Q/LB.□XXXXX-XXXX咖啡中毒菌酚等3種農(nóng)藥殘留量的測定-液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法范圍本文件規(guī)定了咖啡中毒菌酚等3種農(nóng)藥殘留量的測定-液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法。本文件適用于生咖啡豆、焙炒咖啡豆、焙炒咖啡粉中溴甲烷殘留量的測定。規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB2763食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中最大農(nóng)藥殘留限量GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法術(shù)語和定義本文件沒有需要界定的術(shù)語和定義。方法原理咖啡中毒菌酚、戊硝酚和消螨酚3種農(nóng)藥采用乙腈提取，經(jīng)增強(qiáng)型除脂基質(zhì)分散吸附劑凈化后，用液相色譜-質(zhì)譜-質(zhì)譜測定，外標(biāo)法定量。試劑和材料除非另有說明，在分析中僅使用分析純的試劑，所有試驗(yàn)用水均為GB/T6682規(guī)定的一級水。試劑乙腈：色譜純。甲酸：色譜純。無水MgSO4：分析純乙酸銨：色譜純NaCl：分析純。實(shí)驗(yàn)室用水：符合GB/T6682一級水要求。標(biāo)準(zhǔn)品毒菌酚（Hexachlorophene，C13H6Cl6O2，CAS：70-30-4)、戊硝酚（Dinosam，C11H14N2O5，CAS：4097-36-3)、消螨酚（Dinex，C12H14N2O5，CAS：131-89-5)，純度均≥95%，或經(jīng)國家認(rèn)證并授予標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書的標(biāo)準(zhǔn)品。標(biāo)準(zhǔn)溶液配制毒菌酚、戊硝酚和消螨酚標(biāo)準(zhǔn)溶液（100μg/mL)：準(zhǔn)確移取適量毒菌酚、戊硝酚和消螨酚標(biāo)準(zhǔn)溶液，置于10mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，混勻。將標(biāo)準(zhǔn)溶液轉(zhuǎn)移至棕色玻璃容器內(nèi)，-18℃避光保存，保存期3個月。毒菌酚、戊硝酚和消螨酚單標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)儲備液（10μg/mL)：準(zhǔn)確移取1mL濃度為100μg/mL的毒菌酚、戊硝酚和消螨酚標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別置于10mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，混勻。將標(biāo)準(zhǔn)溶液轉(zhuǎn)移至棕色玻璃容器內(nèi)，-18℃避光保存，保存期1個月。毒菌酚、戊硝酚和消螨酚的混合標(biāo)準(zhǔn)使用液（1μg/mL）：分別移取1mL濃度為10μg/mL的單標(biāo)儲備液，至10mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，混勻，現(xiàn)配現(xiàn)用。材料乙二胺-N-丙基硅烷化硅膠（PSA）BondElutEMR-Lipid增強(qiáng)型脂質(zhì)去除試劑盒十八烷基硅烷鍵合硅膠（C18）儀器液相色譜-質(zhì)譜-質(zhì)譜儀，配ESI電離源。電子天平：感量0.0001g。離心機(jī)：轉(zhuǎn)速不低于4200r/min。試樣制備及保存取代表性的試樣約200g，經(jīng)粉碎機(jī)粉碎后完全通過孔徑為2.0mm的篩，裝入潔凈的容器中，密封并做好標(biāo)識。試樣于-18℃冷凍保存，備用。分析步驟試樣前處理試樣提取準(zhǔn)確稱取5g試樣于50mL離心管中，加入15mL乙腈，渦旋混勻，用高速勻漿機(jī)15000r/min勻漿2min，4200r/min離心5min。試樣凈化準(zhǔn)確從離心管中吸取7mL上清液于15mLEMR-Lipd除脂分散凈化管中（預(yù)先加入3mL水混勻活化），渦旋混勻，4200r/min離心5min。將上清液轉(zhuǎn)移至15mL離心管中，加入（1.6g硫酸鎂和0.4g氯化鈉），渦旋混勻，4200r/min離心5min，吸取3mL上清液至內(nèi)置450mg無水硫酸鎂、150mgC18和150mgPSA的15mL離心管中，渦旋混勻1min，4200r/min離心5min，準(zhǔn)確移取2mL凈化液置于氮吹儀上濃縮至近干，用1mL體積比為2:8的水：乙腈溶液定容，過0.22um有機(jī)濾膜裝入樣品瓶中采用液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀測定。測定條件液相色譜測定參考條件如下：a)色譜柱：ZORBAXSB-C183.5μm×2.1×150mmColumn或相當(dāng)者b)流動相：A相0.1%甲酸乙腈，B相0.1%甲酸5mM乙酸銨水，流動相梯度條件見表1；c)流速：0.4mL/mind)進(jìn)樣量：10μLe)柱溫箱：40℃流動相及梯度洗脫條件時間（min）A:0.1%甲酸乙腈B:0.1%甲酸5mM乙酸銨水0.001.099.03.0030.070.06.0040.060.09.0040.060.012.0060.040.019.0099.01.023.0099.01.023.011.099.027.001.099.0質(zhì)譜測定參考條件a)離子源：ESIb)掃描方式：負(fù)離子模式c)監(jiān)測方式：MRMd)簾氣：30psi；e)霧化器：50psi；f)檢測離子對及霧化器電壓、助加熱氣壓力（GS2）、電噴霧電壓、碰撞電壓(CE)見表2；目標(biāo)組分特征離子對及部分質(zhì)譜參數(shù)名稱母離子(m/z)子離子(m/z)DP(v)CE(v)EP(v)CXP(v)毒菌酚404.8194.9-40-35-5-3404.8368.8-40-30-5-3戊硝酚253134-45-65-5-2253194-45-30-5-2消螨酚265190-50-45-5-2265218-50-40-5-2基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液選擇與被測試樣基質(zhì)相同的空白試樣按照8.1進(jìn)行前處理，得到空白基質(zhì)溶液。準(zhǔn)確吸取10、20、40、80、100和200μL的標(biāo)準(zhǔn)使用液至空白基質(zhì)中，置于氮吹儀上緩慢用氮?dú)庠诔叵麓蹈?，分別加入1mL體積比為2:8的水：乙腈溶液定容，混勻后過0.22um微孔有機(jī)濾膜配制成濃度為10、20、40、80、100和200ng/mL系列基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，供液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀測定。以標(biāo)物質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，相應(yīng)響應(yīng)值峰面積為縱坐標(biāo)，繪制基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。定性和定量保留時間定性被測試樣中目標(biāo)農(nóng)藥色譜峰的保留時間與相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)色譜峰的保留時間相比較，偏差應(yīng)在±0.5min之內(nèi)。離子豐度比定性在相同實(shí)驗(yàn)條件下進(jìn)行試樣測定時，如果檢出的色譜峰的保留時間與標(biāo)準(zhǔn)試樣相一致，并且目標(biāo)化合物選擇的定性離子、定量離子均出現(xiàn)，而且同一檢測批次，對同一化合物，試樣中目標(biāo)化合物的定性離子和定量離子的相對豐度比與質(zhì)量濃度相當(dāng)?shù)幕|(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液相比，其允許偏差不超過下表3規(guī)定的范圍，則可判斷試樣中存在目標(biāo)農(nóng)藥。定性時相對離子豐度的最大允許偏差離子豐度比＞50%＞20%～50%（含）＞10%～20%（含）≤10%允許相對偏差±20%±25%±30%±50%定量外標(biāo)法定量。試樣測定將基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液和試樣溶液依次注入液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀中，以保留時間和定性離子定性，測得定量離子峰面積，待測樣液中農(nóng)藥的響應(yīng)值應(yīng)在儀器檢測的定量測定線性范圍之內(nèi)，超過線性范圍時應(yīng)根據(jù)測定濃度進(jìn)行適當(dāng)倍數(shù)稀釋后再進(jìn)行分析。結(jié)果計算試樣中各農(nóng)藥殘留量以質(zhì)量分?jǐn)?shù)X計，數(shù)值以毫克每千克（mg/kg）表示，按以下公式計算：

X=C×V×15m×1000×2式中：X—試樣中測定組分的含量，單位為mg/kg；C—測得所處理試樣溶液中所測組分的濃度，單位為ng/mL；V—定容體積，單位為mL；m—試樣質(zhì)量，單位為g。在滿足重復(fù)性條件下，取兩次測定的算術(shù)平均值作為結(jié)果，結(jié)果保留到小數(shù)點(diǎn)后兩位。精密度在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立特定結(jié)果的絕對差值不得超過算術(shù)平均值的20%。檢出限本方法的毒菌酚、戊硝酚和消螨酚檢出限：0.0