木豆葉提取物安全性評價

木豆是薔薇科植物的一種，也被稱為柳豆、豆榮和扭曲豆。這是世界上第六種食用魚類，也是唯一的木材食品。主要分布于東南亞、印度、緬甸以及我國的云南、四川、江蘇、廣東、廣西、海南等地,在海南島各地有野生和栽培種,具有廣泛的藥用價值。木豆葉是木豆的干燥葉及嫩枝,中醫(yī)認為木豆葉性甘、平,歸肝、脾及腎經,能活血化瘀、消腫止痛、補腎健骨、祛腐生肌,可用于瘀血腫痛,股骨頭缺血性壞死治療;外治水痘、癰腫及各種創(chuàng)面感染。木豆葉提取物的成分較多,田潤等曾經從木豆葉中提取得到12種化合物,其主要活性成分是芪類提取物,其中含量較高、活性較強的是木豆素。近年來的研究發(fā)現(xiàn),木豆葉提取物具有多種藥理活性,如抗骨質疏松、治療高血脂、抗腦缺血缺氧損傷等。因此木豆葉提取物在人類醫(yī)學及獸類醫(yī)學的臨床應用也越來越廣泛。為了評價木豆葉提取物的安全性,為今后系統(tǒng)地研究其藥理作用、臨床安全用藥提供試驗依據(jù),特進行了木豆葉提取物對小白鼠的急性毒性試驗。1材料和方法1.1試驗材料1.1.1小鼠臨床健康試驗昆明系清潔級小白鼠90只,購自蘭州大學試驗動物中心,體重18～22g,雌性小鼠未產未孕,自由飲水采食,連續(xù)觀察1周,臨床健康即可用于試驗,試驗期間按常規(guī)飼養(yǎng)。1.1.2藥品、試藥木豆葉提取物,為淡黃色粉末狀物質,含量10%,批號為110801,由浙江海正藥業(yè)股份有限公司提供。試驗前稱取適量藥物,用純化水配制成濃度為1g/mL的混懸液。1.2測試方法1.2.1預試驗在預試驗中將24只小白鼠隨機分成4組,每組6只,雌雄各半。各組以等濃度木豆葉提取物灌胃給藥,確定LD0、LD100。1.2.2給藥劑量及給藥次數(shù)在正式試驗中將60只小白鼠隨機分成6組(5個試驗組+1個對照組),每組各10只,雌、雄各半。試驗前禁食12h,自由飲水。按照小白鼠的體重計算給藥量,低劑量組1次給藥,高劑量組由于給藥體積較大,在24h內分2～3次給藥。給藥后的前3h每隔20min觀察1次小白鼠的采食、飲水、被毛、活動、精神、癥狀起始時間和持續(xù)時間、死亡情況;之后每隔2h觀察1次;2d后,每天觀察3次。對死亡小鼠及時解剖記錄病變情況,在第8天將所有存活的小白鼠處死并解剖,觀察腹腔內的液體狀況和實質性器官的病理變化。2試驗結果2.1計算ld50及其65%可信限預試驗結果(表1)表明:木豆葉提取物的致死劑量范圍占體重的28～109g/kg,根據(jù)公式r=n?1a/b???√(rr=n-1a/b(r為相鄰2組劑量的比值;a為最大劑量,109.00g/kg;b為最小劑量,28.00g/kg;n為預分組數(shù)),計算得r=1.4046。根據(jù)預試驗的結果,由r=1.4046確定分別以體重的28.00、39.33、55.24、77.59、109.00g/kg給藥,按照改良寇氏法計算LD50及其95%可信限。LD50=Lg-1[Xm-i(∑p-0.5)]式中:Xm為最大劑量組劑量的對數(shù)值;i為劑量間比值的對數(shù)值;∑p為各組死亡率之和?？梢运愠鯨D50的95%可信限=lg-1[lgLD50±1.96Sx50]。2.2ld50的可信限正式試驗結果如表2所示。根據(jù)試驗所得數(shù)據(jù),計算得LD50=62.647g/kg,LD50的95%可信限是53.488～73.528g/kg。判定木豆葉提取物對小鼠的經口LD50大于體重的15g/kg,根據(jù)外源化學物急性毒性分級標準,木豆葉提取物屬于無毒物質。2.3小鼠灌胃后的臨床表現(xiàn)灌胃后,低劑量組小鼠呼吸急促,閉眼,活動量減少,偶有輕微腹瀉,3h后恢復采食,精神正常。高劑量組小鼠灌胃后喜臥,懶動,精神不濟,喜轉木屑,有明顯的腹瀉,并有惡臭味;第2次灌胃后被毛凌亂,給藥40min后開始死亡,解剖可見皮下、胸腔、腸系膜出血,肺臟呈粉白色,腸道臌氣,腸壁變薄,十二指腸內出血,肝臟有出血點,尾靜脈發(fā)黑。胃部膨大,有氣體,內部有黑色物質。脾、腎臟未見明顯可眼觀的病變。3木豆葉提取物木豆是一種藥理作用很廣泛的中藥材,其種子、根、莖、葉均可入藥。木豆葉在抗骨質疏松、抗心腦血管疾病、抗腫瘤、抗炎、抗病毒等方面均有一定的作用。但是其成分復雜。鄭元元等的研究表明,木豆葉中抗骨質疏松的活性成分主要是芪類提取物,而其中又以木豆素最為重要。陳迪華等發(fā)明了一種抗骨質疏松的藥物組合,從主要活性成分重量比可看出,木豆葉芪類提取物尤其是木豆素對抗骨質疏松藥的藥效是不可或缺的成分。但是在此次急性毒性試驗中發(fā)現(xiàn),給予高劑量的木豆葉提取物,小白鼠有明顯腹瀉現(xiàn)象,而低