營養(yǎng)型新月組培快繁技術(shù)研究

玫瑰是薔薇科的一種多年生草本植物。17世紀傳入歐洲。它現(xiàn)在在世界各地銷售。它是世界上培育的多年生木本花之一。在國外,月季花卉工廠化育苗技術(shù)已趨成熟,在某些國家和地區(qū)已成為獲得巨額外匯的支柱產(chǎn)業(yè)。我國月季的組織培養(yǎng)技術(shù)產(chǎn)業(yè)化研究起步較晚,與國外相比差距較大。該試驗通過對月季組織培養(yǎng),研究莖段外植體的選擇及不同種類、質(zhì)量濃度的植物激素配比對莖段快繁的影響,以期找出月季快繁的最適培養(yǎng)基配方,為完善組培快繁技術(shù)、大規(guī)模工廠化生產(chǎn)名優(yōu)月季品種奠定基礎(chǔ)。1試驗材料和方法1.1試驗材料月季的帶芽枝條作為試驗材料。1.2芽孢芽孢分及其誘導(dǎo)分增殖培養(yǎng)a.外植體的消毒取帶有飽滿、未萌發(fā)側(cè)芽的莖段作為外植體,先經(jīng)流水沖洗l0min后,用洗衣粉水浸泡l0min,再在流水下沖洗凈,接著在無菌條件下,用75%乙醇浸泡30s后,用無菌水沖洗3~4次,然后置于0.1%升汞溶液中處理7~10min,最后用無菌水沖洗4~6次,放到無菌濾紙上吸干水分,切成每段長1.0~l.5cm,接種于芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上。b.不定芽的誘導(dǎo)和分化根據(jù)枝條生長部位,分基部、中段和梢部3個部分,分別接種于分化培養(yǎng)基上,基本培養(yǎng)基為MS+蔗糖30g/L+瓊脂6.0g/L(pH值5.8),每瓶接種5個帶芽莖段,每個配方接種5瓶。培養(yǎng)條件為:培養(yǎng)溫度(24±1)℃,光照強度1500lx,光照時數(shù)14h/d,30d后統(tǒng)計再生情況。c.不定芽的增殖在增殖過程中是由芽叢分成單芽來實現(xiàn)快速繁殖的。將萌芽切下轉(zhuǎn)入繼代培養(yǎng)基,進行增殖培養(yǎng),培養(yǎng)條件同上。d.無菌嫩莖的生根培養(yǎng)取2~3cm長的月季無菌嫩莖,按照無菌要求接種在生根培養(yǎng)基上,分別置于13、17、21、25、29℃等5種不同溫度的光照培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng),光照時間為14h/d,光照強度為2000lx。每一處理為20瓶培養(yǎng)物。e.馴化及移栽當根長1~2cm時移栽,先將瓶口紙打開,倒入少量水適應(yīng)2~3d后,將帶根的小植株從瓶中取出,洗凈根部培養(yǎng)基,移栽到裝有培養(yǎng)土的營養(yǎng)缽中,保持較高溫度。2試驗結(jié)果與分析2.1業(yè)務(wù)激素對3種外生菌在培養(yǎng)基上的生長的影響將月季的莖段接種在MS附加不同激素的誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基上,5d后側(cè)芽開始膨大,15d左右分化芽逐漸形成幼苗,幼苗繼代在相應(yīng)的培養(yǎng)基上,形成叢生不定芽。表1為月季中部枝條在不同激素的培養(yǎng)基上的生長狀況。由表1可以看出,在細胞分裂素BA和KT中,以BA的效果最好,BA的質(zhì)量濃度在0.5~1.0mg/kg比較合適。在MS+BA1.0mg/kg的培養(yǎng)基上,不定芽的分化率較高,達72%。生長素以NAA優(yōu)于IBA。2.2d結(jié)構(gòu)模型將分化的不定芽在相應(yīng)的培養(yǎng)基中進行繼代培養(yǎng),繼代周期為20d,結(jié)果見表2。由表2可知,在MS+BA1.0mg/kg+NAA0.5mg/kg培養(yǎng)基中繼代培養(yǎng),可保證較高的增殖率和良好的生長狀態(tài)。2.3第713d,下充液芽萌發(fā)從誘導(dǎo)啟動的時間看,在枝條中部的帶芽莖段,通常在接種后的第5d左右芽就萌發(fā),而基部和梢部的莖段,芽的萌發(fā)要在第11~13d才開始,中部莖段芽的誘導(dǎo)率(48%)也要高于基部和梢部的莖段(36%)。2.4不同培養(yǎng)基的誘導(dǎo)生根性能月季組培苗生根常用的激素有IBA和NAA,采用1/2MS作基本培養(yǎng)基。將生長良好、高2~3cm的健壯的月季嫩芽,接種到1/2MS+IBA和1/2MS+NAA兩種生根培養(yǎng)基上,每一配方接種30個嫩芽。5~7d開始長出新根,經(jīng)20d培養(yǎng)后長成完整植株,各種培養(yǎng)基對生根的影響差異明顯(見表3)。由表3可以看出,NAA和IBA對月季的誘導(dǎo)生根都有較好的效果,在1/2MS培養(yǎng)基附加NAA或IBA0.1~1.5mg/kg均可誘導(dǎo)不定根的產(chǎn)生,生根63.3%~93.3%。比較誘導(dǎo)率和根的生長特點,發(fā)現(xiàn)月季芽誘導(dǎo)生根需要一定質(zhì)量濃度的生長素,質(zhì)量濃度過低,生根的誘導(dǎo)率低,但質(zhì)量濃度過高,往往在根與芽之間形成較多的愈傷組織,不利于植株的生長。從該研究的結(jié)果可看出,0.50mg/kg的生長素質(zhì)量濃度誘導(dǎo)生根的效果最佳。比較NAA與IBA誘導(dǎo)生根的效果,發(fā)現(xiàn)NAA要優(yōu)于IBA。在含0.5mg/kgIBA的培養(yǎng)基中,誘導(dǎo)率為76.7%;在含0.5mg/kgNAA的培養(yǎng)基中,誘導(dǎo)率為93.3%。2.5溫度對嫩莖生根的影響無菌嫩莖接種到生根培養(yǎng)基上以后,逐步形成帶有根系的植株。接種后20d觀察嫩莖生根情況(統(tǒng)計1cm以上的新根數(shù)目)。結(jié)果發(fā)現(xiàn),在不同的溫度下其生長情況有很大的差異。在21℃時嫩莖生根數(shù)目最多,而且嫩莖生根的百分率也最高,然而在溫度低于或高于21℃時,嫩莖生根數(shù)目均較21℃時減少,同時嫩莖生根的百分率降低,呈現(xiàn)出一個明顯的生根數(shù)量變化趨勢。由此說明生根階段對溫度的變化非常敏感,且在21℃時生根效果最好。3苗木移栽工藝月季組織培養(yǎng)過程中,合適的激素配比的選擇除了要考慮增值系數(shù)外,還應(yīng)考慮不定芽的質(zhì)量。增值系數(shù)過大,往往會導(dǎo)致芽生長細弱、節(jié)間拉長等現(xiàn)象,出現(xiàn)不易生根或移栽成活率下降等問題。根苗移栽時間的選擇很重要,過早或過晚都不利再生苗的成活。移栽前進行短期的開瓶煉苗,可增加幼苗對外界環(huán)境的適應(yīng)能力,提高了成活率。4不同濃度g和b.生長素組g的濃度對芽胞分裂的影響a.在月季初代培養(yǎng)中以細胞分裂素BA1.0mg/kg時加生長素NAA0.1mg/kg是比較適