靈龜八法傳受開穴灸對腎陽虛模型豚鼠全血粘度的影響

“靈寶八法”是針灸時間的重要組成部分。自古以來，它就是一種養(yǎng)生和保健的方法。為進一步探索靈龜八法抗衰老的機理,我們以腎陽虛模型豚鼠為研究對象,運用靈龜八法按時開穴灸治,觀察靈龜八法對腎陽虛模型豚鼠全血粘度的影響,現(xiàn)將實驗結(jié)果報告如下。1材料和方法1.1材料表面1.1.1動物驅(qū)動健康點本實驗選用健康成年豚鼠只月齡月雌雄各半,體重180~280g,動物由廣西中醫(yī)學院動物中心提供[動物合格證號為桂動許字(1999)第11004號]。1.1.2自由飼養(yǎng),自由飲水實驗前,所有動物都在實驗室條件下適應性飼養(yǎng)2W,自由進食和飲水。實驗室要求每天光照與黑暗各12h(光照時時間為7:0~19:00),室溫23℃。1.1.3仙制藥股份有限公司造模藥品選用醋酸潑泥松龍注射液(由浙江仙琚制藥股份有限公司生產(chǎn)仙樂牌國藥準字H33020824,規(guī)格為每支0.125g/5mL,生產(chǎn)批號050405)。1.1.4抗凝劑的制備1%肝素溶液0.1mL于試管內(nèi),旋轉(zhuǎn)試管,使溶液均勻浸濕試管內(nèi)壁,放入80~100℃烘箱烤干而成。1.1.5儀器主要儀器為北京中勤世帝科學儀器有限公司提供的LG-R-80A型血液粘度計。1.1.6阿爾海姆將細軟艾絨捻緊成為直徑約0.2cm、高0.4cm的圓錐狀艾炷。1.2模型豬鼠皮膚長期毒性試驗參照劉蓬等方法進行造模。將75%酒精棉球常規(guī)消毒豚鼠大腿部皮膚,以4.5號注射針頭肌注醋酸潑泥松龍注射液6mg/100g(0.24mL),每日1次,連續(xù)用藥12天,模型豚鼠即出現(xiàn)活動遲緩、神態(tài)萎靡、倦臥、弓背、畏寒肢冷、體毛枯疏起球、尿多、下利清谷等腎陽虛征象。1.3艾柱來源按體重大小和性別作隨機區(qū)組設計,分為腎陽虛模型靈龜八法預防組(Ⅰ組)、腎陽虛模型命門灸預防組(Ⅱ組)、腎陽虛模型靈龜八法治療組(Ⅲ組)、腎陽虛模型命門灸治療組(Ⅳ組)、腎陽虛模型對照組(Ⅴ)等5組,每組10只。實驗于每日上午8:00~12:00進行。Ⅰ組:每日進行醋酸潑泥松龍注射液注射后,將豚鼠取仰臥位,四肢固定于實驗臺上,靈龜八法的開穴方法按謝感共“靈龜八法開穴簡表”進行,每日按當時所開的穴位進行艾柱灸,12日所開的穴位依次為公孫、外關(guān)、公孫、后溪、照海、列缺、公孫、列缺、照海、申脈、申脈、公孫,每日取一側(cè)穴位,左右交替進行。腧穴定位方法按《豚鼠針灸穴位圖譜的研制》標準及擬人比照法定位進行。艾炷施灸方法:先將施灸部位的體毛剪去,再涂以少量蘆薈汁(起粘貼艾炷及預防起泡作用),放上艾炷,無瘢痕直接灸,每次連續(xù)3壯,每壯以豚鼠全身掙扎為度,每日1次。造模結(jié)束后次日采血,本組實驗結(jié)束。Ⅱ組:每日進行醋酸潑泥松龍注射液注射后,將豚鼠取俯臥位,四肢固定于實驗臺上,在命門穴上進行艾炷灸。腧穴定位方法及艾柱施灸方法同Ⅰ組。造模結(jié)束后次日采血,本組實驗結(jié)束。Ⅲ組:造模期間不進行治療,造模結(jié)束豚鼠出現(xiàn)腎陽虛征象后開始每天按靈龜八法所開的穴位進行艾炷灸,12日所開的穴位依次為照海、列缺、照海、列缺、申脈、照海、外關(guān)、照海、足臨泣、外關(guān)、外關(guān)、外關(guān),每日取一側(cè)穴位,左右交替進行。腧穴的定位及施灸方法同Ⅰ組,共治療12天。Ⅳ組:造模期間不進行治療,造模結(jié)束豚鼠出現(xiàn)腎陽虛征象后開始每天在命門穴上進行艾炷灸。腧穴定位方法及艾柱施灸方法同I組,共治療12天。Ⅴ組:造模期間不進行治療,造模結(jié)束豚鼠出現(xiàn)腎陽虛征象后也不作任何處理,繼續(xù)按常規(guī)喂養(yǎng)12天。1.4實驗結(jié)束開發(fā)Ⅰ組及Ⅱ組動物在實驗前1天及造模結(jié)束次日采血,Ⅲ組、Ⅳ組及Ⅴ組則在實驗前1天、造模結(jié)束次日及實驗結(jié)束次日采血。采血方法:用毛細玻璃管從目內(nèi)眥或外眥刺入,刺中眶底靜脈叢后,用抗凝管接血約2mL,不斷搖晃1min,以免出現(xiàn)凝血現(xiàn)象。采用LG-R-80A型血液粘度計測定。1.5數(shù)據(jù)計數(shù)數(shù)據(jù)統(tǒng)計采用華西醫(yī)科大學衛(wèi)生統(tǒng)計教研室開發(fā)的PEMS2.1軟件進行,所有數(shù)據(jù)用均數(shù)±標準差表示,進行樣本均數(shù)比較的方差分析。2結(jié)果2.1s-1、30s-1、5-1、1s-1、2s-1、3s-1、3s-1的變化造模結(jié)束后腎陽虛模型靈龜八法預防組(Ⅰ組)未出現(xiàn)明顯腎陽虛征象,且200s-1、30s-1、5s-1、1s-1無明顯改變;腎陽虛模型命門灸預防組(Ⅱ組)未出現(xiàn)明顯腎陽虛征象,但200s-1及30s-1升高明顯,差異有顯著性意義(P<0.05),5s-1、1s-1無明顯改變(P>0.05)。見表1。2.2腎陽虛癥狀造模結(jié)束后腎陽虛模型靈龜八法治療組、腎陽虛模型命門灸治療組及腎陽虛模型對照組出現(xiàn)明顯的腎陽虛癥狀,且200s-1、30s-1升高,差異有顯著性意義(P<0.01或P<0.05),5s-1、1s-1無明顯改變(P>0.05)。經(jīng)治療后,Ⅲ組及Ⅳ組的腎陽虛癥狀基本消失,200s-1降低,與造模前相比差異無顯著性意義(P>0.05),30s-1則無明顯改變;而造模結(jié)束12天后,不經(jīng)任何治療的Ⅴ組的腎陽虛癥狀、200s-1、30s-1、5s-1等與造模后相比均無明顯改變見表3討論3.1材料的血液流變學改變中醫(yī)學認為,腎氣虛衰是衰老的主要原因,而陽氣是生命的根本,人體氣血的運行有賴陽氣的溫煦和推動。如果腎陽虛則無力推動氣血的運行,出現(xiàn)氣血運行緩慢的現(xiàn)象?，F(xiàn)代研究也表明血液流變性的改變是衰老的主要表現(xiàn)之一,而血液粘度是衡量血液流變性的一項綜合指標,故本實驗選用血液粘度為客觀指標,觀察腎陽虛模型豚鼠的血液流變學改變。關(guān)于血液粘度測量的切變率選擇,鄭德先等認為,一般高切變率在200S-1左右,中切變率在50s-1左右,低切變率在10s-1以下。在本實驗中,高切變率選擇用200S-1,中切變率選擇用30S-1,低切變率選擇用5S-1、1s-1。由于低切變率下的全血粘度主要受紅細胞聚集的影響,高切變率下的粘度主要受紅細胞變形性的影響,因此,低切變率下可以反映紅細胞的聚集程度,低切粘度越高,表明紅細胞聚集越強;高切變率下可反映紅細胞的變形程度,高切粘度高,紅細胞變形性降低。而中切粘度值為低切到高切粘度變化的過渡點,其臨床意義不十分明顯。在本實驗中,用醋酸潑泥松龍注射液對健康豚鼠肌注進行造模,連續(xù)用藥天模型豚鼠即出現(xiàn)活動遲緩、神態(tài)萎靡、倦臥、弓背、畏寒肢冷、體毛枯疏起球、尿多、下利清谷等腎陽虛征象,且其全血粘度中200s-1、30s-1升高,與造模前相比差異有顯著性意義,5s-1、1s-1則無明顯改變。高切粘度(200s-1)升高,說明醋酸潑泥松龍腎陽虛模型豚鼠的紅細胞變形性降低。3.2靈龜八法對腎陽虛模型豬鼠的預防作用在造模的同時進行靈龜八法按時開穴灸可以防止腎陽虛征象的出現(xiàn),同時防止了全血粘度的異常改變。命門灸也可以防止腎陽虛征象的出現(xiàn),但未能防止血液粘度的異常改變。說明靈龜八法按時開穴灸對腎陽虛模型豚鼠有良好的預防作用,對血液粘度異常改變的預防作用優(yōu)于命門灸。對腎陽虛模型豚鼠進行靈龜八法按時開穴灸治療,可以明顯改善腎陽虛癥狀,并使升高的200s-1恢復到造模前水平。命門灸也可以明顯改善腎陽虛癥狀,并使升高的200s-1恢復到造模前水平。在對腎陽虛模型豚鼠血粘度異常改變的治療上,靈龜八法按時開穴灸的療效與命門灸是一致的。命門是督脈上的穴位,是補腎壯陽的要穴,是治療腎陽虛的首選穴位。靈龜八法自古就是養(yǎng)生保健的