中藥復(fù)方柴胡質(zhì)量比較研究

柴胡是波形科植物柴胡或四葉樹科植物柴胡的干燥根，載于《中華人民共和國藥典》2010年版的第一部分。這是一種常見的中藥。性味辛、苦、微寒,歸肝、膽、肺經(jīng),具有疏散退熱、疏肝解郁、升舉陽氣的功效,主要用于感冒發(fā)熱,寒熱往來,胸脅脹痛,月經(jīng)不調(diào),子宮脫垂,脫肛等癥。太行山區(qū)為柴胡主產(chǎn)地,藥材資源豐富,品質(zhì)優(yōu)良。本研究對流通市場柴胡及太行山不同產(chǎn)地采集的柴胡進(jìn)行質(zhì)量比較研究分析,結(jié)果如下。1分散分析1.1藥品、藥材和藥品ZF-2型三用紫外儀(上海電子儀器廠)。硅膠G薄層板(青島海洋化工廠分廠);5批藥材(產(chǎn)地:甘肅;涉縣栽培;武安石河灣;山西吉縣;武安瑯礦);柴胡皂苷a對照品(中國藥品生物制品檢定所,批號:110777-200507);柴胡皂苷d對照品(中國藥品生物制品檢定所,批號:110778-200506);柴胡對照藥材(中國食品藥品檢定研究院,批號:120992-201108);乙酸乙酯、乙醇,甲醇均為分析純,水為純化水。1.2方法和結(jié)果1.2.1供試品溶液制備分別取各樣品柴胡粉末(過四號篩)約0.5g,加甲醇20mL,超聲處理10min,濾過,濾液濃縮至5mL,作為供試品溶液。1.2.2對照溶液的制備取柴胡皂苷a對照品與柴胡皂苷d對照品,加甲醇制成每mL各含0.5mg的混合溶液,作為對照品溶液。1.2.3標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的制備1.2.4預(yù)聚乙酯-乙醇法按照薄層色譜法(《中華人民共和國藥典》一部附錄ⅥB)試驗,吸取上述溶液各5μL,分別點于同一硅膠G薄層板上,以乙酸乙酯-乙醇-水(8∶2∶1)為展開劑,展開,取出,晾干,噴以2%對二甲氨基苯甲醛的40%硫酸溶液,在60℃加熱至斑點顯色清晰,分別置日光和紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中,在與對照藥材色譜和對照品色譜相應(yīng)的位置上,顯相同的熒光斑點。見封3,圖1。2柴胡霉a和柴胡霉d的測定2.1藥品與藥材藥物Waterse2695高效液相色譜儀(美國);Empower工作站;waters2498型紫外檢測器;XS105型電子天平(瑞士梅特勒)。甲醇、濃氨均為分析純,乙腈為色譜純,水為純化水,柴胡皂苷a對照品(中國藥品生物制品檢定所,批號:110777-200507);柴胡皂苷d對照品(中國藥品生物制品檢定所,批號:110778-200506);5批藥材(產(chǎn)地:甘肅;涉縣栽培;武安石河灣;山西吉縣;武安瑯礦)。2.2方法和結(jié)果2.2.1固定相和柱溫相以乙腈為流動相A,以水為流動相B,進(jìn)行梯度洗脫,0~50min,A:25%~75%,B:90%~10%;50~55min,A:25%;B為75%,延時10min,SunfireC18(250mm×4.6mm,5μm)為固定相,波長為210nm,柱溫:30℃,進(jìn)樣量:20μL。在上述色譜條件下,對照品和供試品的色譜圖見圖2。2.2.2對照品溶液的制備精密稱取柴胡皂苷a對照品0.01053g與柴胡皂苷d對照品0.01323g,置25mL量瓶中,用甲醇溶解并稀釋至刻度,搖勻,作為混合對照品溶液。2.2.3超聲法提取溶劑分別取各樣品柴胡細(xì)粉(過四號篩)約0.5g,精密稱定,置具塞錐形瓶中,加入5%濃氨試液的甲醇溶液25mL,密塞,30℃水溫超聲處理30min,濾過,用甲醇20mL分2次洗滌容器及藥渣,洗液與濾液合并,回收溶劑至干。殘渣加甲醇溶解,轉(zhuǎn)移至5mL量瓶中,加甲醇至刻度,搖勻,濾過,取續(xù)濾液即得。2.2.4柴胡皂苷d標(biāo)準(zhǔn)曲線取上述混合對照品溶液,分別進(jìn)樣5、10、20、30、50μL于高效液相色譜儀中,按上述色譜條件進(jìn)行峰面積測定,以對照品濃度(mg/mL)為橫坐標(biāo),峰面積為縱坐標(biāo),進(jìn)行線性回歸,柴胡皂苷d回歸方程:Y=5E+06X+36462,r=0.9999,結(jié)果表明柴胡皂苷d在0.1323mg/mL~1.323mg/mL濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。柴胡皂苷a回歸方程:Y=9E+06X+50948,r=0.9999,結(jié)果表明柴胡皂苷d在0.1053mg/mL~1.053mg/mL濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。2.2.5方法的標(biāo)準(zhǔn)偏差精密吸取上述混合對照品溶液20μL,重復(fù)進(jìn)樣5次,測定峰面積,柴胡皂苷a、柴胡皂苷d的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)分別為0.2%、0.2%。2.2.6柴胡皂苷a和柴胡皂苷d含量測定取同一批供試品5份按上述供試品溶液制備方法和色譜條件進(jìn)行測定,測得柴胡皂苷a、柴胡皂苷d的含量分別為1.211mg/g、2.842mg/g。2.2.7穩(wěn)定性試驗2.2.8加樣回收率測定精密稱取6份已知含量的供試品細(xì)粉約0.25g,再分別精密加混合對照品溶液1mL,按供試品溶液的制備方法和色譜條件下進(jìn)行測定,柴胡皂苷a、d平均回收率為97.26%、97.83%,RSD分別為0.9%、0.7%。結(jié)果見表1。2.2.9樣品含量的測量取樣品,按上述供試品溶液制備方法制備,精密量取供試品溶液和對照品溶液20μL,注入高效液相色譜儀測定。結(jié)果見表2。3不同品種發(fā)揮柴胡皂苷a、d含量的比較同“1.2.1供試品溶液的制備”制成對照藥材溶液。精密吸取同一批供試品溶液20μL,每隔2h進(jìn)樣,共測定5次,其RSD為1.2%。3.1根據(jù)薄層色譜發(fā)現(xiàn),與柴胡對照藥材、混合對照品比較,5批柴胡在相應(yīng)的位置上均含有有效活性成分柴胡皂苷a、d,其中山西吉縣產(chǎn)柴胡斑點清晰,顏色深,其次是武安石河灣產(chǎn)柴胡、涉縣產(chǎn)栽培柴胡、武安瑯礦產(chǎn)柴胡、甘肅產(chǎn)膜緣柴胡,其他色斑比較深淺有所不同,說明5批柴胡藥材所含成分有所差異。3.2通過采用液相色譜法定量測定柴胡皂苷a、d含量比較發(fā)現(xiàn),涉縣栽培柴胡比甘肅產(chǎn)膜緣柴胡中柴胡皂苷a、d的含量高出幾倍,太行山區(qū)產(chǎn)柴胡皂苷a、d含量比《中華人民共和國