酸性磷酸酶染色液(硝酸鉛法)簡(jiǎn)介：酸性磷酸酶(acidphosphatase,ACP)分布極廣泛，遍布各種組織，主要存在于細(xì)胞的溶酶體內(nèi)，所以常作為溶酶體標(biāo)志酶。溶酶體外的酸性磷酸酶存在于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和胞質(zhì)內(nèi)。各種動(dòng)物中的酸性磷酸酶各有不同，酸性磷酸酶的適宜pH為4.5~5.5。Leagene酸性磷酸酶染色液以鄉(xiāng)甘油磷酸鈉為底物，在酸性pH下被酸性磷酸酶水解釋放出磷酸鹽，遇鉛離子則生成磷酸鉛沉淀，再被S2+置換，最終生成硫化鉛棕黑色沉淀。酸性磷酸酶的一般抑制劑為氟化物、磷酸根離子。對(duì)某些酸性磷酸酶來(lái)講，CU2+、酒石酸根離子和四氯化碳以及醛類(lèi)也都是抑制劑，Mn2+為該酶的激活劑。冰凍切片和石蠟切片均可，但多用冰凍切片。臨床上，該染色法對(duì)前列腺癌和其他臟器的轉(zhuǎn)移性前列腺癌呈強(qiáng)陽(yáng)性反應(yīng)，霍奇金淋巴瘤、胃癌、肺癌、乳腺癌、舌表皮性癌、多核巨細(xì)胞瘤的瘤細(xì)胞質(zhì)也呈強(qiáng)陽(yáng)性反應(yīng)，Ewing肉瘤、成骨肉瘤等呈陰性反應(yīng)。組成：名稱(chēng)編號(hào)DE00162x50mlStorage試劑(A):ACP孵育液50ml4°C避光試劑(B):ACP硫化液2x1mlRT避光試劑(C):ACP對(duì)照液10ml4C避光使用說(shuō)明書(shū)1份自備材料：1、 蒸餾水2、 恒溫箱3、 封片劑操作步驟(僅供參考):(一)冰凍切片染色1、 冰凍切片至蒸餾水。2、 切片入ACP孵育液，置于溫箱，浸染。3、 入蒸餾水中洗，以去除未被吸附的鉛。4、 在上述過(guò)程中配制ACP硫化工作液即取試劑(B)用蒸餾水稀釋?zhuān)礊锳CP硫化工作液，即配即用。切片入硫化工作液，孵育。5、 流水沖洗，蒸餾水洗。

6、（可選）核固紅復(fù)染細(xì)胞核，蒸餾水洗。甘油明膠封片。（二）石蠟切片染色1、 石蠟切片脫蠟至蒸餾水。切片入ACP孵育液，置于37°C溫箱，浸染，可以延長(zhǎng)至24h。2、 入蒸餾水中洗，以去除未被吸附的鉛。3、 在上述過(guò)程中配制ACP硫化工作液即取試劑（B）用蒸餾水稀釋?zhuān)礊锳CP硫化工作液，即配即用。切片入硫化工作液，孵育。4、 流水沖洗3~5min，蒸餾水洗。5、 （可選）核固紅復(fù)染細(xì)胞核，蒸餾水洗。6、 石蠟切片脫水，常規(guī)透明，中性樹(shù)膠封片。染色結(jié)果：酶活性部位黑色硫化鉆沉淀細(xì)胞核根據(jù)復(fù)染液不同而不同明性對(duì)照（可選）:將切片置入試劑（C）--ACP對(duì)照液中，室溫1~2h孵育，其余步驟相同，結(jié)果為陰性。注意*項(xiàng)：1、 ACP孵育液、ACP硫化液易失效，最好分成小分儲(chǔ)存。ACP硫化液具有腐蝕性。2、 對(duì)冰凍切片染色時(shí)，應(yīng)減少切片在室溫暴露的時(shí)間。3、 樣本需新鮮，取材后應(yīng)立即處理，否則會(huì)影響酶的活性。4、 組織固定需在41冰箱進(jìn)行，時(shí)間不宜超過(guò)24h,否則酶活性會(huì)減弱或消失。5、 組織在石蠟包埋時(shí)，溫度不宜高于56C。應(yīng)使用熔點(diǎn)為52~54C的石蠟進(jìn)行浸蠟，浸蠟時(shí)間要短，否則酶活性會(huì)減弱或消失。6、 不純的二甲苯會(huì)分解黑色沉淀，宜選用AR級(jí)以上的