2003-2004學(xué)年第二學(xué)期01級生物技術(shù)《基因工程原理》試卷(A卷)一、填空題(20分)基因工程的四大要素是 、、和。可用T4DNA聚合酶進(jìn)行平末端的DNA標(biāo)記，因為這種酶具有和的活性。乙醇沉淀DNA的原理是 。受體細(xì)胞的感受態(tài)。在DNA分離過程中造成DNA分子斷裂的因素主要有、和。通?？稍谌N溫度下保存DNA：4?5°C、-20°C、-70°C，其中以最好。II類限制性內(nèi)切核酸酶既具有 的專一性，又具有的專一性。切割后產(chǎn)生 末端的DNA片段和末端的DNA片段，作用時需要 作輔助因子。Klenow大片段是用切割DNA聚合酶I得到的，它具有和兩種活性。二、單項選擇題(20分)1953年Watson和Crick提出：( )多核苷酸DNA鏈通過氫鍵連接成一個雙螺旋三個連續(xù)的核苷酸代表一個遺傳密碼遺傳物質(zhì)通常是DNA而非RNA分離到回復(fù)突變體證明這一突變并非是一個缺失突變在原核生物DNA復(fù)制中，以下哪種酶除去RNA引發(fā)體并加入脫氧核糖核苷酸()DNA聚合酶III (b)DNA聚合酶II(c)DNA聚合酶I (d)DNA連接酶關(guān)于宿主控制的限制修飾現(xiàn)象的本質(zhì)，下列描述中只有()不太恰當(dāng)。由作用于同一DNA序列的兩種酶構(gòu)成這一系統(tǒng)中的核酸酶都是I類限制性內(nèi)切核酸酶這一系統(tǒng)中的修飾酶主要是通過甲基化作用對DNA進(jìn)行修飾不同的宿主系統(tǒng)具有不同的限制-修飾系統(tǒng)I型限制性內(nèi)切核酸酶()有內(nèi)切核酸酶和甲基化酶活性且經(jīng)常識別回文序列僅有內(nèi)切核酸酶活性，甲基化酶活性由另外一種酶提供有外切核酸酶和甲基化酶活性僅有外切核酸酶活性，甲基化酶活性由另外一種酶提供T4DNA連接酶是從T4噬菌體感染的中分離的，這種連接酶()催化連接反應(yīng)時既能以ATP又能以NAD作為能量來源既能催化平末端連接又能催化黏性末端連接是一種單肽酶，分子量為74kDa既能催化單鏈DNA連接又能催化雙鏈DNA連接從中分離的連接酶：()需要ATP作輔助因子 (b)需要NAD作輔助因子(c)用于進(jìn)行平末端的連接 (d)作用時不需要模板DNA連接酶的主要作用是在DNA復(fù)制、修復(fù)中封閉缺口，()將雙鏈DNA中的5，-P同3，-OH末端重新形成磷酸二脂鍵作用時不消耗能量需要Mn2+等二價輔助離子也可以連接RNA分子松弛型質(zhì)粒pUC載體系列不必進(jìn)行氯霉素擴(kuò)增，因為它們的拷貝數(shù)很高達(dá)到((a)30-50 (b)100-200(c)300-400(d)500-7009.第一個作為重組DNA載體的質(zhì)粒是((a)pBR322 (b)ColE1)(c)pSC101(d)EcoB10.關(guān)于堿解法分離質(zhì)粒DNA，E哪一種說法不正確()溶液I的作用是懸浮菌體溶液II的作用是使DNA變性溶液III的作用是使DNA復(fù)性質(zhì)粒DNA分子小，所以沒有變性，染色體變性后不能復(fù)性印跡的DNA探針()雜交只與完全相同的片段可與任何含有相同序列的DNA片段可與任何含有互補(bǔ)序列的DNA片段可與用某些限制酶切成的DNA片段下列關(guān)于建立cDNA文庫的敘述中，哪一項是錯誤的()特定組織或細(xì)胞中提取DNA或RNA用反轉(zhuǎn)錄酶合成mRNA的對應(yīng)單鏈DNA以新合成的單鏈DNA為模板合成雙鏈DNA用S1核酸酶去除雙鏈的發(fā)夾結(jié)構(gòu)黏性末端連接法，不僅操作方便，而且()(a)產(chǎn)生新切點(diǎn)(b)易于回收外源片段(d)影響外源基因的表達(dá)(c)載體不易環(huán)化14.關(guān)于噬菌斑篩選法的原理，下面哪一種說法不正確()(a)噬菌斑顏色的變化(b)cl基因失活造成的噬菌斑的變化(c)對IPTG的分解能力(d)對Xgal的分解與否15.下列哪一種酶作用時需要引物()(a)限制酶(b)堿性磷酸酶(c)反轉(zhuǎn)錄酶(d)DNA連接酶關(guān)于穿梭質(zhì)粒載體，下面哪一種說法最正確()在不同的宿主中具有不同的復(fù)制機(jī)制在不同的宿主細(xì)胞中使用不同的復(fù)制起點(diǎn)在不同的宿主細(xì)胞中使用不同的復(fù)制酶在不同的宿主細(xì)胞中具有不同的復(fù)制速度下面關(guān)于多克隆位點(diǎn)(MCS)的描述，不正確的一句是()僅位于質(zhì)粒載體中具有多種酶的識別序列不同酶的識別序列可以有重疊一般是人工合成后添加到載體中文庫包括該種生物的()某些蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)基因 (b)所有蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)基因(c)所有結(jié)構(gòu)基因 (d)內(nèi)含子和調(diào)控區(qū)19.同一種質(zhì)粒DNA，電泳時，三種不同形式的遷移速度是()SCDNA>LDNA>OCDNA (b)SCDNA>OCDNA>LDNA(c)OCDNA>SCDNA>LDNA (d)LDNA>SCDNA>OCDNA是用作基因工程載體的自然質(zhì)粒，它不具有下列哪個性質(zhì)()是松弛復(fù)制型 (b)具有四環(huán)素抗性（C）能被氯霉素擴(kuò)增 （d）產(chǎn)生大腸桿菌素三、 判斷題（15分）同一種限制性內(nèi)切核酸酶切割靶DNA，得到的片段的兩個末端都是相同的。迄今發(fā)現(xiàn)的質(zhì)粒DNA都是環(huán)狀的。外源基因（或DNA片段）插入到某一基因內(nèi)的位點(diǎn)后，這個基因不再有任何功能。核酸雜交探針就是帶有放射性標(biāo)記的DNA分子。通過原位菌落雜交得到的陽性克隆即是重組體，但不能判斷插入的外源基因是否進(jìn)行了表達(dá)。基因克隆中，低拷貝數(shù)的質(zhì)粒載體是沒有用的。用不同的產(chǎn)生粘性末端的限制性內(nèi)切核酸酶分別切割載體和外源DNA片段，得到的粘性末端是不能通過末端互補(bǔ)而連接的。用免疫化學(xué)方法篩選的重組體不需要外源基因的表達(dá)。甘油會使許多限制性內(nèi)切酶的特異性發(fā)生改變，是導(dǎo)致一些酶星活性的主要原因之一，防止的辦法是酶切反應(yīng)體系中，將甘油的濃度控制在5%以下。不匹配的黏性末端可以通過部分填補(bǔ)后進(jìn)行連接。聚合酶I有三種酶活性，其中3’一5’外切核酸酶的活性在較多的dNTP存在下，常被5’一3'合s成酶的活性所掩蓋?；蚪MDNA文庫是含有某一生物中全部DNA序列隨機(jī)克隆的克隆群，而cDNA文庫是含有某一生物中所有表達(dá)基因隨機(jī)克隆的克隆群。同聚物接尾法構(gòu)建重組體，不僅連接效率高，而且也很容易回收插入的片段。簡并引物是根據(jù)已知DNA的序列設(shè)計的引物群。一般情況下，質(zhì)粒既可以整合到染色體上，也可以獨(dú)立存在。四、 簡答題（第1題3分，，2?4題各4分）連接酶將Sau3AI（GATC）切割的DNA與經(jīng)BamHI（GGATCC））切割的DNA連接起來后，能夠被BamHI切割的機(jī)率有多大（百分比表示）下面幾種序列中你認(rèn)為哪一個（哪些）最有可能是II類酶的識別序列，為什么GAATTC，AAGCTT，GAATCG，ACGGCA，CTGCAG。你打算擴(kuò)增下圖所示的兩段序列之間的DNA，請從所列出的的引物中選出合適的一對。5'-GACCTGTGGAAGC CATACGGGATTG-3'3'-CTGGACACCTTCG GTATGCCCTAAC-5'引物1：(1)5’-GACCTGTGGAAGC(2)5’-CTGGACACCTTCG(3)5’-CGAAGGTGTCCAG(4)5’-GCTTCCACAGGTC引物2：(1)5’-CATACGGGATTG(2)5’-GTATGCCCTAAC(3)5’-GTTAGGGCATAC(4)5’-CAATCCCGTATG原核生物中有哪兩種不同的轉(zhuǎn)錄終止機(jī)制五、問答題（30分）PCR擴(kuò)增的基本原理是什么用PCR擴(kuò)增某一基因，必須預(yù)先得到什么樣信息黏性末端連接法是最常用的連接方法，具有許多優(yōu)點(diǎn)，但是也有一些不足，請指出這些不足處。在DNA分離過程中，為何常常酚：氯仿聯(lián)用4.2003-2004學(xué)年第二學(xué)期01級生物技術(shù)《基因工程原理》試卷（B卷）一、填空題（20分）基因工程的四大要素是、、和?？捎肨4DNA聚合酶進(jìn)行平末端的DNA標(biāo)記，因為這種酶具有和的活性。乙醇沉淀DNA的原理是 。受體細(xì)胞的感受態(tài)。在DNA分離過程中造成DNA分子斷裂的因素主要有、和。通?？稍谌N溫度下保存DNA：4?5°C、-20°C、-70°C，其中以最好。為了防止DNA的自身環(huán)化，可用脫去雙鏈DNA。Klenow大片段是用切割DNA聚合酶I得到的，它具有和兩種活性。放射免疫篩選的原理基于以下三點(diǎn)：、和。二、單項選擇題(20分)1953年Watson和Crick提出：( )多核苷酸DNA鏈通過氫鍵連接成一個雙螺旋三個連續(xù)的核苷酸代表一個遺傳密碼遺傳物質(zhì)通常是DNA而非RNA分離到回復(fù)突變體證明這一突變并非是一個缺失突變在原核生物DNA復(fù)制中，以下哪種酶除去RNA引發(fā)體并加入脫氧核糖核苷酸()DNA聚合酶III (b)DNA聚合酶II(c)DNA聚合酶I (d)DNA連接酶關(guān)于宿主控制的限制修飾現(xiàn)象的本質(zhì)，下列描述中只有()不太恰當(dāng)。由作用于同一DNA序列的兩種酶構(gòu)成這一系統(tǒng)中的核酸酶都是I類限制性內(nèi)切核酸酶這一系統(tǒng)中的修飾酶主要是通過甲基化作用對DNA進(jìn)行修飾不同的宿主系統(tǒng)具有不同的限制-修飾系統(tǒng)I型限制性內(nèi)切核酸酶()有內(nèi)切核酸酶和甲基化酶活性且經(jīng)常識別回文序列僅有內(nèi)切核酸酶活性，甲基化酶活性由另外一種酶提供有外切核酸酶和甲基化酶活性僅有外切核酸酶活性，甲基化酶活性由另外一種酶提供T4DNA連接酶是從T4噬菌體感染的中分離的，這種連接酶()催化連接反應(yīng)時既能以ATP又能以NAD作為能量來源既能催化平末端連接又能催化黏性末端連接是一種單肽酶，分子量為74kDa既能催化單鏈DNA連接又能催化雙鏈DNA連接從中分離的連接酶：()需要ATP作輔助因子 (b)需要NAD作輔助因子(c)用于進(jìn)行平末端的連接 (d)作用時不需要模板DNA連接酶的主要作用是在DNA復(fù)制、修復(fù)中封閉缺口，( )將雙鏈DNA中的5，-P同3，-OH末端重新形成磷酸二脂鍵作用時不消耗能量需要Mn2+等二價輔助離子也可以連接RNA分子松弛型質(zhì)粒pUC載體系列不必進(jìn)行氯霉素擴(kuò)增，因為它們的拷貝數(shù)很高達(dá)到()(a)30-50 (b)100-200 (c)300-400 (d)500-700

第一個作為重組DNA載體的質(zhì)粒是（）（a） pBR322（b）ColEl（c）pSC101（d）EcoB印跡的DNA探針（ ）雜交（a） 只與完全相同的片段（b） 可與任何含有相同序列的DNA片段（c） 可與任何含有互補(bǔ)序列的DNA片段（d） 可與用某些限制酶切成的DNA片段用堿法分離質(zhì)粒DNA時，因為（）所以可以被除去（a） 染色體DNA斷成了碎片（b） 染色體DNA分子量大，而不能釋放（c） 染色體DNA變性后來不及復(fù)性（d） 染色體末同蛋白質(zhì)分開而沉淀黏性末端連接法，不僅操作方便（a）產(chǎn)生新切點(diǎn)（c）載體不易環(huán)化關(guān)于cDNA的最正確的提法是：黏性末端連接法，不僅操作方便（a）產(chǎn)生新切點(diǎn)（c）載體不易環(huán)化關(guān)于cDNA的最正確的提法是：（（a）同mRNA互補(bǔ)的單鏈DN（c）以mRNA為模板合成的雙鏈DNA而且((b)(d))）易于回收外源片段影響外源基因的表達(dá)關(guān)于噬菌斑篩選法的原理，下面哪一種說法不正確（（a）噬菌斑顏色的變化（c）對IPTG的分解能力下列哪一種酶作用時需要引物（a）限制酶（c）反轉(zhuǎn)錄酶(b)(d)(b)(d)（b）同mRNA互補(bǔ)的雙鏈DNA（d）以上都正確）cI基因失活造成的噬菌斑的變化對Xgal的分解與否）堿性磷酸酶DNA連接酶在不同的宿主中具有不同的復(fù)制機(jī)制在不同的宿主細(xì)胞中使用不同的復(fù)制起點(diǎn)在不同的宿主細(xì)胞中使用不同的復(fù)制酶在不同的宿主細(xì)胞中具有不同的復(fù)制速度關(guān)于穿梭質(zhì)粒載體，下面哪一種說法最正確（）在不同的宿主中具有不同的復(fù)制機(jī)制在不同的宿主細(xì)胞中使用不同的復(fù)制起點(diǎn)在不同的宿主細(xì)胞中使用不同的復(fù)制酶在不同的宿主細(xì)胞中具有不同的復(fù)制速度（a）（b）（c）（d）下面關(guān)于多克隆位點(diǎn)（MCS）的描述，不正確的一句是（ ）（a） 僅位于質(zhì)粒載體中（b） 具有多種酶的識別序列（c） 不同酶的識別序列可以有重疊（d） 一般是人工合成后添加到載體中文庫包括該種生物的（ ）（a）某些蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)基因 （b）所有蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)基因（c）所有結(jié)構(gòu)基因 （d）內(nèi)含子和調(diào)控區(qū)19.同一種質(zhì)粒DNA，電泳時，三種不同形式的遷移速度是（）（a）SCDNA>LDNA>OCDNA （b）SCDNA>OCDNA>LDNA（c）OCDNA>SCDNA>LDNA （d）LDNA>SCDNA>OCDNA是用作基因工程載體的自然質(zhì)粒，它不具有下列哪個性質(zhì)（）（a）是松弛復(fù)制型 （b）具有四環(huán)素抗性（c）能被氯霉素擴(kuò)增 （d）產(chǎn)生大腸桿菌素三、判斷題（15分）同一種限制性內(nèi)切核酸酶切割靶DNA，得到的片段的兩個末端都是相同的。迄今發(fā)現(xiàn)的質(zhì)粒DNA都是環(huán)狀的。外源基因（或DNA片段）插入到某一基因內(nèi)的位點(diǎn)后，這個基因不再有任何功能。核酸雜交探針就是帶有放射性標(biāo)記的DNA分子。通過原位菌落雜交得到的陽性克隆即是重組體，但不能判斷插入的外源基因是否進(jìn)行了表達(dá)。基因克隆中，低拷貝數(shù)的質(zhì)粒載體是沒有用的。用不同的產(chǎn)生粘性末端的限制性內(nèi)切核酸酶分別切割載體和外源DNA片段，得到的粘性末端是不能通過末端互補(bǔ)而連接的。用免疫化學(xué)方法篩選的重組體不需要外源基因的表達(dá)。甘油會使許多限制性內(nèi)切酶的特異性發(fā)生改變，是導(dǎo)致一些酶星活性的主要原因之一，防止的辦法是酶切反應(yīng)體系中，將甘油的濃度控制在5%以下。不匹配的黏性末端可以通過部分填補(bǔ)后進(jìn)行連接。聚合酶I有三種酶活性，其中3’一5’外切核酸酶的活性在較多的dNTPs存在下，常被5’一3'合成酶的活性所掩蓋。基因組DNA文庫是含有某一生物中全部DNA序列隨機(jī)克隆的克隆群，而cDNA文庫是含有某一生物中所有表達(dá)基因隨機(jī)克隆的克隆群。同聚物接尾法構(gòu)建重組體，不僅連接效率高，而且也很容易回收插入的片段。簡并引物是根據(jù)已知DNA的序列設(shè)計的引物群。一般情況下，質(zhì)粒既可以整合到染色體上，也可以獨(dú)立存在。四、簡答題（第1題3分，，2?4題各4分）連接酶將Sau3AI（GATC）切割的DNA與經(jīng)BamHI（GGATCC）1切割的DNA連接起來后，能夠被BamHI切割的機(jī)率有多大（百分比表示）下面幾種序列中你認(rèn)為哪一個（哪些）最有可能是II類酶的識別序列，為什么GAATTC，AAGCTT，GAATCG，ACGGCA，CTGCAG。你打算擴(kuò)增下圖所示的兩段序列之間的DNA，請從所列出的的引物中選出合適的一對。5'-GACCTGTGGAAGC CATACGGGATTG-3'3'-CTGGACACCTTCG GTATGCCCTAAC-5'引物1：(1)5’-GACCTGTGGAAGC(2)5’-CTGGACACCTTCG(3)5’-CGAAGGTGTCCAG(4)5’-GCTTCCACAGGTC引物2：(1)5’-CATACGGGATTG(2)5’-GTATGCCCTAAC(3)5’-GTTAGGGCATAC(4)5’-CAATCCCGTATG某學(xué)生在用EcoRI切割外源片段時，出現(xiàn)了星號活性，請分析可能的原因五、問答題（30分）PCR擴(kuò)增的基本原理是什么用PCR擴(kuò)增某一基因，必須預(yù)先得到什么樣信息黏性末端連接法是最常用的連接方法，具有許多優(yōu)點(diǎn)，但是也有一些不足，請指出這些不足之處。為什么氧化變色的酚不能直接用于DNA的分離應(yīng)如何處置2003-2004學(xué)年第二學(xué)期01級生物技術(shù)《基因工程原理》試卷（A卷）

參考答案（A卷）一、填空題目的基因，工具酶，載體，受體細(xì)胞5’一3’的聚合酶，3’一5‘的外切核酸酶乙醇使DNA分子脫水接受外源DNA的生理狀態(tài)核酸酶降解，化學(xué)降解，物理剪切-70°C識別位點(diǎn)，切割位點(diǎn)，平，黏性，Mg2+枯草桿菌蛋白酶，5’一3’的聚合酶，3’一5’的外切核酸酶二、單項選擇題1.a2.9.cc3.b4.b5.b6.b7.a8.d三、判斷題1.X 2.X3.X4.X5.V6.X7.X8.X9.V10.V11.V12.X13.X14.X15.X四、簡答題25%GAATTC，AAGCTT，CTGCAG，因為它們是回文序列。引物1：（1）5’-GACCTGTGGAAGC引物2：（4）5’-CAATCCCGTATG一種只取決于DNA的堿基順序，即終止子序列；而另一種還需要終止蛋白質(zhì)（P因子）的參與。五、問答題PCR反應(yīng)是在模板DNA、引物和dNTPs存在的條件下，依賴于DNA聚合酶的酶促合成反應(yīng)，它根據(jù)DNA半保留復(fù)制的原理，在體外模仿細(xì)胞內(nèi)DNA復(fù)制的過程，首先使模板DNA變性，兩條鏈解開，然后使引物與模板退火，二者堿基配對，DNA聚合酶隨即以四種dNTP為底物，在引物的引導(dǎo)下合成與模板互補(bǔ)的DNA新鏈。進(jìn)行PCR擴(kuò)增，應(yīng)對目的基因片段兩側(cè)的序列了解清楚，至少要預(yù)先知道足夠合成一對引物的靶DNA序列。粘性末端連接的優(yōu)點(diǎn)是實(shí)驗操作簡單，易于回收外源DNA片段。不足之處：（1）載體易自身環(huán)化；（2）用同一種限制酶產(chǎn)生的黏性末端連接不易定向克隆；（3）難插入特定的基因；（4）大片段DNA的重組率較低，即使用堿性磷酸酶處理了載體，載體也有成環(huán)的傾向；（5）用這種方法產(chǎn)生的重組體往往含有不止一個外源片段或不止一個載體連接起來的串聯(lián)重組體，增加篩選工作的困難。酚與水有一定程度的互溶，單獨(dú)用酚抽提DNA不能完全除去酚，而殘留的酚抑制限制性內(nèi)切酶和連接酶活性，甚至導(dǎo)致酶變性，而氯仿也是蛋白變性劑，它不與水互溶，而與苯酚互溶，故可帶去殘留酚。2004-2005學(xué)年第一學(xué)期

生物科學(xué)01級《基因工程原理》（A）一、填空題（25分）基因工程實(shí)施的四個必要條件是：①，②，③，④。部分酶切時通?？刹扇〉拇胧┯校孩伲?，③。DNA聚合酶I具有三種活性:①，②③。

pUC系列的載體是經(jīng)人工改造的 型質(zhì)粒載體，它們的拷貝數(shù)很高，不必進(jìn)行 的擴(kuò)增，拷貝數(shù)即可達(dá)到。堿法分離質(zhì)粒DNA時，溶液I的作用是，溶液II和溶液III的作用分別是使DNA在DNA分離純化過程中，造成DNA分子斷裂的因素很多，主要有：①②，③。在原核生物mRNA的轉(zhuǎn)錄過程中，有三個序列是必不可少的，它們是 ①②，③?？寺∫粋€編碼某種蛋白質(zhì)的基因必須考慮其表達(dá)的三個基本條件是：②，③。、選擇題(15分)第一個用于構(gòu)建重組體的限制性內(nèi)切酶是( )EcoRI (b)EcoB (c)EcoC (d)EcoR下列限制性內(nèi)切核酸酶中，選用( )時要考慮連接后外源DNA的插入方向。EcoRI (b)EcoRI (c)BamHI (d)PstI用免疫化學(xué)法篩選重組體的原理是( )。根據(jù)外源基因的表達(dá) (b)根據(jù)載體基因的表達(dá)(c)根據(jù)mRNA同DNA的雜交(d)根據(jù)DNA同DNA的關(guān)于宿主控制的限制修飾現(xiàn)象的本質(zhì)，下列描述中只有( )不太恰當(dāng)。由作用于同一DNA序列的兩種酶構(gòu)成這一系統(tǒng)中的核酸酶都是I類限制性內(nèi)切核酸酶這一系統(tǒng)中的修飾酶主要是通過甲基化作用對DNA進(jìn)行修飾不同的宿主系統(tǒng)具有不同的限制-修飾系統(tǒng)在原核生物復(fù)制子中，除去RNA引發(fā)體并加入脫氧核糖核苷酸的是( )DNA聚合酶I (b)DNA聚合酶II (c)DNA聚合酶I(d)DNA連接酶主要原因是()(b)會改變pH值(d)主要原因是()(b)會改變pH值(d)在DNA分離后不易除去IPTG的作用是()。(b)誘導(dǎo)宿主的3肽的合成(d)作為顯色反應(yīng)的指示劑(b)使DNA進(jìn)入水相(d)減少氣泡，促進(jìn)分相使DNA的磷酸二脂鍵斷裂(c)同DNA形成復(fù)合物在利用lacZ失活的顯色反應(yīng)篩選中(a)誘導(dǎo)宿主的a肽的合成(c)作為酶的作用底物異戊醇的作用是()(a)使蛋白質(zhì)脫水(c)幫助DNA進(jìn)入水相下列關(guān)于建立cDNA文庫的敘述中，哪一項是錯誤的( )從特定組織或細(xì)胞中提取DNA或RNA用反轉(zhuǎn)錄酶合成mRNA的對應(yīng)單鏈DNA以新合成的單鏈DNA為模板合成雙鏈DNA用S1核酸酶去除雙鏈的發(fā)夾結(jié)構(gòu)從中分離的連接酶：( )(a)需要ATP作輔助因子 (b)需要NAD作輔助因子(c)用于進(jìn)行平末端的連接 (d)作用時不需要模板從細(xì)胞或組織中分離DNA時，常用蔗糖溶液，目的是( )（a）抑制核酸酶活性 （b）保護(hù)DNA，防止斷裂（c）加速蛋白質(zhì)變性 （d）有利于細(xì)胞破裂用堿法分離質(zhì)粒DNA時，因為（ ）所以可以被除去（a） 染色體DNA斷成了碎片（b） 染色體DNA分子量大，而不能釋放（c） 染色體DNA變性后來不及復(fù)性（d） 染色體末同蛋白質(zhì)分開而沉淀部分填補(bǔ)是DNA體外重組中常用的一種技巧，填補(bǔ)時應(yīng)（ ）（a）控制DNA聚合酶的用量（b）控制酶反應(yīng)的時間（c）限制dNTP的種類 （d）注意只能填補(bǔ)載體印跡的DNA探針（ ）雜交（a） 只與完全相同的片段（b） 可與任何含有相同序列的DNA片段（c） 可與任何含有互補(bǔ)序列的DNA片段（d） 可與用某些限制酶切成的DNA片段15.在基因工程中，可用堿性磷酸酶（ ）（a） 防止線性載體DNA的自身環(huán)化（b） 同多核苷酸激酶一起進(jìn)行DNA的5,末端標(biāo)記（c） 制備突出的3,末端（d） 上述說法都正確三、 判斷題（15分）T4DNA連接酶和DNA連接酶都能催化平末端和粘性末端的連接。所謂穿梭質(zhì)粒載體是指能夠在兩種以上的不同寄主細(xì)胞中復(fù)制的質(zhì)粒，所用的復(fù)制起點(diǎn)不同。密碼的偏愛性是指不同種屬的生物對簡并密碼具有不同的使用頻率?；蚩寺≈校涂截悢?shù)的質(zhì)粒載體是沒有用的。外源基因（或DNA片段）插入到某一基因內(nèi)的位點(diǎn)后，這個基因不再有任何功能?；蚪MDNA文庫是含有某一生物中全部DNA序列隨機(jī)克隆的克隆群，而cDNA文庫是含有某一生物中所有表達(dá)基因隨機(jī)克隆的克隆群。以噬菌體為載體的篩選方法比較簡便，凡能形成噬菌斑的就一定是重組體。任何一種質(zhì)粒都可以用氯霉素擴(kuò)增的方法增加它的拷貝數(shù)。核酸雜交的原理是根據(jù)DNA分子間的互補(bǔ)。同聚物接尾法構(gòu)建重組體，不僅連接效率高，而且也很容易回收插入的片段。限制與修飾現(xiàn)象是宿主的一種保護(hù)體系，它是通過對外源DNA的限制和對自身DNA的修飾而實(shí)現(xiàn)的。取代型載體是指同一種限制性內(nèi)切核酸酶在入DNA中具有兩個切點(diǎn)。外源DNA通過取代這兩個切點(diǎn)間的片段被克隆。所謂引物就是同DNA互補(bǔ)的一小段RNA分子。用不同的產(chǎn)生粘性末端的限制性內(nèi)切核酸酶分別切割載體和外源DNA片段，得到的粘性末端是不能通過末端互補(bǔ)而連接的。一般情況下，質(zhì)粒既可以整合到染色體上，也可以獨(dú)立存在。四、 簡答題（每題各4分）重組DNA的含義是什么哪些條件可促使DNA復(fù)性（退火）下面幾種序列中你認(rèn)為哪一個（哪些）最有可能是II類酶的識別序列：GAATCG，AAATTT，GATATC，ACGGCA。為什么基因工程中，為什么常用小牛腸堿性磷酸酶（CIP）而不喜歡用大腸桿菌堿性磷酸酶（BAP）來脫去DNA的5’端的磷酸基團(tuán)五、問答題(第1題8分，2、3、4題各7分)用PCR擴(kuò)增某一基因，必須預(yù)先得到什么樣信息引物設(shè)計的一般原則有哪些為什么氧化變色的酚不能直接用于DNA的分離應(yīng)如何處置如何防止載體DNA分子的自身環(huán)化問題理想的質(zhì)粒載體應(yīng)具備哪幾個條件2004-2005學(xué)年第一學(xué)期生物科學(xué)01級《基因工程原理》試卷(B)一、 填空題(25分)基因工程是在上世紀(jì)年代發(fā)展起來的遺傳學(xué)的一個分支學(xué)科。Cohen等在 年構(gòu)建了第一個有功能的重組DNA分子。部分酶切時通常可采取的措施有：①，②，③。DNA聚合酶［具有三種活性:①，②，③。ColE1是一種 型天然質(zhì)粒載體，能產(chǎn)，但沒有 基因，不能通過 篩選。堿法分離質(zhì)粒DNA時，溶液I的作用是，溶液II和溶液III的作用分別是使DNA。在DNA分離純化過程中，造成DNA分子斷裂的因素很多，主要有：①，②，③。在原核生物mRNA的轉(zhuǎn)錄過程中，有三個序列是必不可少的，它們是 ①，②，③?？寺∫粋€編碼某種蛋白質(zhì)的基因必須考慮其表達(dá)的三個基本條件是：，②，③。在DNA復(fù)制過程中，連續(xù)合成的子鏈稱，另一條非連續(xù)合成的子鏈稱為。二、 選擇題(15分)第一個用于構(gòu)建重組體的限制性內(nèi)切酶是( )(a)EcoRI(b)EcoB (c)EcoC (d)EcoR下列限制性內(nèi)切核酸酶中，選用()時要考慮連接后外源DNA的插入方向。(a)EcoRI(b)EcoRI (c)BamHI (d)PstI在下列表型中，( )是基因工程上理想的受體菌表型。(a)r+m+rec+ (b)r-m-rec- (c)r+m+rec- (d)r-m-rec+TOC\o"1-5"\h\z因研究重組DNA技術(shù)而獲得諾貝爾獎的科學(xué)家是( )(a) (b) (c) (d)在原核生物復(fù)制子中，除去RNA引發(fā)體并加入脫氧核糖核苷酸的是( )(a)DNA聚合酶I (b)DNA聚合酶II (c)DNA聚合酶I(d)DNA連接酶變色氧化的酚不能用于DNA的分離，主要原因是()(a)使DNA的磷酸二脂鍵斷裂 (b)會改變pH值(c)同DNA形成復(fù)合物 (d)在DNA分離后不易除去在利用lacZ失活的顯色反應(yīng)篩選中，IPTG的作用是( )。(a)誘導(dǎo)宿主的(a)誘導(dǎo)宿主的a肽的合成(c)作為酶的作用底物異戊醇的作用是()(a)使蛋白質(zhì)脫水(c)幫助DNA進(jìn)入水相誘導(dǎo)宿主的3肽的合成作為顯色反應(yīng)的指示劑使DNA進(jìn)入水相減少氣泡，促進(jìn)分相下列關(guān)于建立cDNA文庫的敘述中，哪一項是錯誤的()從特定組織或細(xì)胞中提取DNA或RNA用反轉(zhuǎn)錄酶合成mRNA的對應(yīng)單鏈DNA以新合成的單鏈DNA為模板合成雙鏈DNA用S1核酸酶去除雙鏈的發(fā)夾結(jié)構(gòu)從中分離的連接酶：()(b)需要NAD作輔助因子(a)(b)需要NAD作輔助因子用于進(jìn)行平末端的連接 (d)作用時不需要模板從細(xì)胞或組織中分離DNA時，常用蔗糖溶液，目的是()(a)抑制核酸酶活性 (b)保護(hù)DNA，防止斷裂加速蛋白質(zhì)變性 (d)有利于細(xì)胞破裂用堿法分離質(zhì)粒DNA時，因為( )所以可以被除去染色體DNA斷成了碎片染色體DNA分子量大，而不能釋放染色體DNA變性后來不及復(fù)性染色體末同蛋白質(zhì)分開而沉淀部分填補(bǔ)是DNA體外重組中常用的一種技巧，填補(bǔ)時應(yīng)( )(a)控制DNA聚合酶的用量 (b)控制酶反應(yīng)的時間(c)限制dNTP的種類 (d)注意只能填補(bǔ)載體印跡的DNA探針( )雜交只與完全相同的片段可與任何含有相同序列的DNA片段可與任何含有互補(bǔ)序列的DNA片段可與用某些限制酶切成的DNA片段15.在基因工程中，可用堿性磷酸酶()防止線性載體DNA的自身環(huán)化同多核苷酸激酶一起進(jìn)行DNA的5,末端標(biāo)記制備突出的3,末端上述說法都正確三、判斷題(15分)T4DNA連接酶和DNA連接酶都能催化平末端和粘性末端的連接。所謂穿梭質(zhì)粒載體是指能夠在兩種以上的不同寄主細(xì)胞中復(fù)制的質(zhì)粒，所用的復(fù)制起點(diǎn)不同。密碼的偏愛性是指不同種屬的生物對簡并密碼具有不同的使用頻率?；蚩寺≈校涂截悢?shù)的質(zhì)粒載體是沒有用的。外源基因(或DNA片段)插入到某一基因內(nèi)的位點(diǎn)后，這個基因不再有任何功能。基因組DNA文庫是含有某一生物中全部DNA序列隨機(jī)克隆的克隆群，而cDNA文庫是含有某一生物中所有表達(dá)基因隨機(jī)克隆的克隆群。以噬菌體為載體的篩選方法比較簡便，凡能形成噬菌斑的就一定是重組體。通過原位菌落雜交得到的陽性克隆即是重組體，但不能判斷插入的外源基因是否進(jìn)行了表達(dá)。核酸雜交的原理是根據(jù)DNA分子間的互補(bǔ)。用免疫化學(xué)方法篩選的重組體不需要外源基因的表達(dá)。限制與修飾現(xiàn)象是宿主的一種保護(hù)體系，它是通過對外源DNA的限制和對自身DNA的修飾而實(shí)現(xiàn)的。取代型載體是指同一種限制性內(nèi)切核酸酶在入DNA中具有兩個切點(diǎn)。外源DNA通過取代這兩個切點(diǎn)間的片段被克隆。簡并引物是根據(jù)已知蛋白質(zhì)的氨基酸序列設(shè)計的引物群。用不同的產(chǎn)生粘性末端的限制性內(nèi)切核酸酶分別切割載體和外源DNA片段，得到的粘性末端是不能通過末端互補(bǔ)而連接的。核酸酶是Ca2依賴性的，在反應(yīng)混合物中加入EDTA便可抑制它的活性。四、 簡答題（每題各4分）重組DNA的含義是什么哪些條件可促使DNA復(fù)性（退火）某學(xué)生在用EcoRI切割外源片段時，出現(xiàn)了星號活性，請分析可能的原因基因工程中，為什么常用小牛腸堿性磷酸酶（CIP）而不喜歡用大腸桿菌堿性磷酸酶（BAP）來脫去DNA的5’端的磷酸基團(tuán)五、 問答題（第1題8分，2、3、4題各7分）用PCR擴(kuò)增某