五味子護(hù)肝片對急性酒精性肝損傷小鼠肝臟的保護(hù)作用

酒精性肝?。╝ld）是由長期飲酒引起的中毒性肝臟疾病。隨著我國生活水平的提高、飲食結(jié)構(gòu)的改變和酒精消費(fèi)量的日益增長,ALD的發(fā)病率也呈現(xiàn)逐年升高的趨勢,漸漸引起了人們的重視。五味子SchisandraChinensis(Turez.)Bill為木蘭科植物五味子的成熟果實,現(xiàn)代研究表明其有助于肝細(xì)胞蛋白質(zhì)的合成,可增高肝藥酶活性,從而發(fā)揮降酶保肝作用。玉米肽具有醒酒作用,主要是由于其中含有高比例的丙氨酸和亮氨酸,因而可促進(jìn)體內(nèi)乙醇的代謝。五味子護(hù)肝片為五味子與玉米肽配伍,添加一定輔料壓片制成。本研究旨在觀察五味子護(hù)肝片對小鼠急性酒精性肝損傷的保護(hù)作用。1材料和方法1.1號復(fù)機(jī)號12五味子護(hù)肝片由西安醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院自制,批號20120312。五味子護(hù)肝片粉碎,蒸餾水溶解,配制成所需濃度,4℃保存,給藥前水浴加熱至37℃。1.2動物昆明種小鼠體質(zhì)量為18~22g,雌雄各半,由第四軍醫(yī)大學(xué)動物中心提供,合格證號:SCXK(陜)2007-007。1.3儀器、設(shè)備和測試儀器Vital-200全自動生化分析儀,荷蘭威圖科學(xué)儀器公司產(chǎn)品;ELx808型酶標(biāo)儀,美國BioTek公司生產(chǎn);微量加樣器,德國Eppendorf公司生產(chǎn);YQ-3型電動勻漿機(jī),金壇市文化儀器有限公司產(chǎn)品;KY91旋渦振蕩器,北京凱云儀科技有限公司產(chǎn)品;GL-25M高速冷凍離心機(jī),上海瀘湘儀離心機(jī)有限公司產(chǎn)品。血清ALT、AST、TG檢測試劑盒為波音特生物科技(上海)有限公司產(chǎn)品;VLDL檢測試劑盒(ELISA法)、MDA、SOD試劑盒、蘇丹Ⅲ染色試劑盒均為南京建成生物工程研究所產(chǎn)品。1.4小鼠的給藥、大鼠的生化指標(biāo)檢測昆明小鼠50只,雌雄各半,體質(zhì)量18~22g,適應(yīng)性飼養(yǎng)3d,隨機(jī)分為5組:正常對照組:給予等容積的蒸餾水;模型組:給予等容積的蒸餾水;五味子護(hù)肝片低劑量組:0.105g/kg,中劑量組:0.21g/kg,高劑量組:0.42g/kg。每組10只,各組給藥容積為10mL/kg,連續(xù)給藥28d,末次給藥后30min后除正常對照組外,其余各組小鼠按12mL/kg劑量一次性灌服50%的乙醇,正常對照組給予等容積的蒸餾水。實驗過程中,各組動物均給予全價顆粒飼料,飼養(yǎng)條件一致,每天記錄小鼠的攝食量及體質(zhì)量的變化。末次給藥后禁食,不禁水,24h后于小鼠眼眶后靜脈叢采血,分離血清-20℃保存待檢。1.4.1血清ALT、AST、SOD、TG活性及MDA、VLDL含量檢測按試劑盒說明進(jìn)行。小鼠頸椎脫臼處死后取肝組織。各組稱取適量肝臟組織,加入9倍體積的預(yù)冷勻漿緩沖液(10mMTris-HCL,0.1mMEDTA-2Na,10mM蔗糖,0.8%NaCL,pH=7.4),電動勻漿(1500rpm,2min),3000rpm離心15min,上清液分裝后-80℃保存?zhèn)溆?。羥胺法測定總SOD活性,TBA比色法測定MDA含量。1.5統(tǒng)計分析實驗結(jié)果以表示,采用單因素方差分析法。所有實驗數(shù)據(jù)采用SPSS13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理。組間顯著性檢驗采用F檢驗。2結(jié)果2.1五味子肝臟保護(hù)片對乙醇引起的急性肝損傷大鼠血清中肝功能指標(biāo)的影響2.2五味子肝臟保護(hù)片對乙醇引起的急性肝疾病中sod和mda的影響見表2。2.3脂滴地權(quán)運(yùn)行表現(xiàn)肝組織肝左葉中部冰凍切片(蘇丹Ⅲ染色)在光學(xué)顯微鏡下觀察,對照組組小鼠肝組織未見紅色脂滴;模型組小鼠肝組織內(nèi)可見大量紅色脂滴,表現(xiàn)為脂滴彌漫浸潤入肝細(xì)胞中;服用五味子護(hù)肝片各劑量組均見脂滴在肝臟的分布范圍和面積明顯減少(P<0.05)。見表3。3藥物病理組織病理學(xué)檢測隨著人均酒精消費(fèi)量的上升,酒精性肝病的發(fā)病率亦不斷增加。酒精對肝臟組織引起損傷,酶從肝細(xì)胞內(nèi)逸出進(jìn)人血液,導(dǎo)致ALT、AST等指標(biāo)升高。機(jī)體大量攝入乙醇后,在乙醇脫氫酶的催化下大量脫氫氧化,使三羧酸循環(huán)和脂肪酸氧化減弱而影響脂肪代謝。乙醇通過增加甘油三酯合成,減少脂肪氧化,降低肝臟運(yùn)出脂肪的功能,增加脂肪組織的脂肪動員,引起早期酒精性脂肪肝和高脂血癥。本實驗中,酒精性肝損傷模型小鼠與正常對照組相比較,血清中ALT、AST、TG、VLDL活性或含量均明顯升高;肝臟組織勻漿中總SOD活性降低,MDA含量升高(P<0.01)。而服用五味子護(hù)肝片中、高劑量組血清中ALT、AST、TG、VLDL活性或含量均降低,肝臟組織SOD活性升高、MDA含量降低,與模型組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05或P<0.01)。小鼠肝臟病理組織學(xué)檢查結(jié)果顯示,服用五味子護(hù)肝片各劑量組脂滴在肝臟的分布范圍和面積均明顯減少(P<0.05)。實驗結(jié)果表明五味子護(hù)肝片可減輕酒精誘導(dǎo)的小鼠肝損傷。1.4.2肝臟病理組織學(xué)檢查取小鼠左葉肝臟,置4%多聚甲醛中固定5min,PBS沖洗后置于冷凍保護(hù)液中于-20℃保存待檢,臨切片之前一天用30%蔗糖沉底脫水。從小鼠肝左葉中部做橫切面取材,冰凍切片,蘇丹Ⅲ染色。鏡檢,從肝臟的一端視野開始記錄細(xì)胞的病理變化,用5倍物鏡連續(xù)觀