第四節(jié)菌種的擴(kuò)大培養(yǎng)及保藏菌種的擴(kuò)大培養(yǎng)：將保藏的菌種，即砂土管，冷凍干燥管中處于休眠狀態(tài)的生產(chǎn)菌種接入試管斜面活化，再經(jīng)過(guò)扁瓶或藥瓶和種子罐，逐級(jí)擴(kuò)大培養(yǎng)后達(dá)到一定的數(shù)量和質(zhì)量的純種培養(yǎng)過(guò)程。這些純種的培養(yǎng)物稱(chēng)為種子。一、菌種的擴(kuò)大培養(yǎng)廣義：從斜面菌種開(kāi)始到發(fā)酵罐接種之前的所有生產(chǎn)過(guò)程。狹義：僅指生產(chǎn)車(chē)間種子罐的培養(yǎng)過(guò)程。種子的制備實(shí)驗(yàn)室種子制備階段生產(chǎn)車(chē)間種子制備階段（一）實(shí)驗(yàn)室種子的制備1.孢子的制備（1）細(xì)菌斜面培養(yǎng)基，碳源限量氮源豐富。培養(yǎng)溫度：37℃，時(shí)間：1-2d，產(chǎn)芽孢：5-10d。（2）霉菌培養(yǎng)基：大米小麥麩皮等天然培養(yǎng)基。培養(yǎng)溫度：25-28℃，時(shí)間：4-14d。（3）放線(xiàn)菌培養(yǎng)基：瓊脂斜面培養(yǎng)基，包含麩皮，蛋白胨，豌豆浸汁及無(wú)機(jī)鹽。培養(yǎng)溫度：28℃，時(shí)間：5-14d。2.液體種子制備搖瓶液體培養(yǎng)法。（二）生產(chǎn)車(chē)間種子制備砂土管（冷凍干燥管）斜面搖瓶固體斜面種子罐發(fā)酵罐種子罐的作用：使孢子發(fā)芽，生長(zhǎng)繁殖成菌絲體，接入發(fā)酵罐能夠迅速生長(zhǎng)，達(dá)到一定的菌體數(shù)量，以利于產(chǎn)物的合成。確定種子罐注意事項(xiàng)：種子級(jí)數(shù)應(yīng)當(dāng)盡量少。種子罐技術(shù)與生產(chǎn)工藝條件有關(guān)。菌體擴(kuò)大培養(yǎng)過(guò)程中的工藝條件接種齡從一個(gè)級(jí)的種子罐中培養(yǎng)的菌體到移入下一級(jí)種子罐或發(fā)酵罐時(shí)的培養(yǎng)時(shí)間。接種量接種量指的是移入的種子懸浮液體積和接種后培養(yǎng)液體的體積的比例。二、菌種的衰退、復(fù)壯和保存菌種衰退：指生產(chǎn)菌種或篩選出來(lái)的較優(yōu)良的菌株，由于進(jìn)行接種傳代或保藏之后，群體的某些形態(tài)特征逐漸減退甚至完全喪失的現(xiàn)象。菌種衰退的后果：1.菌種的發(fā)酵能力降低2.繁殖能力降低3.發(fā)酵產(chǎn)品的得率降低菌種衰退的原因：基因突變（基因負(fù)突變）變異菌株性狀分離（多次劃線(xiàn)分離純化）連續(xù)傳代

（減少傳代次數(shù)）其他因素（溫度、濕度、培養(yǎng)基成分）（二）菌種的提純與復(fù)壯菌種的提純：從已衰退的菌種中，通過(guò)分離純化，將尚未退化的個(gè)體分離出來(lái)，以恢復(fù)和建立具有原來(lái)生產(chǎn)性狀的群體。菌種的復(fù)壯：狹義：在菌種已發(fā)生衰退的情況下，通過(guò)純種分離等技術(shù)，從已衰退的群體中帥選出少數(shù)尚未退化的個(gè)體，以達(dá)到恢復(fù)原菌株固有性狀的相應(yīng)措施。廣義：在菌種尚未衰退前就有意識(shí)地采取純種分離和生產(chǎn)性狀的測(cè)定工作，以期從中選擇到自發(fā)的正突變個(gè)體。菌種復(fù)壯的措施：菌種的提純（稀釋涂平板法等、單細(xì)胞分離法）2.通過(guò)寄主體進(jìn)行復(fù)壯3.淘汰已衰退的個(gè)體（三）菌種的保藏方法名稱(chēng)主要措施適宜菌種保藏期評(píng)價(jià)冰箱保藏法（斜面）冰箱保藏法（半固體）石蠟油封藏法*沙土保藏法冷凍干燥法低溫低溫低溫、缺氧干燥、無(wú)營(yíng)養(yǎng)干燥、無(wú)氧、低溫、有保護(hù)劑各大類(lèi)細(xì)菌、酵母菌各大類(lèi)**產(chǎn)孢子微生物