精子保存液在長(zhǎng)江中下游親魚繁殖中的應(yīng)用

江蘇省和浙江省廣泛分布于長(zhǎng)江和淮河流域。該魚味道鮮美,市場(chǎng)價(jià)格高,養(yǎng)殖前景好。安徽省已經(jīng)開始長(zhǎng)吻鮠的養(yǎng)殖,但人工繁殖苗種的規(guī)模仍有限,制約了規(guī)模養(yǎng)殖的發(fā)展。2005年,我們分別在長(zhǎng)江邊的無(wú)為縣小老海長(zhǎng)江特種水產(chǎn)有限公司和地處淮河流域的滁州市南譙區(qū)特種水產(chǎn)良種基地進(jìn)行長(zhǎng)吻鮠人工繁殖,使用精子保存液進(jìn)行人工授精,以保持精子活力,減少解剖雄魚數(shù)量,提高受精率,現(xiàn)將試驗(yàn)結(jié)果報(bào)告如下。1材料和方法1.1紅鯉魚種放養(yǎng)無(wú)為縣小老海長(zhǎng)江特種水產(chǎn)有限公司親魚來(lái)自長(zhǎng)江,選留時(shí)間為2004年9-12月,選活力好、體表無(wú)損傷的個(gè)體,用3%～5%的食鹽或3～5mg/L的土霉素進(jìn)行浸泡消毒,下池后用硫醚殺星0.15mg/L潑灑,3～5d后用恩諾殺星0.2～0.5mg/L潑灑。共選雌魚20尾,體重2.5～5.0kg,雄魚14尾,體重2.8～5.5kg,放入100m2的水泥池中進(jìn)行培育,投喂鮮活泥鰍100kg,輔以水蚯蚓。剛?cè)氤貢r(shí)保持微流水,高溫季節(jié)每天加水,定期進(jìn)行藥物預(yù)防。另2005年5月13～14日從長(zhǎng)江捕獲6尾雌魚和2尾雄魚立即催產(chǎn)。滁州市南誰(shuí)區(qū)特種水產(chǎn)良種基地的親本為經(jīng)5～6年培育的親魚,體重3.5～5.5kg,14尾雌魚,9尾雄魚。放在面積600m2的土池中,投喂配合飼料和淡水克氏螯蝦,加強(qiáng)水質(zhì)管理,每周加水1次。1.2尾成蟲的lrh-s1610g、pg24.b型混合激素治療5月11日,在無(wú)為縣小老海長(zhǎng)江特種水產(chǎn)有限公司選擇經(jīng)培育的12尾雌魚,6尾雄魚進(jìn)行催產(chǎn)注射,注射激素為9尾雌魚注射LRH-A26～10μg+PG3～5mg/kg,3尾雌魚注射LRH-A26～10μg+PG2～4mg+B型混合激素1IU/kg,雄魚劑量減半,兩次注射,針距12h,第1針為總劑量的1/5～1/6,第2針余量;5月21日,從長(zhǎng)江中捕獲6雌、3雄直接催產(chǎn),激素劑量為L(zhǎng)RH-A26～10μg+DOM4～5mg/kg,雄魚減半,兩次注射,針距12h,水溫度24～25℃。5月24日,在滁州市南譙區(qū)特種水產(chǎn)良種基地催產(chǎn)雌魚12尾,雄魚3尾,劑量為L(zhǎng)RH-A24～8μg+DOM3.5～5.0mg/kg,2次注射,針距12h,水溫25～26℃。1.3mol2ho配制了精子保存液在生產(chǎn)中應(yīng)用,配方如下:NaCl0.08mol/L,KCl0.05mol/L,CaCl2·H2O0.005mol/L,MgCl2-6H2O0.002mol/L,NaHCO30.05mol/L,pH值8.2。1.4小老海長(zhǎng)江特種水產(chǎn)有限公司和南譙區(qū)特種水產(chǎn)有限公司生長(zhǎng)性狀在效應(yīng)時(shí)間內(nèi)先解剖雄魚,將精巢在研缽內(nèi)剪、磨后加入5～7倍的精子保存液保存?zhèn)溆?在無(wú)為縣小老海長(zhǎng)江特種水產(chǎn)有限公司繁殖場(chǎng)將其放入加冰的保溫桶內(nèi),在滁州市南譙區(qū)特種水產(chǎn)良種基地為常溫下陰涼保存。將雌魚卵擠入盆中進(jìn)行干法授精,將受精卵粘在用紗窗做成的附卵板上,每尾雌魚可粘5～10塊板。1.5特種水產(chǎn)有限公司的孵化環(huán)道采用流水、充氣人工孵化,在無(wú)為縣小老海長(zhǎng)江特種水產(chǎn)有限公司繁殖場(chǎng)使用的是孵化桶孵化網(wǎng)箱,在滁州市南譙區(qū)特種水產(chǎn)良種基地使用的是直徑8～9m的孵化環(huán)道。在孵化中均使用充氣泵。1.6溶解氧氣孵化水中的溶解氧為6.3～8.7mg/L。2結(jié)果2.1產(chǎn)率與精致率結(jié)果見表1。2.2催產(chǎn)4日催化劑脫膜5月11日在無(wú)為縣小老海長(zhǎng)江特種水產(chǎn)有限公司催產(chǎn)的第一批魚在5月15日發(fā)現(xiàn)脫膜,孵化時(shí)間約69h,其中在5月14日有一次降溫,水溫降到了22～23℃。5月23日催產(chǎn)的發(fā)現(xiàn)在5月26日脫膜,孵化時(shí)間約60～62h。5月24日在滁州市南譙區(qū)特種水產(chǎn)良種基地催產(chǎn)的親魚在28日發(fā)現(xiàn)脫膜,孵化時(shí)間約56～58h。2.3精子保持活力對(duì)在5月12日保存在保溫冰桶精子保存液內(nèi)的精子活力情況進(jìn)行觀察,5月13日下午15:00,用顯微鏡進(jìn)行觀察,將精子原液滴在載波片上,精子并不活動(dòng),用水刺激后劇烈活動(dòng),劇烈活動(dòng)時(shí)間約14～16s,后活力減弱,至此已經(jīng)保存20h。5月14日上午9:00觀察,仍然有50%～60%的精子保持活力,至此已經(jīng)保存38h。冰桶內(nèi)的冰已經(jīng)融化,沒有再加冰。下午16:00觀察,精子僅有少量可以活動(dòng),至此已經(jīng)保存42h。2.4繁殖、養(yǎng)殖無(wú)為縣小老海長(zhǎng)江特種水產(chǎn)有限公司基地兩批共出苗約40萬(wàn)尾,滁州市南譙區(qū)特種水產(chǎn)良種基地出苗32萬(wàn)尾,按常規(guī)方式進(jìn)行培育,出膜6～7d開始喂蛋黃水,后撈輪蟲和枝角類投喂,無(wú)為縣小老海長(zhǎng)江特種水產(chǎn)有限公司基地的苗8d后轉(zhuǎn)入網(wǎng)箱培育,滁州市南譙區(qū)特種水產(chǎn)良種基地在孵化環(huán)道培育15d后轉(zhuǎn)入直徑10m圓形產(chǎn)卵池培育,投喂經(jīng)過(guò)消毒、切碎的水蚯蚓,后過(guò)渡到整條水蚯蚓,最后馴化吃鰻魚飼料。3討論3.1親魚的催產(chǎn)和人工利用技術(shù)親魚培育是人工繁殖成功的關(guān)鍵之一,催產(chǎn)結(jié)果表明,經(jīng)過(guò)強(qiáng)化培育的親魚有較高的催產(chǎn)率,在滁州點(diǎn)的催產(chǎn)率達(dá)到了100%,而從長(zhǎng)江直接捕獲的親魚因受傷等情況催產(chǎn)率僅有66.67%,在獲取和選擇上都有難度,不能夠獲得穩(wěn)定的親本來(lái)源,催產(chǎn)后死亡率較高,幾乎全部死亡。經(jīng)多年培育的親魚對(duì)環(huán)境的適應(yīng)能力明顯增強(qiáng),要大規(guī)模生產(chǎn)長(zhǎng)吻鮠魚苗必須大量培育后備親魚,可從子一代中培育選擇,為保持種質(zhì)資源的質(zhì)量,應(yīng)定期從長(zhǎng)江等天然水域進(jìn)行補(bǔ)充。而使用人工飼料和天然鮮活餌料相結(jié)合的方法是可行的。3.2lrh-2c用量單因素實(shí)驗(yàn)本次催產(chǎn)選擇了幾種激素組合模式,結(jié)果表明都是有效的,但腦垂體獲取較為麻煩,成本也較高,本次催產(chǎn)光為獲取鯉魚腦垂體就購(gòu)買了數(shù)百尾鯉魚。而LRH-A2加DOM的注射效果好,作用穩(wěn)定,應(yīng)注意如親魚培育良好時(shí),第一針劑量不宜過(guò)高,否則難以準(zhǔn)確把握效應(yīng)時(shí)間,提高受精率。如情況正常,效應(yīng)時(shí)間應(yīng)維持在20h左右。催產(chǎn)時(shí)間應(yīng)選擇在5月中旬為好,如果親魚培育不好可稍推遲。而長(zhǎng)江野生親魚的產(chǎn)卵期則開始早,持續(xù)時(shí)間也較長(zhǎng)。3.3精子的保存和使用本次人工授精中使用了精子保存液,取得了良好的效果,精子保存液大大延長(zhǎng)了精子的存活時(shí)間,使人工授精操作更加從容,保持了精子活力,減少了精子浪費(fèi),提高了受精率,也減少了雄魚的解剖。在無(wú)為試驗(yàn)點(diǎn),用保溫桶加冰用保存液保存精子在20～30h內(nèi)都可以用于人工授精,而在滁州點(diǎn)沒有加冰保存,在2h內(nèi)完成了操作,效果仍很好。建議在生產(chǎn)規(guī)