京尼平苷梔子苷及其苷元京尼平的藥理活性研究進(jìn)展

單醇二級化合物的存在著不同的藥理作用活性和應(yīng)用價值。近年來，它引起了人們的廣泛關(guān)注和發(fā)展。本文從植物中分布、分離(制備)純化、定量測定、藥物代謝、藥理活性和應(yīng)用現(xiàn)狀等方面綜述了京尼平苷及京尼平的研究進(jìn)展,并對其毒性進(jìn)行簡單概述,以期為其進(jìn)一步研究和開發(fā)利用提供參考,也為其臨床應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。1梔子浚里屬genusragrangeb隊(duì)伍目前已報(bào)道含有京尼平苷的植物有茜草科梔子GardeniajasminoidesEllis、水梔子GardeniajasminoidesEllisvar.radicans(Thunb.)Makino、大花梔子Gardeniajasminoidesform.grandiflora(Lour.)Makino和朱如拉GardeniejasminodeEllis,杜仲科杜仲EucommiaulmoidesOliv.、衛(wèi)矛科陜西衛(wèi)矛EuonymusschensianusMaxim.、列當(dāng)科肉蓯蓉CistanchedeserticolaY.C.Ma、莧科牛膝AchyranthesbidentataBl.、鱗毛蕨科香鱗毛蕨Dryopterisfragrans(L.)Schott和防己科云南青牛膽Tinosporasagittatavar.yunnanensis(S.Y.Hu)H.S.Lo等,其中茜草科植物中含量較高。2京尼平苷的分離純化從梔子干果或提取梔子黃色素后的廢液中提取京尼平苷,一般采用有機(jī)溶劑在索氏提取器中提取,得到梔子總活性成分;再以活性炭脫色,有機(jī)溶劑脫脂,濃縮;然后硅膠柱分離,重結(jié)晶,濾過,即得京尼平苷晶體。最常用的提取劑或洗脫劑為乙醇,常用的預(yù)處理或后續(xù)處理方法包括大孔吸附樹脂法、陽離子交換樹脂和陰離子交換樹脂連用、滲漉法、硅膠柱色譜法、重結(jié)晶等。近來又有新方法報(bào)道,如D-301樹脂精制、固相萃取、HPLC制備、雙水相系統(tǒng)(PE62、KH2PO4和乙醇)提取、纖維素酶預(yù)處理、膜技術(shù)耦合大孔吸附樹脂、高速逆流色譜(HSCCC)等。從杜仲皮或葉中提取京尼平苷,一般選用極性較大的溶劑滲漉或熱回流提取,提取液濃縮后,加水轉(zhuǎn)溶,除去不溶性雜質(zhì);石油醚萃取,除去脂溶性雜質(zhì);對水溶性雜質(zhì),用鉛沉法或離子交換樹脂除去;再用正丁醇萃取,或活性炭吸附、有機(jī)溶劑洗脫,得粗苷,通過色譜法和重結(jié)晶分離純化。彭密軍等用制備液相色譜-臺階梯度法分離純化了杜仲中京尼平苷;曹慧對比研究了乙醇提取法、酶提取法、半仿生提取法和CO2超臨界提取法從杜仲中提取京尼平苷;以溶劑萃取法純化一次,再用A型大孔樹脂法純化,最后硅膠柱色譜法純化,得質(zhì)量分?jǐn)?shù)為96.54%的京尼平苷單體。酸堿水解打斷糖苷鍵生成苷元的方法不適用于京尼平,環(huán)烯醚萜結(jié)構(gòu)在酸堿作用下會遭到破環(huán),影響其生物活性,所以用微生物轉(zhuǎn)化、酶解等溫和方法生產(chǎn)京尼平成為必然趨勢。利用高產(chǎn)β-葡萄糖苷酶菌種制備游離細(xì)胞和固定化細(xì)胞,在溫和條件下將京尼平苷轉(zhuǎn)化為京尼平,轉(zhuǎn)化率高達(dá)98%。王永宏分別考察了以梔子帶渣提取液和95%京尼平苷為底物,青霉菌發(fā)酵制備京尼平,京尼平苷的轉(zhuǎn)化率分別達(dá)到96.7%和98%以上;通過樹脂分離,硅膠柱純化和重結(jié)晶,得京尼平針狀結(jié)晶,質(zhì)量分?jǐn)?shù)≥98%。Xu等以青霉菌Penicilliumnigricans發(fā)酵梔子產(chǎn)生京尼平,轉(zhuǎn)化率達(dá)95%。3檢測方法3.1紫外分光光度法TLC是一種簡單快速的色譜方法,可用于梔子藥材及其飲片中京尼平苷的定量測定,且可用于由梔子組成的復(fù)方制劑。該法一般是在GF254薄層板或高效板及HF254薄層板上展開,在紫外燈下定位,對其進(jìn)行單、雙波長掃描定量。所采用的展開系統(tǒng)有醋酸乙酯-石油醚(60~90℃沸程)、環(huán)己烷-醋酸乙酯-冰醋酸、正己烷-醋酸乙酯-冰醋酸上層液、甲苯-醋酸乙酯-甲酸、氯仿-甲醇-濃氨水、氯仿-醋酸乙酯-甲醇等。該方法簡便、快捷,結(jié)果準(zhǔn)確、穩(wěn)定,為京尼平苷和京尼平質(zhì)量控制提供了有效的監(jiān)控手段。文宇真和屈愛桃等分別以雙波長薄層掃描法測定了克清片和蒙藥伊赫-哈日-12中梔子苷含量。3.2流動相的檢測京尼平苷定量檢測一般采用RP-HPLC法,該方法是國內(nèi)外公認(rèn)的較準(zhǔn)確的測定方法。梔子及其制劑中京尼平苷的測定,現(xiàn)多采用藥典法。但也有報(bào)道采用不同的流動相及檢測波長:Tsai等用乙腈-甲醇-磷酸二氫鈉(pH4.6)(5∶15∶80)為流動相,波長240nm;徐燕等以多波長線性梯度洗脫同時測定了梔子中3類9種成分,流動相A為0.3%甲酸水溶液,流動相B為甲醇-乙腈(9∶1),波長240、330、440nm;李清等用流動相乙腈-水(H3PO4調(diào)pH4.0)(11∶89),波長240nm;曹晶萍等用流動相0.05mol/L磷酸氫二鈉-甲醇(72∶28),磷酸調(diào)pH6.80,波長240nm;王永宏等用流動相甲醇-水(45∶55)。杜仲及其制劑中京尼平苷的測定稍有不同,流動相多用甲醇-水-冰醋酸系統(tǒng),檢測波長多用237和240nm;彭密軍等同時測定了京尼平苷、京尼平苷酸和桃葉珊瑚苷的含量,流動相為甲醇-水-醋酸(25∶75∶1),波長220nm;張鞍靈等同時檢測杜仲葉中京尼平苷、京尼平苷酸和綠原酸3種成分,流動相甲醇-水-冰醋酸(9∶90∶1),波長237nm;戚向陽等同時檢測了杜仲中京尼平苷、京尼平苷酸及綠原酸3種成分,流動相甲醇-水-冰醋酸(19∶81∶1.5);曹慧等同時對杜仲提取、分離純化產(chǎn)物京尼平苷和京尼平苷酸進(jìn)行分析,流動相為甲醇-水-冰醋酸(20∶79.5∶0.5),波長237nm,同時PAD檢測;李欽等同時測定了杜仲沖劑中京尼平苷、京尼平苷酸和綠原酸含量,流動相為甲醇-水-冰乙酸(14∶86∶1.2),波長237nm。3.3薄層色譜板的操作實(shí)驗(yàn)室還可采用薄層色譜分離、分光光度法測定和硫酸銅-分光光度法測定。前者每次都需要制備一定數(shù)量的薄層色譜板,薄層板的好壞直接影響測定結(jié)果準(zhǔn)確與否,受人為操作因素影響太大,且薄層板硅膠對京尼平苷有一定的吸附作用,不能完全洗脫,造成結(jié)果偏低而不準(zhǔn)確;后者采用活性炭脫色后,濾液需在冰箱中過夜,耗時較長,不適合企業(yè)快速檢測分析,且測定結(jié)果偏低。3.4檢測測定結(jié)果鄧勇等用京尼平苷與對二氨基苯甲醛在強(qiáng)酸條件下加熱反應(yīng)顯色,分光光度法測定594nm處吸光度;該法所需儀器簡單,靈敏度高,但測定工作不及時易產(chǎn)生聚沉現(xiàn)象,干擾測定結(jié)果,且不能分離植物中共存的京尼平苷和京尼平苷酸,使結(jié)果偏高。董娟娥等對上述方法進(jìn)行了改進(jìn),形成“改進(jìn)對二甲氨基苯甲醛法”:用醋酸代替鹽酸,消除了聚沉現(xiàn)象,吸光度在2h內(nèi)保持不變,測定結(jié)果較準(zhǔn)確。京尼平與氨基酸在70℃可生成梔子藍(lán)色素,可在波長590nm條件下用分光光度法測定含量,該方法所需儀器簡單,靈敏度較高,且此藍(lán)色素在較長時間內(nèi)不退色、不發(fā)生沉淀,測試結(jié)果準(zhǔn)確。梁華正等建立了一種新的京尼平苷和京尼平定量測定方法:以β-葡萄糖苷酶水解京尼平苷,水解產(chǎn)物京尼平與氨基酸反應(yīng)顯色,分光光度法測定含量,波長590nm。3.5檢出限、測定考察彭密軍等采用HPLC-MS法測定了杜仲中京尼平苷等3種成分含量,京尼平苷質(zhì)核比(m/z)為411,線性范圍0.31~4.65μg(r=0.996),檢出限0.3ng,平均回收率95%(RSD=2.9%);該方法操作簡便,重復(fù)性好,專屬性強(qiáng),準(zhǔn)確可靠,適用于對復(fù)雜天然產(chǎn)物樣品的定性定量分析。Wang等報(bào)道了以LC/MS/MS檢測京尼平苷含量的方法:通過與醋酸銨形成正離子衍生物[M+NH4]+和與醋酸形成負(fù)離子衍生物[M+CH3COO]-而測定其含量。3.6梔子中京尼平苷和藏紅花素的檢測黃寶美等采用快速毛細(xì)管電泳安培法在20mmol/LTris-HCl緩沖溶液(pH8.50),25kV高壓,0.86V工作電極電位的條件下,4min內(nèi)實(shí)現(xiàn)了梔子中京尼平苷和藏紅花素兩種組分的測定。4藥物代謝4.1京尼平苷對大鼠腸道細(xì)菌代謝的影響一般情況下,中草藥中含量較高的苷類成分,并不是直接在血液里起效的成分,而是其代謝產(chǎn)物——苷元及其衍生物。生藥采集、曬干、炮制和煎熬等加工過程中天然活性物質(zhì)部分水解變化;中藥服用之后,在消化系統(tǒng)酶、胃酸、腸道菌、腸膜酶等作用下改變成另一種結(jié)構(gòu),進(jìn)入血液起藥效作用。如梔子中的京尼平苷,必須通過腸內(nèi)細(xì)菌的β-葡萄糖苷酶轉(zhuǎn)化成京尼平才能被吸收從而發(fā)揮促進(jìn)膽汁分泌的藥效。腸內(nèi)代謝過程見圖1。將京尼平苷與人體腸內(nèi)菌叢溫孵培養(yǎng),可檢出兩個轉(zhuǎn)化產(chǎn)物京尼平和京尼平堿,用苦杏仁β-葡萄糖苷酶在氯化銨存在下與京尼平苷溫孵培養(yǎng)4h,京尼平苷完全水解,檢出京尼平和京尼平堿。京尼平苷通過其水解產(chǎn)物京尼平起利膽作用,在腸道中能被絕大部分腸內(nèi)菌水解成京尼平;由于大鼠肝勻漿液(含有β-葡糖苷酸酶和脂酶)不能將京尼平苷水解,因此,腸道細(xì)菌代謝是其利膽的主要機(jī)制。京尼平苷的水解代謝主要發(fā)生在腸道內(nèi)。京尼平苷在大鼠腸道的吸收呈一級動力學(xué)過程,為被動擴(kuò)散,具有廣泛的吸收窗。大鼠單劑量口服京尼平苷后,尿樣中檢測到8種代謝產(chǎn)物:京尼平、京尼平堿、京尼平丙酮醇部分開環(huán)氨化生成的Schiff堿及其分子內(nèi)醛基與氨基縮合產(chǎn)物、京尼平丙酮醇部分開環(huán)生成的雙醛代謝產(chǎn)物以及新發(fā)現(xiàn)的京尼平還原產(chǎn)物、京尼平丙酮醇部分開環(huán)生成的雙醛還原產(chǎn)物和京尼平堿的氧化產(chǎn)物;其腸內(nèi)菌培養(yǎng)液中發(fā)現(xiàn)了5種物質(zhì):京尼平苷、京尼平、京尼平堿、原藥丙酮醇部分開環(huán)后氨化生成的Schiff堿和雙醛代謝產(chǎn)物。京尼平苷在大鼠體內(nèi)代謝途徑見圖2。Hou等研究表明,口服京尼平和梔子煎液后,京尼平硫酸鹽是血液中主要代謝產(chǎn)物,血液中未檢測出京尼平及其苷。4.2京尼平苷、梔子藍(lán)類物質(zhì)張麗茹考察了大鼠經(jīng)灌胃和尾靜脈注射兩種途徑給藥后京尼平苷的藥動學(xué)過程,表明二者均符合二室模型,ig后分布半衰期t1/2α為0.4h,消除半衰期t1/2β為3.9h;iv后t1/2α為0.2h,t1/2β為1.0h,說明京尼平苷在體內(nèi)以消除為主;表觀分布容積VC較大,證實(shí)該藥在體內(nèi)分布廣泛;與靜脈給藥比較,生物利用度為11.0%。通過測定大鼠尿樣及糞樣中京尼平苷排泄量發(fā)現(xiàn),以50mg/kg劑量給藥后48h,尿中原形藥物累積排泄量為12.1%,糞中未檢測到原形藥物;灌胃24h后,尿中排泄原形藥物約占血漿中原形藥物總量的100%。Ueno等報(bào)道,灌胃給予京尼平苷后,在大鼠體內(nèi)測得的京尼平量約為京尼平苷的1%,其代謝物主要在膽汁中以京尼平-1-O-葡萄糖醛酸苷的形式出現(xiàn)。京尼平苷是通過在體內(nèi)水解成京尼平發(fā)揮藥效的。成龍等研究了京尼平苷及其腸道代謝物京尼平在大鼠體內(nèi)的藥動學(xué)和排泄動力學(xué)過程。京尼平苷和京尼平最大血藥濃度Cmax分別為(3.23±0.37)和(17.41±5.27)ng/mL;半衰期t1/2分別為(1.00±0.35)和(4.86±2.55)h;平均滯留時間MRT分別為(2.39±0.18)和(7.86±3.61)h;曲線下面積(AUCi)分別為(11.23±2.18)和(90.60±13.44)h·ng/mL;二者藥動學(xué)均符合一室模型,京尼平苷在血漿中代謝消除較快,京尼平血漿濃度較低。京尼平苷在腸道部分轉(zhuǎn)化為京尼平,二者經(jīng)尿液累積排出量和排出率分別為(2.30±0.27)mg和3.28%、(0.57±0.45)mg和0.82%,經(jīng)糞便累積排出量和排出率(1.58±0.87)mg和2.25%、(17.04±3.54)mg和24.34%。京尼平苷在腸道部分轉(zhuǎn)化為京尼平,后者最大排泄時間為(6.00±2.88)h;23.38%的藥物以代謝物京尼平的形式經(jīng)糞便排出;京尼平苷在大鼠體內(nèi)大部分發(fā)生轉(zhuǎn)化,在尿液和糞便中分別僅有4.25%和2.82%以原形物的形式排出。京尼平苷、梔子提取物導(dǎo)致的肝、腎和腸道的嚴(yán)重著色機(jī)制可能是京尼平苷在腸道先轉(zhuǎn)化為京尼平,京尼平進(jìn)一步與對應(yīng)部位的氨基酸結(jié)合,生成藍(lán)色的梔子藍(lán)類物質(zhì)而著色,梔子藍(lán)類物質(zhì)可能是京尼平苷排出體外的主要形式。梔子藍(lán)類物質(zhì)或其轉(zhuǎn)化物可能是導(dǎo)致毒性的物質(zhì)基礎(chǔ)。王學(xué)全等研究表明,梔子大黃湯藥材不同配伍對京尼平苷的藥動學(xué)存在不同的影響,大黃可使京尼平苷的生物利用度略微下降,枳實(shí)可顯著增加京尼平苷的生物利用度,淡豆豉則可顯著降低京尼平苷的生物利用度。因此,中藥配伍可能影響京尼平苷的藥動學(xué)行為。5藥理活性5.1京尼平苷對小鼠餐后血糖的影響京尼平苷可明顯降低糖尿病模型大鼠血糖、提高糖耐量(P<0.05),但對血脂無明顯影響。葡萄糖消耗試驗(yàn)表明,京尼平苷能顯著促進(jìn)前脂肪細(xì)胞對葡萄糖的吸收;小鼠荷糖試驗(yàn)和四氧嘧啶致糖尿病小鼠血糖試驗(yàn)證實(shí),京尼平苷具有劑量相關(guān)性降低小鼠餐后血糖及糖尿病高血糖的作用;通過基于過氧化物酶增殖激活受體γ(PPARγ)受體信號通路的報(bào)告基因誘導(dǎo)表達(dá)試驗(yàn),發(fā)現(xiàn)京尼平苷在體內(nèi)外的降糖功效可能與PPARγ的激活有關(guān)。費(fèi)曜等研究表明,京尼平苷對2型糖尿病大鼠的血清胰島素水平和胰島素敏感指數(shù)有正性影響,其作用機(jī)制可能與增強(qiáng)PPARγ受體活性有關(guān);同時京尼平苷能明顯降低高糖高脂大鼠的總膽固醇和三酰甘油,提示可能是通過其促進(jìn)膽汁分泌而達(dá)到降脂的效果。5.2藥代動力學(xué)—神經(jīng)營養(yǎng)和神經(jīng)保護(hù)作用殷菲等通過建立的胰高血糖素樣肽-1(GLP-1)受體激動劑高通量篩選模型,篩選、鑒定出京尼平苷是一種新的GLP-1受體激動劑,能夠通過絲裂原活化蛋白激酶(MAPK)信號通路誘導(dǎo)PC12細(xì)胞分化,對抗過氧化氫誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞氧化損傷,提高神經(jīng)細(xì)胞活力;能夠誘導(dǎo)大鼠嗜鉻神經(jīng)瘤PC12細(xì)胞和原代培養(yǎng)的海馬神經(jīng)元中血紅素氧化酶-1(HO-1)水平上調(diào),增強(qiáng)細(xì)胞對氧化應(yīng)激的耐受,提高細(xì)胞的抗養(yǎng)化能力;它具有與GLP-1受體激動劑類似的神經(jīng)營養(yǎng)和神經(jīng)保護(hù)功能。王磊等系統(tǒng)綜述了梔子苷及京尼平治療阿爾茨海默病及其神經(jīng)保護(hù)的分子機(jī)制,認(rèn)為其在對抗Aβ毒性作用、抗氧化應(yīng)激、抗內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激及抗炎等多方面具有良好效果,并能促進(jìn)神經(jīng)生長,修復(fù)受損神經(jīng)元。5.3肝毒性成分ast和肝其他指標(biāo)檢測京尼平苷可對抗CCl4和對乙酰氨基酚肝損傷引起的丙二醛(MDA)升高,谷胱甘肽(GSH)含量下降和谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)活力降低,明顯減輕肝組織的病理變化;抑制CCl4肝中毒小鼠血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)和谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)活性及增加肝臟內(nèi)GSH含量;對正常小鼠肝微粒體內(nèi)CYP4502El具有明顯抑制作用,并能增強(qiáng)肝臟內(nèi)谷胱甘肽還原酶以及谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶活性;降低急性酒精性肝損傷小鼠血清的AST及ALT含量,抑制肝內(nèi)MDA的生成,改善肝臟病理變化,降低動物的死亡率、延長動物死亡時間;明顯促進(jìn)正常大鼠和由異硫氰酸-1-萘脂所致的肝損傷大鼠6h內(nèi)膽汁排泌量,對膽固醇、總膽紅素、直接和間接膽紅素沒有明顯影響;京尼平苷具有保肝利膽作用。5.4提高抑炎細(xì)胞因子水平京尼平苷對大鼠慢性前列腺炎具有顯著的治療作用;其作用機(jī)制與降低前列腺內(nèi)前炎細(xì)胞因子(IL-1β、IL-6、TNF-α)、提高抑炎細(xì)胞因子(IL-10)水平、減輕炎細(xì)胞浸潤、抑制纖維組織增生和恢復(fù)前列腺分泌功能有關(guān)。抑制大鼠前列腺成纖維細(xì)胞的增殖,可能與其減少TGF-β1的分泌和膠原的合成、促進(jìn)前列腺成纖維細(xì)胞的凋亡有關(guān)。5.5超氧化物歧化酶京尼平苷顯著降低大鼠ST段抬高幅度、心肌酶(CK)值、乳酸脫氫酶(LDH)值、MDA值,超氧化物歧化酶(SOD)值明顯增高;能夠明顯減輕缺血再灌注對心肌細(xì)胞損傷程度,對心肌有明顯的保護(hù)作用,其機(jī)制可能與其提高SOD活力、減少M(fèi)DA生成有關(guān)。5.6熊去氧膽酸組與陽性對照藥物熊去氧膽酸組10.京尼平苷100mg/kg組的成石率與陽性對照藥物熊去氧膽酸組80mg/kg組相近;表明京尼平苷對地鼠膽固醇結(jié)石的形成可能具有抑制作用。5.7類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的影響京尼平苷可下調(diào)類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎大鼠中致炎因子IL-1β和TNF-α的水平,提示京尼平苷可抑制實(shí)驗(yàn)性類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎病情進(jìn)展。5.8梔子的提取、酶預(yù)處理及使用效果梔子提取液對SAP具有治療作用,該作用與其含有的活性成分京尼平苷和京尼平有關(guān),并且梔子經(jīng)過提取后能顯著提高療效。京尼平苷預(yù)處理能抑制家兔血清淀粉酶(AMY)的升高以及血清Ca2+的降低,減輕胰腺細(xì)胞的鈣超載;抑制TNF-α、IL-6在胰腺組織中的活化,從而下調(diào)細(xì)胞因子的表達(dá),減輕SAP家兔胰腺的損傷,對SAP的胰腺具有保護(hù)作用。5.9抗細(xì)菌膿毒癥鄭新川等首次發(fā)現(xiàn)了京尼平苷在體內(nèi)外對LPS的中和作用和對膿毒癥模型小鼠的保護(hù)作用,明確了京尼平苷是梔子拮抗細(xì)菌膿毒癥的有效成分。5.10使用于鼠足回血京尼平苷能延長熱刺激所致小鼠痛覺反應(yīng)時間,明顯抑制醋酸誘發(fā)的小鼠扭體反應(yīng);對二甲苯所致小鼠耳廓及角叉菜膠所致大鼠足跖炎癥均有不同程度的抑制作用,對急性炎癥滲出有較明顯的抑制作用;京尼平苷具有一定鎮(zhèn)痛作用和抗炎作用。以京尼平與甘氨酸反應(yīng)形成的藍(lán)色素作為注射藥物,給二甲苯致小鼠耳廓腫脹模型腹腔注射,初步藥理實(shí)驗(yàn)顯示,該色素對小鼠具有抗炎和鎮(zhèn)痛作用;梔子藍(lán)色素可能是民間將梔子粉末外用抗炎消腫的活性物質(zhì)。Koo等研究表明,京尼平是梔子中主要抗炎物質(zhì)。5.11x-射線衍射防護(hù)劑對京尼平苷及其苷元的抗腫瘤活性測試結(jié)果為:苷元能抑制鼠白血病P388細(xì)胞的生長,苷元的半縮醛結(jié)構(gòu)是抗腫瘤所必需的。京尼平苷和京尼平苷酸(GA)對大鼠腫瘤模型的抗癌作用是作為對亞致死的X射線輻射作用的防護(hù)劑來實(shí)現(xiàn)的。單獨(dú)用藥,使腹膜內(nèi)維持較高濃度的京尼平苷和GA,可減少腹水腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移;在射線治療前30min,將京尼平苷和GA以500mg/kg的劑量給大鼠用藥,連續(xù)12d后,外周白細(xì)胞沒有明顯變化;且GA比京尼平苷具有更高防護(hù)活性。5.12梔子提取物降血壓的作用機(jī)制京尼平苷及其代謝產(chǎn)物京尼平能夠影響體內(nèi)血栓因子及血小板聚集,能顯著延遲生化反應(yīng)中大鼠股動脈血栓閉塞時間,抑制磷脂酸酶的活性,該酶受到抑制是抗血小板聚集的作用機(jī)制。梔子提取物對大鼠腦、腎、心臟、腸系膜等各組織阻力小動脈均有松弛作用,且呈劑量依賴關(guān)系并有一定的選擇性;梔子提取物通過阻斷去甲腎上腺素激動阻力動脈α受體引起的收縮反應(yīng)和阻滯阻力動脈電壓依賴的鈣通道,降低外周阻力,引起血管擴(kuò)張,這些可能是其降血壓作用的機(jī)制。京尼平苷能顯著降低氣管通透性,恢復(fù)上皮跨膜電阻,表明京尼平苷有抗哮喘的作用。5.13ga與京尼平苷結(jié)構(gòu)GA和京尼平苷能顯著抑制亞麻酸氧化產(chǎn)物硫代巴比妥酸,抑制率分別為100%和49%,GA和京尼平苷的結(jié)構(gòu)僅C-4位的取代基不同,分別為羧基和甲氧羰基,這表明,C-4位的取代基對抗氧化活性至關(guān)重要。5.14京尼平苷和ga抗補(bǔ)體京尼平具有很強(qiáng)的抗補(bǔ)體效應(yīng),抑制率為75.3%,而京尼平苷和GA抗補(bǔ)體效應(yīng)較弱,抑制率分別為23%、25%;GA經(jīng)β-葡萄糖苷酶水解后,其水解物抗補(bǔ)體效應(yīng)明顯增強(qiáng),半縮醛結(jié)構(gòu)具有增強(qiáng)抗補(bǔ)體效應(yīng)的活性。5.15延遲阻塞時間用光化學(xué)反應(yīng)誘導(dǎo)ICR雄性小鼠股動脈4.6min,可使小鼠股動脈被富集的血小板阻塞;靜脈注射京尼平苷可劑量相關(guān)地推遲阻塞時間,京尼平也以劑量相關(guān)方式推遲阻塞時間,與阿司匹林作用相似。二者均能抑制膠原誘導(dǎo)的血小板凝集并呈劑量相關(guān),其作用強(qiáng)于阿司匹林,但不能抑制花生四烯酸誘導(dǎo)的血小板凝集,而阿司匹林具抑制作用。京尼平苷不能抑制ADP誘導(dǎo)的血小板凝集,而京尼平和阿司匹林顯示弱的抑制作用。京尼平苷和馬兜鈴酸(對照藥)劑量分別為77和0.3mmol/L時,對磷脂酶A2(PLA2)的抑制率分別為43.5%和32.2%,京尼平對PLA2的作用未測定。提示京尼平苷抑制了PLA2催化的花生四烯酸鹽的釋放。5.16神經(jīng)損傷的保護(hù)作用京尼平苷對局灶性腦缺血大鼠腦組織基因表達(dá)具有調(diào)控作用,對缺血性腦神經(jīng)損傷具有一定的保護(hù)作用;可阻抑腦缺血損傷后致炎因子TNF-α和IL-1β及血漿血管性血友病因子(vWF)的表達(dá),顯示出其抗缺血后血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷、在炎癥病理環(huán)節(jié)阻抑腦缺血損傷級聯(lián)反應(yīng)的作用。5.17血管內(nèi)皮細(xì)胞增生活性京尼平苷能明顯提高H2O2損傷的內(nèi)皮細(xì)胞的存活率,提高細(xì)胞內(nèi)SOD、GSH-Px、一氧化氮合酶(NOS)活性,使培養(yǎng)液中NO含量增加,降低細(xì)胞內(nèi)活性氧簇(ROS)水平,減少H2O2誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡率,恢復(fù)血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖;京尼平苷具有較強(qiáng)的抗氧化能力及內(nèi)皮細(xì)胞保護(hù)作用,可減輕血管內(nèi)皮細(xì)胞的氧化損傷。5.18尼平苷對小鼠攝食的影響石磊等研究表明,800mg/kg劑量下京尼平苷可明顯抑制谷氨酸鈉誘導(dǎo)性肥胖小鼠的攝食量,減輕體質(zhì)量,降低血三酰甘油、血膽固醇含量,使白色脂肪細(xì)胞變小,但對血糖無影響。5.19軟骨細(xì)胞增殖培養(yǎng)譚玉林等研究表明,京尼平苷各濃度(25、50、100mmol/L)均能促進(jìn)軟骨細(xì)胞的增殖;京尼平苷可以調(diào)節(jié)軟骨細(xì)胞周期,促進(jìn)軟骨細(xì)胞增殖。6應(yīng)用現(xiàn)狀6.1環(huán)形交聯(lián)反應(yīng)京尼平是從植物中提取的天然交聯(lián)劑,具有多個活性官能團(tuán),且細(xì)胞毒性低,因?yàn)榫┠崞叫纬傻沫h(huán)形交聯(lián)比其他的網(wǎng)狀交聯(lián)及線狀交聯(lián)更穩(wěn)定,使其固定交聯(lián)的材料在實(shí)際應(yīng)用時不易滲出未反應(yīng)的京尼平從而產(chǎn)生細(xì)胞毒性反應(yīng)。王嵐等研究了京尼平交聯(lián)羊膜的制備及其體外性能,表明經(jīng)新型生物交聯(lián)劑京尼平交聯(lián)的脫細(xì)胞羊膜組織材料具有良好的生物力學(xué)特性且無細(xì)胞毒性。6.2梔子紅的合成董智以京尼平苷為原料,堿性條件下水解生成京尼平苷酸,β-葡萄糖苷酶水解生成苷元,此苷元可與伯氨基化合物反應(yīng),生成梔子紅;以非極性的大孔樹脂吸附,水和醇洗脫雜質(zhì)后,pH11氨水溶液洗脫,洗脫液容易干燥;精制后樣品色價提高10倍,產(chǎn)物無吸濕性,水溶性好。林英等以梔子黃生產(chǎn)副產(chǎn)物京尼平苷洗脫液為底物,在10L發(fā)酵罐中進(jìn)行酶轉(zhuǎn)化,轉(zhuǎn)化產(chǎn)物用大孔吸附樹脂精制,得到色價為62.8[E1cm532nm(1%)]的梔子紅粉末。6.3梔子藍(lán)色素的合成楊志等用纖維素酶水解京尼平苷生成京尼平,再與氨基酸合成梔子藍(lán)色素;利用超濾技術(shù)對其進(jìn)行分離、純化;經(jīng)HPLC測定,所得梔子藍(lán)色素色價≥192,純度≥95%。梁華正等研究了京尼平苷水解產(chǎn)物與谷氨酸鈉反應(yīng)生成梔子藍(lán)色素的最佳條件。楊丹等考察了京尼平與甘氨酸反應(yīng)的最佳條件,比較了京尼平與不同氨基酸反應(yīng)結(jié)果,采用纖維素透析袋及凝膠柱色譜純化了梔子藍(lán)色素。李令錦等采用京尼平對絲素蛋白進(jìn)行交聯(lián)染色,得到了穩(wěn)定性較好的染色產(chǎn)物;機(jī)制研究表明,京尼平與絲素蛋白是通過與蛋白質(zhì)肽鏈中某些氨基酸側(cè)鏈發(fā)生反應(yīng)而染色的。6.4化學(xué)骨架相近化合物京尼平苷、京尼