消毒劑、注射用水除菌過濾效果驗(yàn)證方案姓名部門/職務(wù)簽名日期（年年年年-月月-日日）起草人高通凍干粉針劑車間/配液操作員審核人張振民凍干粉針劑車間/主任審核人劉萬勇工程部/經(jīng)理審核人錢小琴Q(mào)C部門/經(jīng)理審核人虞靜QA部門/經(jīng)理同意人胡超質(zhì)量管理負(fù)責(zé)人目錄129731.1概述 183991.2目的 190161.3職責(zé) 3233641.4驗(yàn)證前培訓(xùn) 3174661.5文獻(xiàn)統(tǒng)計(jì)規(guī)定 3105521.6驗(yàn)證對(duì)象描述 4248471.7可接受原則 4291211.8驗(yàn)證環(huán)節(jié)及成果 443471.9偏差 939731.10變更 9129701.11參考文獻(xiàn) 9279481.12修訂歷史 10245371.13附錄列表 10概述GMP附錄無菌第九章第四十四條：A/B級(jí)干凈區(qū)應(yīng)當(dāng)使用無菌的或經(jīng)無菌解決的消毒劑和清潔劑。我司在A/B級(jí)干凈區(qū)使用的消毒劑有75%乙醇溶液、1%PAA溶液，清潔劑為注射用水。凍干粉針劑車間根據(jù)生產(chǎn)實(shí)際狀況，B級(jí)區(qū)使用消毒劑在C級(jí)區(qū)消毒液配制間配制，C級(jí)區(qū)消毒液配制間取用。過濾器、接受用不銹鋼桶經(jīng)濕熱滅菌后在B級(jí)區(qū)層流罩下安裝，過濾管道經(jīng)滅菌后從B級(jí)灌裝間經(jīng)傳遞窗旁孔通到消毒液配制間。按GMP第七章第一百四十條規(guī)定對(duì)該除菌方式進(jìn)行驗(yàn)證。目的為驗(yàn)證上述除菌及傳遞方式的可靠性和穩(wěn)定性，特制訂本驗(yàn)證方案，進(jìn)行驗(yàn)證。職責(zé)設(shè)備使用部門負(fù)責(zé)確認(rèn)文獻(xiàn)的起草，確認(rèn)工作的組織與實(shí)施。QC負(fù)責(zé)樣品的檢測(cè)。QA負(fù)責(zé)現(xiàn)場取樣及確認(rèn)工作實(shí)施的監(jiān)督。QA經(jīng)理負(fù)責(zé)有關(guān)確認(rèn)文獻(xiàn)的審核。質(zhì)量管理負(fù)責(zé)人負(fù)責(zé)有關(guān)確認(rèn)文獻(xiàn)的同意。QA文檔管理員負(fù)責(zé)給出確認(rèn)文獻(xiàn)的文獻(xiàn)編號(hào)，以及有關(guān)文獻(xiàn)的發(fā)放、回收及歸檔。驗(yàn)證前培訓(xùn)驗(yàn)證小組應(yīng)在本確認(rèn)方案同意后進(jìn)行本確認(rèn)方案的專項(xiàng)培訓(xùn)，并確保全部參加本確認(rèn)工作的人都已熟知本方案規(guī)定，并統(tǒng)計(jì)在《培訓(xùn)統(tǒng)計(jì)表》（QA-MAN-005-H）。文獻(xiàn)統(tǒng)計(jì)規(guī)定嚴(yán)格按照《良好的文獻(xiàn)統(tǒng)計(jì)規(guī)范》（QA-MAN-003）中對(duì)質(zhì)量統(tǒng)計(jì)填寫的規(guī)定進(jìn)行確認(rèn)報(bào)告的填寫及統(tǒng)計(jì)。確認(rèn)操作及統(tǒng)計(jì)應(yīng)最少兩人進(jìn)行，確保全部確實(shí)認(rèn)測(cè)試均完畢，并有足夠確實(shí)認(rèn)數(shù)據(jù)被提供。驗(yàn)證對(duì)象描述75％乙醇溶液的重要消毒成分為乙醇，屬中效消毒劑，其作用機(jī)理是（1）使蛋白質(zhì)變性：乙醇作用于細(xì)菌細(xì)胞首先起到脫水作用，乙醇分子進(jìn)入到蛋白質(zhì)分子的肽鏈環(huán)節(jié)，使蛋白質(zhì)發(fā)生變性沉淀；（2）破壞細(xì)菌細(xì)胞壁：乙醇含有很強(qiáng)的滲入作用，60％～85％的乙醇比較容易滲入到菌體內(nèi)，使得細(xì)菌細(xì)胞破壞溶解。（3）對(duì)微生物酶系統(tǒng)破壞：乙醇通過克制細(xì)菌酶系統(tǒng)，特別是脫氫酶和氧化酶等，妨礙了正常代謝，克制細(xì)菌生長繁殖。1%PAA是一種系廣譜、速效、高效滅菌劑，本品是強(qiáng)氧化劑，能夠殺滅一切微生物，對(duì)病毒、細(xì)菌、真菌及芽孢均能快速殺滅，可廣泛應(yīng)用于多個(gè)器具及環(huán)境消毒。0.2%溶液接觸10分鐘基本可達(dá)成滅菌目的。用于空氣、環(huán)境消毒、防止消毒。驗(yàn)證所需設(shè)備、儀器及物品驗(yàn)證所需設(shè)備、儀器驗(yàn)證所需物品培養(yǎng)箱、凈化工作臺(tái)、除菌過濾器（密理博0.22μm；材質(zhì)：聚醚砜）、完整性測(cè)試儀、蠕動(dòng)泵、不銹鋼桶、脈動(dòng)真空滅菌柜、硅膠導(dǎo)管、集菌儀、濾膜、一次性全封閉集菌培養(yǎng)器75%乙醇、1%PAA、注射用水、營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基、改良馬丁培養(yǎng)基、硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基。pH7.0氯化鈉-蛋白胨緩沖液、20g/L硫代硫酸鈉溶液。驗(yàn)證環(huán)節(jié)及成果人員確認(rèn)在本確認(rèn)方案同意后，按照SOP《培訓(xùn)管理》（QA-MAN-005）的規(guī)定，組織對(duì)有關(guān)人員進(jìn)行本驗(yàn)證方案及本驗(yàn)證有關(guān)SOP、技術(shù)資料的專項(xiàng)培訓(xùn)，并確保全部參加本次確認(rèn)工作的人都已悉知本方案及有關(guān)SOP、技術(shù)資料的規(guī)定，并填寫《培訓(xùn)統(tǒng)計(jì)》（QA-MAN-005-H）。文獻(xiàn)確認(rèn)執(zhí)行此確認(rèn)方案前，應(yīng)確認(rèn)下列文獻(xiàn)已制訂并被同意。序號(hào)文件名文件編碼生效日期1微生物、無菌分析辦法驗(yàn)證/管理原則操作規(guī)程QC-VAL-003-012無菌檢查法原則操作規(guī)程QC-OPE-414-013消毒劑配制、發(fā)放、使用管理MF-MAN-022-01確認(rèn)人/日期:復(fù)核人/日期：過濾前準(zhǔn)備不銹鋼桶清洗后在C級(jí)消毒劑配制間準(zhǔn)備好注射用水，待過濾；不銹鋼桶清洗后在C級(jí)消毒劑配制間按規(guī)定（清潔劑和消毒劑的配制、使用規(guī)定）配制消毒劑，待過濾（消毒劑為75%乙醇、1%PAA，清潔劑為注射用水）；消毒劑配制：75%乙醇（12670ml）：取95%乙醇10000ml加注射用水至12670ml；1%PAA（4000ml）：取PAA溶液40ml加注射用水至4000ml。清潔劑：注射用水40000ml。過濾用的硅膠管道、除菌過濾器、器具及接受用不銹鋼桶已清洗，經(jīng)脈動(dòng)真空滅菌柜（工器具滅菌柜）121℃×20分鐘滅菌；滅菌后物品從B+A級(jí)灌裝區(qū)側(cè)滅菌柜門取出，放于B級(jí)區(qū)的層流（FFU）下待用。過濾裝置安裝打開不銹鋼套管兩頭的密封蓋；硅膠管道一頭連接除菌過濾器→接受容器，放于B級(jí)區(qū)的層流（FFU）下，另一頭通過墻體不銹鋼套管連接蠕動(dòng)泵→配料桶；連接過濾器時(shí)，必須按過濾器底下的箭頭方向連接，如沒有箭頭方向，則按“短進(jìn)長出”連接；過濾器與接受桶相連時(shí)用硅橡膠管接至接受桶進(jìn)液口，接受桶下嘴口閥門關(guān)閉。過濾示意圖①③④②墻體注：①配料桶②蠕動(dòng)泵放于①③④②墻體過濾及寄存確認(rèn)管道連接無誤，打開蠕動(dòng)泵電源，除菌過濾器先放去少量空氣擰緊放氣閥，調(diào)節(jié)蠕動(dòng)泵運(yùn)轉(zhuǎn)速度至正常過濾。過濾次序：75%乙醇、注射用水、1%PAA。灌裝人員將除菌過濾后的注射用水、消毒劑接受桶加蓋密閉，放于指定位置，按需取用。過濾結(jié)束配料桶、過濾用的硅膠管道、除菌過濾器、器具及接受容器經(jīng)傳遞窗（B級(jí)傳出）傳至C級(jí)工器具清洗間清洗，用干凈壓縮空氣吹干后寄存。濾芯完整性測(cè)試確認(rèn)目的：確認(rèn)濾芯水侵入能夠測(cè)試合格。辦法：將濾芯安裝在濾殼內(nèi)，連接好儀器后按照水侵入法測(cè)試0.2μm濾芯完整性。濾芯為密理博5英寸0.2μm折疊式濾芯，用密理博XIT4N0001型完整性測(cè)試儀檢測(cè)?？山邮茉瓌t：0.22μm濾芯水侵入檢測(cè)合格。濾芯型號(hào)濾芯序列號(hào)潤濕溶液最小流量值檢測(cè)溫度與否合格□是□否備注確認(rèn)人/日期:復(fù)核人/日期：取樣使用滅菌取樣瓶接取B級(jí)區(qū)不銹鋼桶內(nèi)消毒劑或注射用水（消毒劑取50ml，注射用水取500ml。每種樣品各取3個(gè)樣，過濾前中后）。使用滅菌取樣瓶接取C級(jí)區(qū)配液桶內(nèi)消毒劑或注射用水（消毒劑取50ml，注射用水取500ml。每種樣品各取1個(gè)樣）。消毒劑過濾效果確認(rèn)消毒劑中和劑選擇1%PAA20g/L硫代硫酸鈉溶液75%乙醇pH7.0氯化鈉-蛋白胨緩沖液薄膜過濾法（濾過前樣品測(cè)試微生物程度）吸取中和產(chǎn)物溶液（以1份消毒劑50ml加9份中和劑450ml配制而成）混勻，采用薄膜過濾法解決，沖洗后，取出濾膜，菌面朝上置于營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基或玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基平皿上。將營養(yǎng)瓊脂平板放于30～35℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)3天，玫瑰紅鈉瓊脂平板放置于23～28℃培養(yǎng)5天，計(jì)數(shù)。成果見附錄A：《微生物檢查統(tǒng)計(jì)》（VPL-IW-OTH-15-009-A-01）。注射用水：取注射用水100ml，采用薄膜過濾法解決，沖洗后，取出濾膜，菌面朝上置于營養(yǎng)瓊脂或玫瑰紅鈉培養(yǎng)基平皿上。將營養(yǎng)瓊脂平板放于30～35℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)3天，玫瑰紅鈉瓊脂平板放置于23～28℃培養(yǎng)5天，計(jì)數(shù)。成果見附錄A：《微生物檢查統(tǒng)計(jì)》（VPL-QC-MV-15-005-A-01）。無菌檢查（過濾后樣品測(cè)試）75%酒精A.陽性對(duì)照組取供試品50ml，用450mlpH7.0氯化鈉-蛋白胨緩沖液沖洗，沖洗后，加入100ml硫乙醇流體培養(yǎng)基或改良馬丁培養(yǎng)基。分別接種1ml的金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌于對(duì)應(yīng)的硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基濾筒內(nèi)；接種1ml的白色念珠菌于改良馬丁培養(yǎng)基濾筒內(nèi)。將上述硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基按30～35℃、改良馬丁培養(yǎng)基按23～28℃，培養(yǎng)5天，逐天觀察。B.中和劑陰性對(duì)照組用450mlpH7.0氯化鈉-蛋白胨緩沖液沖洗，沖洗后，加入100ml硫乙醇流體培養(yǎng)基或改良馬丁培養(yǎng)基。將上述硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基按30～35℃、改良馬丁培養(yǎng)基按23～28℃，培養(yǎng)14天，逐天觀察。C.供試品對(duì)照組取供試品50ml，用450mlpH7.0氯化鈉-蛋白胨緩沖液沖洗，沖洗后，加入100ml硫乙醇流體培養(yǎng)基或改良馬丁培養(yǎng)基。將上述硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基按30～35℃、改良馬丁培養(yǎng)基按23～28℃，培養(yǎng)14天，逐天觀察。成果見附錄B：《無菌檢查統(tǒng)計(jì)》（VPL-IW-OTH-15-009-B-01）。1%PAAA.陽性對(duì)照組取供試品50ml，用450ml滅菌后的20g/L硫代硫酸鈉溶液沖洗，沖洗后，加入100ml硫乙醇流體培養(yǎng)基。接種1ml枯草芽孢桿菌于硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基濾筒內(nèi)。將上述硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基按30～35℃，培養(yǎng)5天，逐天觀察。B.中和劑陰性對(duì)照組用450ml20g/L硫代硫酸鈉溶液沖洗，沖洗后，加入100ml硫乙醇流體培養(yǎng)基或改良馬丁培養(yǎng)基。將上述硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基按30～35℃、改良馬丁培養(yǎng)基按23～28℃，培養(yǎng)14天，逐天觀察。C.供試品對(duì)照組取供試品50ml，用450ml滅菌后的20g/L硫代硫酸鈉溶液沖洗，沖洗后，加入100ml硫乙醇流體培養(yǎng)基或改良馬丁培養(yǎng)基。將上述硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基按30～35℃、改良馬丁培養(yǎng)基按23～28℃，培養(yǎng)14天，逐天觀察。成果見附錄B：《無菌檢查統(tǒng)計(jì)》（VPL-IW-OTH-15-009-B-01）。注射用水取供試品100ml沖洗濾膜，沖洗后，加入100ml硫乙醇流體培養(yǎng)基或改良馬丁培養(yǎng)基。將上述硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基按30～35℃、改良馬丁培養(yǎng)基按23～28℃，培養(yǎng)14天，逐天觀察。成果見附錄B：《無菌檢查統(tǒng)計(jì)》（VPL-IW-OTH-15-009-B-01）?？山邮茉瓌t：過濾前微生物程度檢查品種可接受原則75%酒精細(xì)菌、霉菌及酵母菌總數(shù)不得超出10個(gè)/100ml過氧乙酸消毒液PAA注射用水過濾后無菌檢查品種可接受原則75%酒精中和劑陰性對(duì)照應(yīng)澄清，無菌生長、陽性對(duì)照組應(yīng)渾濁，實(shí)驗(yàn)菌生長良好、供試品對(duì)照組應(yīng)澄清、無菌生長過氧乙酸消毒液PAA注射用水供試品應(yīng)無菌生長偏差若在整個(gè)方案執(zhí)行過程中所發(fā)生的偏差，按照SOP：QA-MAN-011《偏差解決》進(jìn)行解決，并填寫《偏差調(diào)查解決報(bào)告單》。對(duì)于過程中出現(xiàn)的偏差進(jìn)行總體評(píng)定，確認(rèn)偏差因素及其影響，并提出改善方案及防止、糾正偏差的辦法。變更當(dāng)執(zhí)行