HPLC法測定酒石酸HessenwasrevisedinJanuary2021HPLC法測定酒石酸酒石酸又稱2,3-二羥基丁二酸，結(jié)構(gòu)簡式HOOCCH（OH）CH（OH）COOH。酒石酸氫鉀存在于葡萄汁內(nèi)，此鹽難溶于水和乙醇，在葡萄汁釀酒過程中沉淀析出，稱為酒石，酒石酸的名稱由此而來。有二個不對稱的碳原子，有3種立體異構(gòu)體，即：右旋型（D型，L型）、左旋型（L型，D型）、內(nèi)消旋型。通常，外消旋型酒石酸又稱為葡萄酸。右旋型酒石酸以游離的或K鹽、Ca鹽、Mg鹽的形態(tài)廣泛分布于高等植物中，特別是多存在于果實和葉中。在制造葡萄酒時，會沉積大量酒石（氫鉀鹽）。另外，在霉菌和地衣類中也常見到它的存在。分離到的酒石酸發(fā)酵細菌（Gluconoba-ctersuboxydans的變異菌株），在體內(nèi)是通過葡萄糖氧化分解，經(jīng)由5-酮葡萄糖酸，在形成羥基乙酸的同時形成酒石酸。酒石酸銨受微生物作用，可變成琥珀酸。因此，工業(yè)上用酒石酸作為生產(chǎn)琥珀酸的原料。酒石酸主要以鉀鹽的形式存在于多種植物和果實中，也有少量是以游離態(tài)存在的。用作抗氧化增效劑、制螯合劑、藥劑。廣泛用于醫(yī)藥、食品、制革、紡織等工業(yè)。測定水果中有機酸的方法目前有液相色譜分析法、氣相色譜分析法、毛細管電泳法、滴定法等多種方法，但我們通常采用高效液相色譜分析技術。測定蘋果中酒石酸的成分含量，采用高效液相色譜法，固定相為Phencmenexluna5口mC色譜柱（250X），流動相為?（NH）HPO溶液，流速為?，進樣量為1842420口L，檢測波長為210nm，本法簡便快速，靈活度和精密度高，準確可靠，可適用于水果中有機酸的測定。2.1試劑及儀器試劑：80%乙醇（500mL，天津市百花化工有限公司）、酒石酸（500g，重慶東方紅試劑廠）、磷酸二氫銨（500g,西安化學試劑廠）均為分析純，實驗用水均為二次蒸餾水。儀器：高效液相色譜儀Phencmenexluna5口mC色譜柱（250X）（U-183000，戴安中國有限公司）、離心機（上海安亭科學儀器廠）、超聲機（KS-250D，寧波科生儀器廠）、抽濾泵（天津奧特塞恩斯有限公司）、濾膜（口m）、容量品、錐形瓶（50mL）、量筒（100mL）、瑪瑙研缽、電子天平（BS110S,北京賽多利斯天平有限公司）、HH-Z電熱恒溫水浴鍋、電爐子、蒸發(fā)皿、燒杯。2實驗原理采用高效液相色譜法分析測定蘋果中酒石酸的含量以及與標準酒石酸的分析對比，高效液相色譜分析法是主要具有高壓，高速，高效，高靈敏度等特點，對試樣進行分析測定。流動相和固定相都是液體，流動相與固定相之間應互不相溶（極性不同，避免固定液流失），有一個明顯的分界面。當試樣進入色譜柱，溶質(zhì)在兩相間進行分配。達到平衡時，服從于高效液相色譜計算公式：Cs[VmK二二k Cm Vs高效液相色譜計算公式式中，Cs—溶質(zhì)在固定相中濃度；Cm—溶質(zhì)在流動相中的濃度；Vs—固定相的體積；Vm—流動相的體積。LLPC與GPC有相似之處，即分離的順序取決于K,K大的組分保留值大；但也有不同之處，GPC中，流動相對K影響不大，LLPC流動相對K影響較大。正相液一液分配色譜法流動相的極性小于固定液的極性。反相液一液分配色譜法流動相的極性大于固定液的極性。液一液分配色譜法的缺點：盡管流動相與固定相的極性要求完全不同，但是固定液在流動相中仍有微量溶解；流動相通過色譜柱時的機械沖擊力，造成固定液流失[10]2.3色譜條件固定相為Phencmenexluna5口mC色譜柱（250X），流動相為?18（NH）HPO溶液，流速ImL?min-i，檢測波長為210nm，柱溫為30°C。4242.4實驗方法2.4.1標準溶液的配制精確稱取酒石酸標準品，置于燒杯中用二次蒸餾水完全溶解，轉(zhuǎn)移至100mL容量瓶中加二次蒸餾水稀釋并定容，然后用移液管移取分別稀釋成口g?mL-i、口g?mL-i、口g?mL-i、口g?mL-i、口g?mL-i等不同質(zhì)量濃度的標準品，并用口m的濾膜過濾，然后超聲處理。2.4.3流動相的配制采用電子天平準確稱取(NH)HPO晶體，于小燒杯中加入少量二次蒸餾水完424全溶解，然后轉(zhuǎn)移到lOOOmL容量瓶中并定容至刻度線，最后經(jīng)口m的濾膜過濾，超聲15min處理作為流動相。3結(jié)果與討論3.1標準品的進樣分析按上述色譜條件，待基線穩(wěn)定后,用移液管準確移取不同質(zhì)量濃度的樣品分別置于進樣瓶中，放入高效液相色譜儀進樣盤中，洗針并進樣，依次對不同質(zhì)量濃度的標準品進行測定。酒石酸標準品色譜見圖1：圖1標準品中酒石酸的色譜圖條件：流動相為-(NH4)2HPO4溶液，流速誠din-1，檢測波長為210nm，柱溫為30C，酒石酸標準品的質(zhì)量

濃度為卩g'mL-i.3.2樣品的進樣分析按上述色譜條件，待基線穩(wěn)定后，用移液管移取酒石酸的樣品置于進樣瓶中，放入高效液相色譜儀進樣盤中，洗針并進樣，酒石酸樣品色譜見圖2：

條件：流動相為-(NH4)2HPO4溶液，流速誠din-1，檢測波長為210nm，柱溫為30C3工作曲線的繪制2C ■?i,i?iii?i?i ,i?i9_t 1-6 1.2~l片1_S 1.8 ?_Q 2.2 a_4 2.0眉七琵的圧年濃腹Rebl-1圖3酒石酸的質(zhì)量濃度和峰面積的線性關系將質(zhì)量濃度為口g-mL-i、口g-mL-i、口g-mL-i、口g-mL-i、口g-mL-1的酒石酸標準品，分別注入高效液相色譜儀中進行測定，以色譜峰的峰面積Y為縱坐標，標準溶液的質(zhì)量濃度X為橫坐標，回歸方程為Y=+，相關系數(shù)r=0.98632。說明酒石酸在一Ug-mL-1范圍內(nèi)，峰面積與樣品濃度之間呈良好線性關系，