克乳痛制劑對(duì)大鼠乳腺增生的抑制作用

乳房增生的臨床特征是乳房腫瘤和早期乳房腫脹。我們用調(diào)攝沖任,疏肝理氣之中藥克乳痛制劑治療本病,臨床療效顯著。當(dāng)體內(nèi)的女性激素平衡失常達(dá)到一定程度,雌激素產(chǎn)生過多,導(dǎo)致乳腺的導(dǎo)管和小葉在結(jié)構(gòu)上的退行性和進(jìn)行性變化,引起乳腺增生。本研究用長(zhǎng)期大劑量雌二醇刺激造成大鼠乳腺增生模型,探討其作用機(jī)理。1材料和方法1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物健康雌性未孕的大鼠50只,體重190～200g,由南京中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。1.2特效藥克乳痛是由鹿角片、丹皮、蛇床子、牡蠣等組成的中藥復(fù)方制劑,口服,人日用量為4.5g,由江蘇省中醫(yī)院制劑部提供。1.3模型方法隔日肌注苯甲酸雌二醇0.5mg/kg,共15次,造成乳腺增生模型,繼續(xù)4周至實(shí)驗(yàn)結(jié)束。1.4各組大鼠灌胃藥物給藥方案取SD大鼠50只,隨機(jī)分成5組(每組10只):正常對(duì)照組(Z組),模型對(duì)照組(M組),克乳痛Ⅰ組(KⅠ組),克乳痛Ⅱ組(KⅡ組),克乳痛Ⅲ組(KⅢ組)。分別用克乳痛0.5g/kg,1.0g/kg,2.0g/kg,于注射激素30天末次日開始,灌胃治療4周,給藥方法同Z組。Z組蒸餾水灌胃,灌胃容量10ml/kg,1次/天,至實(shí)驗(yàn)結(jié)束。1.5免疫組化法檢測(cè)肝胰腺組織中hb每只大鼠選擇最大乳腺組織2個(gè),經(jīng)乳頭向基底部最大切面取材,10%福爾馬林固定,常規(guī)石蠟包埋、切片,厚度4um,分別進(jìn)行,(1)HE染色:低倍鏡下切片內(nèi)至少有3個(gè)小葉,計(jì)數(shù)每個(gè)小葉腺泡數(shù),求其平均值;高倍鏡觀察導(dǎo)管上皮增生數(shù),小葉中腺泡數(shù)。(2)用免疫組化方法觀察ER和PR的變化(試劑購自DaKo公司)。ER(SC8001),PR(SC8003),工作濃度1:200,ABC法,并設(shè)陽性和陰性對(duì)照。2克乳痛制劑對(duì)大鼠乳腺癌組織增殖的影響正常組乳腺導(dǎo)管上皮細(xì)胞排列規(guī)則,管腔無擴(kuò)張,小葉較少,小葉中腺泡數(shù)3～4個(gè),核仁不明顯。模型組激素刺激4周末各組大鼠乳腺導(dǎo)管上皮細(xì)胞增生明顯,局部呈乳頭狀或合體狀并層數(shù)增多,核仁明顯,管腔明顯擴(kuò)張,內(nèi)有脫落上皮細(xì)胞及分泌物,小葉明顯增多,小葉中腺泡數(shù)增生明顯,間質(zhì)出血、水腫,纖維組織增生。至此,大鼠乳腺組織增生模型建立。分組處理,4周末M組大鼠乳腺組織增生進(jìn)一步加重,而KⅠ、KⅡ、KⅢ組與Z組接近,乳腺導(dǎo)管上皮排列基本規(guī)則,擴(kuò)張明顯減輕,小葉體積縮小,小葉中腺泡數(shù)也明顯減少,纖維結(jié)締組織增生明顯減輕,提示克乳痛制劑有減輕異常激素引起的大鼠乳腺增生的作用。各組乳腺導(dǎo)管上皮增生及小葉中腺泡數(shù)比較見表1。表1提示,導(dǎo)管上皮增生數(shù)、腺泡數(shù),M組與Z組相比有極顯著差異。KⅠ組與M組相比有顯著差異,KⅡ組、KⅢ組則有極顯著差異。陽性判斷標(biāo)準(zhǔn)為乳腺導(dǎo)管和小葉上皮細(xì)胞核和/或細(xì)胞漿著色時(shí)為陽性。陽性細(xì)胞率<20%者為(-);陽性細(xì)胞率不足20%,但局部區(qū)域有少量較強(qiáng)著色的陽性細(xì)胞者為(±);陽性細(xì)胞率>20%者且陽性細(xì)胞數(shù)由少至多,著色由淺至深為+,++,+++,++++,并分別計(jì)1、2、3、4、5、6分,積分愈高表明ER、PR含量愈高?？巳橥磳?duì)各組乳腺增生ER、PR的影響見表2。表2提示:M組與Z組比較ER、PR受體積分值有顯著差異,KⅠ、KⅡ、KⅢ與M組相比也分別有顯著和極顯著的差異。3克乳痛對(duì)大鼠陰道組織形態(tài)的影響乳腺組織是女性激素的靶器官,乳腺的生長(zhǎng)發(fā)育直接受女性激素的影響。雌激素的過度刺激使乳腺組織從正常生長(zhǎng)到增生乃至腫瘤形成。本實(shí)驗(yàn)用長(zhǎng)期大量雌激素刺激大鼠乳腺組織,成功地復(fù)制大鼠乳腺增生模型。而克乳痛治療組不僅使大鼠乳腺導(dǎo)管上皮細(xì)胞層次、小葉數(shù)、腺泡數(shù)均較M組明顯減少,形態(tài)接近正常,表明克乳痛對(duì)大鼠乳腺導(dǎo)管和小葉上皮細(xì)胞的異常增殖有一定的抑制作用,并促進(jìn)正常分化和成熟,從而改善細(xì)胞的異常代謝。其中尤以中、大劑量組效果較佳。一般認(rèn)為ER激素受體是激素對(duì)靶器官發(fā)揮生物效應(yīng)的媒介,有報(bào)道說當(dāng)雌二醇異常升高時(shí)經(jīng)ER的介導(dǎo),通過完整的ER系統(tǒng),使ER、PR合成進(jìn)一步增加,對(duì)雌二醇的依賴性、敏感性同步增加,引起乳腺上皮細(xì)胞的增生和細(xì)胞功能活躍。與我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致。當(dāng)大鼠乳腺組織形態(tài)表現(xiàn)為明顯增生時(shí),乳腺ER、PR病理積分也顯著升高。方中所選用的鹿角片、蛇床子等都有明顯的調(diào)節(jié)和對(duì)抗雌二醇對(duì)乳腺管的刺激增生作用,而克乳痛治療組ER、PR含量明顯低于模型組,因而可以推測(cè)克乳痛制劑是通過降