠染液在菌膜上染色3min

95%酒精脫色30s,立即水洗95%酒精3、脫色1、固定通過(guò)火焰上方3次復(fù)染0.5%番紅水溶液1、滴番紅水溶液滴加數(shù)滴番紅染液在菌膜上

復(fù)染30s2、水洗