穗花馬先蒿活性成分的研究

枸杞是一種珍貴的中藥和補充劑。作為國家衛(wèi)生部門的同源藥物之一，它在國際市場上很受歡迎。但是枸杞的病蟲害不斷發(fā)生演變,給農(nóng)民造成巨大的經(jīng)濟損失。枸杞蚜蟲(Aphissp.)屬同翅目,是枸杞的重要害蟲,多年來以化學防治為主,由于藥農(nóng)對防效下降經(jīng)常采取隨意提高藥劑濃度和增加施藥次數(shù)等辦法,加速了枸杞蚜蟲抗性的發(fā)展,不僅增加了生產(chǎn)投入,也污染了環(huán)境。因此,尋找和開發(fā)新一代高效、低毒、無公害農(nóng)藥勢在必行。植物源農(nóng)藥因其來源廣、對害蟲作用機制獨特、不易產(chǎn)生抗性、與環(huán)境兼容等優(yōu)點而倍受全世界農(nóng)藥研究及應用部門的廣泛重視,已成為新一代農(nóng)藥研究的熱點。穗花馬先蒿(PedicularisspicataPall.)是玄參科馬先蒿屬一年生草本植物。它具有很高的藥用價值,性溫,味甘微苦,其根可入藥,有大補元氣,生精安神,強心之功效。目前,對穗花馬先蒿的研究主要集中在化學成分和藥理活性的研究,而對其殺蟲活性的研究未見報道。筆者首次對穗花馬先蒿的殺蟲活性進行了研究,并采用點滴法測試了穗花馬先蒿乙醇提取物及不同溶劑萃取物對枸杞蚜蟲的殺蟲活性,發(fā)現(xiàn)乙醇提取物和石油醚萃取物對枸杞蚜蟲均具有較好的殺蟲效果。該研究結果對穗花馬先蒿活性成分的進一步研究以及將其開發(fā)成新型的植物源農(nóng)藥具有參考價值。1材料和方法1.1材料表面1.1.1花和織物的制備穗花馬先蒿采自寧夏六盤山大水溝(海拔1300～2800m)。主要利用花和花序部分,將其與其他部位分開,陰干,放入恒溫箱烘干(40～45℃)。磨碎,過40目篩,裝入保鮮袋密封貯于冰箱中備用。1.1.2試驗對象枸杞蚜蟲采自沒有噴施藥劑的活體枸杞樹,選擇個體大小一致、無翅健康成蚜作供試昆蟲。1.1.3儀器、設備和儀器HP400GS型智能人工氣候培養(yǎng)箱(武漢瑞華儀器設備有限責任公司);AL204型電子天平(上海梅特勒-托利多儀器有限公司);RE-52AA型旋轉蒸發(fā)儀(上海亞榮生化儀器廠);SHB-Ⅲ型循環(huán)水式多用真空泵(鄭州長城工貿(mào)有限公司);KA-250DE型數(shù)控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)。1.2方法1.2.1乙醇提取物的制備稱取100g穗花馬先蒿的花和花序粉末,裝入1000ml錐形瓶中,加入10倍量的95%乙醇,浸泡48h后超聲提取40min,過濾,濾液減壓濃縮后得乙醇提取物(簡稱PSEE)。稱取PSEE15g,加10倍量蒸餾水,熱溶,裝入分液漏斗中,采用液-液分配萃取,依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇各萃取3～5次,最后分別將各萃取液和水萃取液減壓濃縮至浸膏,稱取適量,用50%丙酮配成一定濃度進行殺蟲活性測試。1.2.2前刺激素類型試蟲處理采用點滴法:穗花馬先蒿乙醇提取物用50%丙酮稀釋成系列濃度,在試蟲的前胸背板上點滴1μl,每個濃度處理30頭試蟲,重復5次,50%丙酮處理作對照。處理后的枸杞蚜蟲放入新鮮枸杞葉上,置于智能人工氣候培養(yǎng)箱內(nèi),分別于24、48h記錄試蟲的死亡情況,計算死亡率以及校正死亡率。2結果與分析2.1校正死亡率測定由表1可見,乙醇提取物對枸杞蚜蟲有較好的殺蟲效果。隨著濃度的增大和時間的延長,枸杞蚜蟲的校正死亡率都在升高;濃度為50.00mg/ml,48h校正死亡率可達96.38%,毒力回歸方程為:y=2.220x+2.859,LC50=9.21mg/ml,r=0.9907。2.2不同萃取物的害蟲將“1.配成4mg/ml的供試濃度,采用“1.2.2”的方法進行殺蟲活性測試,結果見表2。表2表明,各萃取物對枸杞蚜蟲的殺蟲活性存在顯著差異,殺蟲活性由大到小依次為:石油醚萃取物>正丁醇萃取物>氯仿萃取物>乙酸乙酯萃取物>水萃取物。其中石油醚萃取物的殺蟲效果最高,48h的校正死亡率可達96.38%;而水萃取物的殺蟲效果最低,48h的校正死亡率為20.29%這說明穗花馬先蒿的殺蟲活性部分主要是酯溶性的弱極性物質(zhì),具體成分有待進一步研究。3穗花馬先蒿的抗菌活性研究(1)該試驗采用冷浸和超聲提取相結合的方法,以95%的乙醇作提取劑,料液比為1∶10,提取穗花馬先蒿殺蟲活性成分,得率為15.30%。(2)穗花馬先蒿乙醇提取物對枸杞蚜蟲具有較好的殺蟲活性,LC50為9.21mg/ml。(3)通過比較不同極性萃取物的活性得出,穗花馬先蒿的殺蟲活性成分主要是酯溶性的弱極性物質(zhì),且主要分布在石油醚所在極性范圍內(nèi),這為穗花馬先蒿活性成分的進一步分離純化研究提供了理論