藥食兩用法提取丁香揮發(fā)油的研究

丁香是桃金娘科植物的干燥花蕾。主產于坦桑尼亞、馬來西亞、印度尼西亞等地,我國廣東省有少量出產。丁香中的主要成分為揮發(fā)油,丁香酚占揮發(fā)油的78%～98%,其他還有丁香酚醋酸酯、石竹烯、甲基戊基甲酮等。丁香還含有色原酮、黃酮和三萜類成分。丁香揮發(fā)油具有抑菌,抗炎,鎮(zhèn)痛、止瀉、抗氧化、抑制腫瘤等作用。丁香酚和丁香酚醋酸酯對花生四烯酸、腎上腺素和膠原蛋白所誘導的血小板聚集有強烈抑制作用,并呈劑量依賴關系。丁香揮發(fā)油的提取方法有很多種,本試驗采用不同提取方法,以提取的揮發(fā)油量及揮發(fā)油中丁香酚的含量為指標,篩選從丁香中提取揮發(fā)油的最佳方法。1萃取裝置類化藥物TECHCOMP7890氣相色譜儀,UPPER色譜數(shù)據(jù)作站;HA221-50-06型超臨界萃取裝置(江蘇省南通市華安超臨界萃取有限公司);丁香藥材(福州市藥材公司,經福建醫(yī)科大學藥學院天然藥物學系石冬梅講師鑒定);丁香酚(eugenol)對照品(中國藥品生物制品檢定所,批號0725-20008);二氧化碳(福州星虹化工有限公司,純度≥99.5%),其他試劑均為分析純。2方法2.1色譜-質譜條件色譜柱:以ChomosorbW(80～100目)為擔體,10%聚乙二醇(PGE)-20M為固定相。不銹鋼色譜柱(3mm×2m),柱溫:190℃,汽化室溫度:220℃,FID檢測器溫度200℃,載氣(氮氣)流速:60mL·min-1。理論板數(shù)按丁香酚峰計算應不低于1500。2.2揮發(fā)油的提取對照品溶液的制備:取丁香酚對照品適量,精密稱定,加正己烷制成每1mL含2mg的溶液,即得。供試品溶液的制備:分別取各提取方法所得揮發(fā)油,精密稱定,加正己烷制成每1mL含2.5mg的溶液。分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液和1μL,注入氣相色譜儀,測定,即得。色譜圖見圖1。2.3揮發(fā)油的提取取丁香藥材粉碎成20目粗粉,取100g置燒瓶中,加8倍量水浸泡24h,連接揮發(fā)油測定器,加熱,保持微沸5h,至揮發(fā)油的量不再增加,收取揮發(fā)油。用無水硫酸鈉干燥,測定體積。2.4微波輻照的處理取丁香藥材粉碎成20目粗粉,取100g置平底燒瓶中,加入8倍量正己烷,燒瓶放入微波爐中,微波輻照15s后取出,用玻棒充分攪動并用水冷卻至室溫,重新放入微波爐中輻照。如此重復5次,傾出正己烷提取液,用少量正己烷洗滌藥渣,洗滌液與提取液合并,濾過,濾液于73℃水浴回收正己烷,然后置干燥箱中73℃干燥2h。測定體積。2.5正己烷的回收取丁香藥材粉碎成20目粗粉,取100g置平底燒瓶中,加入8倍量正己烷,超聲處理15min,放置至室溫,再稱定重量,用正己烷補足減失的重量,搖勻,濾過,濾液于73℃水浴回收正己烷,然后置干燥箱中73℃干燥2h。測定體積。2.6溶劑提取法2.6.1提取正己烷組取丁香藥材粉碎成20目粗粉,取100g置燒瓶中,加正己烷加熱回流提取2次,第1次5倍量正己烷提取1.5h,第2次3倍量正己烷提取1h,提取液合并,濾過,濾液于73℃水浴回收正己烷,然后置干燥箱中73℃干燥2h。測定體積。2.6.2乙醇-乙醇法取丁香藥材粉碎成20目粗粉,取100g置燒瓶中,加乙醇加熱回流提取2次,第1次5倍量乙醇提取1.5h,第2次3倍量乙醇提取1h,提取液合并,濾過,濾液加5%的氫氧化鈉調pH9～10;回收乙醇,濃縮液用等體積乙醚萃取3次,除去脂溶性雜質,水層用6mol·L-1鹽酸酸化,調溶液pH5。用等體積乙醚萃取3次,合并萃取液,用無水硫酸鈉干燥,水浴回收乙醚。測定體積。2.7氧化碳的萃取(SFE-CO2)萃取法取丁香藥材粉碎成20目粗粉,取100g置萃取釜中萃取,萃取壓力:20MPa;萃取溫度:40℃;解析壓力:6MPa;解析溫度:40℃;二氧化碳的流量:22L·h-1·kg-1;萃取時間:3h。收集萃取液,測定體積。3結果以上6種提取方法所得揮發(fā)油的量,揮發(fā)油中丁香酚的含量,丁香酚總量及所得揮發(fā)油的色澤,見表1。4不同提取方法的比較結果,對于提取丁香中揮發(fā)油通過薄層色譜,以上6種方法得到的丁香揮發(fā)油,其主要斑點一致,都含有丁香酚,氣味也一致,說明以上6種方法所得揮發(fā)油的主要成分一致。超臨界二氧化碳萃取法提油率及丁香酚總量均最高,而且揮發(fā)油中丁香酚的含量較高,色澤較淺。超臨界二氧化碳萃取法因為提取率高,提取時間較短,提取溫度較底,而且無溶劑殘留,是提取丁香中揮發(fā)油的首選方法。水蒸汽蒸餾法、超聲波提取法、正己烷提取法3種方法得到的揮發(fā)油中丁香酚總量無明顯差異,水蒸汽蒸餾法與超聲波提取法得到的揮發(fā)油量的差異也不明顯,但正己烷提取法提取出的揮發(fā)油量較高,主要是因為加熱時間較長,提取溫度較高,所提取出的揮發(fā)油含有雜質較多所致。考慮到在工業(yè)化生產中水蒸汽蒸餾法工藝簡單易行,所需成本也較低,因此在這3種方法中水蒸汽蒸餾法較優(yōu)。比較揮發(fā)油的量及丁香酚總量,微波浸提法優(yōu)于水蒸汽蒸餾法。本試驗使用的微波發(fā)生裝置是