電解質及藥物對離體蛙心活動的影響【教學對象與學時】一、 教學對象：五年制本科二、 學時：4學時【目的要求】1、 掌握Straud離體蛙心的灌流方法2、 觀察鈉、鉀、鈣三種離子與腎上腺素、異丙腎上腺素、去甲腎上腺素、乙酰膽堿、強心甙、氨茶堿等對離體心臟的作用【課堂提問及解答】一、離體蛙心如何制備？蟾蜍雙毀髓，將雙毀髓的蟾蜍仰臥固定在蛙板上，夾起胸骨后端的腹部皮膚剪一小口，再將手術剪由切口處伸人皮下向左右兩惻鎖骨外惻方向剪開皮膚，并向頭端掀開。用鑷子提起胸骨后端的腹肌并剪一小口，將手術剪由切口處伸人腹腔內，緊貼胸壁（以免損壞心臟和血管）沿皮膚切口剪開肌肉，剪斷左右鳥骨和鎖骨，使創(chuàng)口呈倒三角形。用眼科鑷提起心包膜并用眼科剪剪開即可暴露心臟。在暴露心臟的主動脈干下方引兩根線，一條在主動脈上端結扎作插管時牽引用，另一根則在動脈圓錐上方，系一松結用于結扎固定蛙心插管。左手持左主動脈遠心端的結扎線，用眼科剪在松結上方左主動脈根部剪一小斜口，右手將盛有少許任氏液，大小適宜的蛙心插管由此剪口處插入動脈圓錐，當插管頭到達動脈圓錐時，再將插管稍向后退，并轉向心室中央方向，在心室收縮期插入心室，判斷蛙心插管是否進入心室可根據插管內的任氏液液面能否隨心室的舒縮而上下波動。如蛙心插管已進入心室，則將預先準備好的松結扎緊，并固定在蛙心插管的側鉤上以免蛙心插管滑出心室。剪斷主動脈左右分支。輕輕提起蛙心插管以抬高心臟，用一線在靜脈竇與腔靜脈交界處作一結扎，結扎線應盡量下壓，以免傷及靜脈竇，在結扎線外側剪斷所有組織，將蛙心游離出來即可。二、腎上腺素、乙酰膽堿、強心甙、氨茶堿這幾種藥物中能增強心臟收縮張力的是哪幾個？腎上腺素、強心甙、氨茶堿【實驗原理介紹】蟾蜍心臟離體后，用理化特性近似其血漿的任氏液，在一定時間內可以保持心臟節(jié)律性收縮舒張，改變灌流液成分，心臟收縮舒張幅度與頻率會隨之變化?！局攸c和難點】一、 重點1、 Straud離體蛙心的制備與灌流方法；2、 BL-420生物信息記錄系統(tǒng)檢測記錄心肌收縮張力曲線。二、 難點1、 0.65%NaCl對心肌收縮張力曲線影響的機制2、 乙酰膽堿對心肌收縮張力曲線影響的機制【觀察指標】心功能：心跳頻率、幅度，心肌收縮張力曲線和舒縮程度【實驗方法與步驟】一、 實驗動物：蟾賒二、 實驗分組：共6組三、 藥品、器材：生物信息記錄儀、張力傳感器、蛙類手術器械一套、玻璃分針、濾紙、棉球、澆杯2個、縫線、滴管2支、蛙心夾、鐵支架、雙凹夾2個、試管夾、蛙心插管、任氏液、0.65%NaCl、3%CaCl2、1%KCl、1:10000腎上腺素、1:100000乙酰膽堿、1:10000異丙腎上腺素、25:1000氨茶堿(2.5%)、25:100000毒K(0.025%)四、 觀察指標：心功能：心跳頻率、幅度，心肌收縮張力曲線和舒縮程度五、 實驗步驟：1、Straud離體蛙心制備(一)蟾蜍雙毀髓術枕骨大孔的定位：左手握住軀干及肢體，右手母指與食指握住蟾蜍的唇尖部前后搖動，在其頭部背面可見一明顯的凹陷點即為枕骨大孔處或左手握住蟾蜍軀干及肢體，食指向下壓蟾蜍的頭部，用金屬探針（蛙鉆）由枕骨沿正中線向脊柱端觸劃，當觸到凹陷處即枕骨大孔處。（2）蟾蜍雙毀髓金屬探針從枕骨大孔垂直進針后與軀干平行向前折插入顱腔左右攪動搗毀腦組織，再將針尖后退至枕骨大孔與軀干平行向后折刺入脊椎管搗毀脊髓至蟾蜍四肢松軟、呼吸消失既可備用。（三）蛙心標本制備蟾蜍雙毀髓，將雙毀髓的蟾蜍仰臥固定在蛙板上，夾起胸骨后端的腹部皮膚剪一小口，再將手術剪由切口處伸人皮下向左右兩惻鎖骨外惻方向剪開皮膚，并向頭端掀開。用鑷子提起胸骨后端的腹肌并剪一小口，將手術剪由切口處伸人腹腔內，緊貼胸壁（以免損壞心臟和血管）沿皮膚切口剪開肌肉，剪斷左右鳥骨和鎖骨，使創(chuàng)口呈倒三角形。用眼科鑷提起心包膜并用眼科剪剪開即可暴露心臟。在暴露心臟的主動脈干下方引兩根線，一條在主動脈上端結扎作插管時牽引用，另一根則在動脈圓錐上方，系一松結用于結扎固定蛙心插管。左手持左主動脈遠心端的結扎線，用眼科剪在松結上方左主動脈根部剪一小斜口，右手將盛有少許任氏液，大小適宜的蛙心插管由此剪口處插入動脈圓錐，當插管頭到達動脈圓錐時，再將插管稍向后退，并轉向心室中央方向，在心室收縮期插入心室，判斷蛙心插管是否進入心室可根據插管內的任氏液液面能否隨心室的舒縮而上下波動。如蛙心插管已進入心室，則將預先準備好的松結扎緊，并固定在蛙心插管的側鉤上以免蛙心插管滑出心室。剪斷主動脈左右分支。輕輕提起蛙心插管以抬高心臟，用一線在靜脈竇與腔靜脈交界處作一結扎，結扎線應盡量下壓，以免傷及靜脈竇，在結扎線外側剪斷所有組織，將蛙心游離出來即可。

3、觀察項目：正常蛙心收縮張力曲線；新鮮任氏液換洗待曲線恢復正常后將任氏液換為0.65%NaCl溶液，觀察心功能；新鮮任氏液換洗待曲線恢復正常后在任氏液中加3%CaCl21?2滴，觀察心功能;新鮮任氏液換洗待曲線恢復正常后在任氏液中加1%KCl1?2滴，觀察心功能；新鮮任氏液換洗待曲線恢復正常后在任氏液中加1：10000腎上腺素溶液1?2滴，觀察心功能；新鮮任氏液換洗待曲線恢復正常后在任氏液中加1：100000的乙酰膽堿1?2滴，觀察心功能；新鮮任氏液換洗待曲線恢復正常后在任氏液中加1：10000異丙腎上腺素1?2滴，觀察心功能；新鮮任氏液換洗待曲線恢復正常后插管內任氏液換成低鈣任氏液，觀察心功能；當心力出現衰竭時，加入25：100000的毒K0.3ml觀察心功能變化，然后重復(8)。當心力出現衰竭時，加入25:10000氨茶堿0.3ml，觀察心功能變化?！咀⒁馐马棥?、 制備蛙心標本時，勿傷及靜脈竇；2、 上述各實驗項目，一旦出現變化就應立即用新鮮任氏液換洗，以免心肌受損，但必須待心功能恢復正常后方能進行下一步實驗；3、 蛙心插管液面應保持恒定，以免影響結果；4、 滴加藥品和換取新鮮任氏液須及時標記，以便觀察分析；5、 吸新鮮任氏液和吸蛙心插管內廢液的滴管應區(qū)分專用，不可混淆使用，以免影響實驗結果；6、 藥物作用不明顯時，可適量增加，密切觀察藥物劑量添加后的實驗結果?！纠碚擃A期結果】觀察項目心跳頻率心跳幅度對照0.65%NaCl減慢減小3%CaCl2增快增大1%KCI增快減小1：10000腎上腺素增快增大1：100000乙酰膽堿減慢減小1：10000異丙腎上腺素增快增大低鈣任氏液減慢減小25：100000毒K減慢增大25:10000氨茶堿增快增大III入 丁▼ ▼5.乙酰膽堿Ach自律性降低，心率減慢心肌收縮力降低6、1：10000異丙腎上腺素激動B1受體，機制同腎上腺素，心率加快，收縮增強7、 低鈣任氏液細胞外液鈣離子減少，興奮收縮耦聯削弱，心率減慢，收縮減弱，模擬心衰8、 25：100000毒K強心苷類藥物，可選擇性作用于心肌細胞，可競爭性抑制心肌細胞膜上的Na+-K+-ATP酶，使心肌細胞內Ca2+含量增加，產生正性肌力作用，使心肌收縮力增強，同時強心苷可增強迷走神經活性，具有負性頻率作用，使心率減慢9、25:10000氨茶堿磷酸二酯酶抑制劑，磷酸二酯酶是cAMP降解酶，抑制此酶可增加細胞內cAMP含量，發(fā)揮正性肌力作用【結論】1、 0.65%NaCl，1：100000Ach，低鈣任氏液可使蛙心頻率減慢，心跳幅度減??；2、 3%CaCl2,1：10000腎上腺素，1：10000異丙腎上腺素，25:10000氨茶堿可使蛙心頻率