課題1DNA的粗提取與鑒定一、提取DNA的方法（一）思路：選用一定的物理或化學(xué)方法分離具有不同物理或化學(xué)性質(zhì)的生物大分子。對于DNA的粗提取而言，就是要利用DNA與RNA、蛋白質(zhì)和脂質(zhì)等在物理和化學(xué)性質(zhì)方面的差異，提取DNA，去除其他成分。（二）各大分子的理化性質(zhì)1、DNA的溶解性（1）DNA和蛋白質(zhì)等其他成分在不同濃度的NaCl溶液中溶解度不同。利用這一點(diǎn)，選擇適當(dāng)?shù)柠}濃度就能使DNA充分溶解，而使雜質(zhì)沉淀，或者相反，以達(dá)到分離目的。

（2）DNA不溶于酒精溶液，但是細(xì)胞中的某些蛋白質(zhì)則溶于酒精。利用這一原理，可以將DNA與蛋白質(zhì)進(jìn)一步分離。思考：①在什么濃度下，DNA的溶解度最??？DNA在NaCl溶液中的溶解度是如何變化的？②如何通過控制NaCl溶液的濃度使DNA在鹽溶液中溶解或析出？2、DNA對酶、高溫和洗滌劑的耐受性

蛋白酶能水解蛋白質(zhì)，但是對DNA沒有影響。大多數(shù)蛋白質(zhì)不能忍受60~80℃的高溫，而DNA在80℃以上才會發(fā)生變性。洗滌劑能夠瓦解細(xì)胞膜，但對DNA沒有影響。DNA的鑒定：在沸水浴的條件下，DNA遇二苯胺會被染成藍(lán)色，因此，二苯胺可以作為鑒定DNA的試劑。二、實驗設(shè)計（一）實驗材料的選取選用DNA含量相對較高的生物組織，成功的可能性較大。如菜花（花椰菜）、魚卵、雞血等。（二）破碎細(xì)胞，獲取含DNA的濾液閱讀教材，思考以下問題：1、如何破碎動物細(xì)胞？2、為什么加入蒸餾水能使雞血細(xì)胞破裂？3、如何破碎植物細(xì)胞？4、在破碎植物細(xì)胞時，加入洗滌劑和食鹽的作用分別是什么？5、在破碎植物細(xì)胞時，如果研磨不充分，會對實驗結(jié)果產(chǎn)生怎樣的影響？6、此步驟獲得的濾液中可能含有哪些細(xì)胞成分？7、你如何設(shè)置對照實驗來探究生物材料與洗滌劑、食鹽用量的比例對實驗結(jié)果的影響？8、你如何探究用不同的洗滌劑（如洗發(fā)香波、沐浴液、洗潔精）來提取DNA時可能產(chǎn)生的不同效果？1、如何破碎動物細(xì)胞？

動物細(xì)胞的破碎較容易，可讓動物細(xì)胞通過吸水膨脹，并伴隨玻棒攪拌加速細(xì)胞破裂，最后過濾收集濾液即可。2、為什么加入蒸餾水能使雞血細(xì)胞破裂？

蒸餾水對于雞血細(xì)胞來說是一種低滲液體，水分可以大量進(jìn)入血細(xì)胞內(nèi)，使血細(xì)胞脹裂，再加上攪拌的機(jī)械作用，就加速了雞血細(xì)胞的破裂細(xì)胞膜和核膜的破裂，從而釋放出DNA。3、如何破碎植物細(xì)胞？

材料是植物細(xì)胞時，先用洗滌劑溶解細(xì)胞膜，最后過濾收集濾液。如，提取洋蔥的DNA時，在切碎的洋蔥中加入一定的洗滌劑和食鹽，進(jìn)行充分的攪拌和研磨，過濾后收集研磨液。4、在破碎植物細(xì)胞時加入洗滌劑和食鹽的作用分別是什么？

洗滌劑是一些離子去污劑，能溶解細(xì)胞膜，有利于DNA的釋放；食鹽的主要成分是NaCl，有利于DNA的溶解。5、在破碎植物細(xì)胞時，如果研磨不充分，會對實驗結(jié)果產(chǎn)生怎樣的影響？

研磨不充分會使細(xì)胞核內(nèi)的DNA釋放不完全，提取的DNA量變少，影響實驗結(jié)果，導(dǎo)致看不到絲狀沉淀物、用二苯胺鑒定不顯示藍(lán)色等。6、此步驟獲得的濾液中可能含有哪些細(xì)胞成分？

除了含有DNA外，可能還含有核蛋白、多糖和RNA等雜質(zhì)。7、你如何設(shè)置對照實驗來探究生物材料與洗滌劑、食鹽用量的比例對實驗結(jié)果的影響？8、你如何探究用不同的洗滌劑（如洗發(fā)香波、沐浴液、洗潔精）來提取DNA時可能產(chǎn)生的不同效果？（三）去除濾液中的雜質(zhì)閱讀教材，了解去除雜質(zhì)的三個方案，并思考旁思欄中的兩個問題。方案一：用2mol/L的NaCl溶液溶解DNA，去除雜質(zhì)。溶液，去除雜質(zhì)。方案二：用嫩肉粉去除蛋白質(zhì)。方案三：利用高溫去除蛋白質(zhì)。為什么反復(fù)地溶解與析出DNA，能夠去除雜質(zhì)？用高鹽濃度的溶液溶解DNA，能除去在高鹽中不能溶解的雜質(zhì)；用低鹽濃度使DNA析出，能除去溶解在低鹽溶液中的雜質(zhì)。因此，通過反復(fù)溶解與析出DNA，就能夠除去與DNA溶解度不同的多種雜質(zhì)。方案二與方案三的原理有什么不同？方案二是利用蛋白酶分解雜質(zhì)蛋白，從而使提取的DNA與蛋白質(zhì)分開；方案三利用的是DNA和蛋白質(zhì)對高溫耐受性的不同，從而使蛋白質(zhì)變性，與DNA分離。（四）DNA的析出與鑒定

將處理后的溶液過濾，加入與濾液體積相等的、冷卻的酒精溶液，靜置2~3分鐘，溶液中會出現(xiàn)白色絲狀物。1、DNA析出：2、鑒定：現(xiàn)配二苯胺試劑沸水水浴5分鐘三、注意事項：P56~57頁四、練習(xí)

提取DNA的第一步是材料的選取，其目的是一定要選取DNA含量較高的生物材料，否則會由于實驗過程中或多或少的損失而造成檢測的困難；第二步是DNA的釋放和溶解，這一步是實驗成功與否的關(guān)鍵，要盡可能使細(xì)胞內(nèi)的DNA全部溶解；第三步是DNA的