羅紅霉素在胃腸道介質中的溶出規(guī)律研究

由于藥物吸收的前提是吸收部位的溶解，所以溶解是吸收的先決條件。若溶解速度大于吸收速度,則吸收過程與劑型關系較小。若溶解速度小于吸收速度,則溶解成為吸收過程的限速步驟。油水分配系數(shù)是模擬生物體內藥物親脂性或疏水性的物理參數(shù),是指藥物在油、水兩相中分配平衡后,油相中的藥物濃度與水相中的藥物濃度之比。藥物的溶解度及油水分配系數(shù)直接影響藥物在體內的吸收,是預測藥物口服吸收的重要物理參數(shù)。溶出度不僅可反映固體制劑的內在質量,評價工藝的一致性,而且與生物利用度有一定相關性。國外對仿制藥的溶出度研究有非常嚴格的規(guī)定和要求,如日本要求在4種溶出介質(分別為pH1.2、4.0、6.8、水)中與原研制劑的溶出曲線進行比較,均應一致。目前,國內正在啟動仿制藥一致性評價工作。本項研究測定了羅紅霉素在胃腸道介質中溶解度、油水分配系數(shù)及穩(wěn)定性,并研究原研藥片在4種溶出介質中的溶出規(guī)律,得出了一些重要的結論,對羅紅霉素固體制劑的劑型、處方和溶出度檢查方法的設計和改進具有指導作用,為羅紅霉素固體制劑一致性評價工作提供了科學依據(jù),亦可為大環(huán)內酯類抗生素提供研究思路。1設備和材料1.1藥物、試劑和儀器Agilent1260液相色譜儀(包括在線真空脫氣機、四元泵、自動進樣系統(tǒng)),MS31KA3617025漩渦混勻器(廣州依科儀器公司),SartoriusPB-20PH計,HHS6電熱恒溫水浴鍋(上海圣欣科儀器公司),天津大學ZRS智能型藥物溶出儀。美國ABSCIEX公司4000QTRAPTM復合型三重四極桿/線性離子阱串聯(lián)質譜儀。1.2試劑與儀器對照品羅紅霉素和去紅霉糖羅紅霉素(中國食品藥品檢定研究院),羅紅霉素原研羅力得片(批號1A25K,法國SanofiAventis公司),正辛醇、冰醋酸、磷酸二氫鉀、無水磷酸氫二鉀、磷酸均為分析純(國藥集團化學試劑有限公司),鹽酸為分析純(中國杭州化學試劑有限公司)。2方法和結果2.1流動相、流速和檢測波長色譜柱:島津ShimVP-ODS(4.6mm×250mm,5μm)柱;流動相:0.067mol·L-1磷酸二氫銨溶液(用三乙胺調節(jié)pH至6.5)-乙腈(65∶35);流速:1.0mL·min-1;檢測波長為:210nm;進樣量:20μL。2.2羅紅霉素溶解度的測定取0.04mol·L-1醋酸鈉溶液,用冰醋酸分別調節(jié)pH至4.0、4.5、5.0、5.5,作為pH4.0、4.5、5.0、5.5醋酸鹽緩沖液;取磷酸二氫鉀3.4g和無水磷酸氫二鈉3.55g,加水2000mL溶解,作為pH6.8磷酸鹽緩沖液,取此液用磷酸調節(jié)pH至6.0,作為pH6.0磷酸鹽緩沖液。量取不同pH緩沖液作為介質,加入過量的羅紅霉素,置37℃水浴恒溫振搖30min溶解,0.45μm微孔濾膜過濾,取續(xù)濾液,HPLC測定,計算羅紅霉素溶解度。結果見表1。表明隨著pH增大,溶解度降低,羅紅霉素在酸性介質中溶解度較大。2.3表觀項目藥物濃度以正辛醇-水為模擬系統(tǒng),采用渦旋振蕩-HPLC法測定表觀油水分配系數(shù)。取2mL羅紅霉素儲備液(37℃,0.17mg·mL-1),置具塞離心管中,加入2mL對應pH緩沖液飽和的正辛醇(37℃),渦旋振蕩2min,置37℃水浴恒溫靜置分層。分別取油、水層溶液,HPLC測定,計算羅紅霉素在油、水兩相中藥物濃度,計算表觀油水分配系數(shù)。結果見表1。表明隨著pH增大,油/水分配系數(shù)增大,羅紅霉素在近中性介質中油/水分配系數(shù)較大。2.4降解產物的鑒定取羅紅霉素對照品適量,加0.1mol·L-1鹽酸溶液溶解并稀釋制成每1mL中約含0.17mg的溶液,分別于不同時間進樣測定,結果見表2和圖1,表明羅紅霉素在0.1mol·L-1鹽酸溶液中極不穩(wěn)定,30min已基本降解完畢。降解產物的質譜確認:取羅紅霉素溶解在0.1mol·L-1鹽酸溶液中30分鐘后的溶液,液質聯(lián)用儀上進樣,結果液相色譜圖中供試品溶液降解產物的保留時間與去紅霉糖羅紅霉素對照品一致,質譜圖顯示m/z679.5、m/z701.5、m/z717.4分別為[M+H]+、[M+Na]+、[M+K]+離子,與去紅霉糖羅紅霉素對照品質譜圖一致,確認檢出的降解產物為去紅霉糖羅紅霉素。去紅霉糖羅紅霉素的結構式見圖2。2.5溶液穩(wěn)定性測定取羅紅霉素對照品適量,加不同pH緩沖液溶解并稀釋制成每1mL中約含0.17mg(水溶液為0.09mg·mL-1)的溶液,分別于0、2.5、68h進樣測定,峰面積結果見表3,表明隨著pH增大,溶液的峰面積增加,表明穩(wěn)定性增加?？梢?羅紅霉素在酸性介質中不穩(wěn)定,在近中性介質中穩(wěn)定。2.6羅紅霉原研究中的四種溶解介質中的溶出曲線2.6.1氫二鈉標準溶液的配制pH6.8磷酸鹽緩沖液:取磷酸二氫鉀3.4g和無水磷酸氫二鈉3.55g,加水適量使溶解后,定容至1000mL,再稀釋1倍,即得。pH5.5磷酸鹽緩沖液:取0.04mol·L-1醋酸鈉溶液,用冰醋酸調節(jié)pH至5.5。2.6.2羅紅霉素的測定取原研藥片,照溶出度測定法(中國藥典2010年版二部附錄XC第一法),分別以0.1mol·L-1鹽酸溶液、pH5.5醋酸鹽緩沖液、pH6.8磷酸鹽緩沖液和為溶出介質,轉速為100r·min-1,依法操作,在5、10、15、30、45、60min時,分別取溶液5mL,濾過,并及時在操作容器中補充上述溶劑5mL。另取羅紅霉素對照品適量,精密稱定,用上述溶出介質溶解并稀釋制成每1mL中含0.16mg的溶液,作為對照品溶液。照“2.1”項下的色譜條件,精密量取上述兩種溶液各20μL,注入液相色譜儀,記錄色譜圖,按外標法以峰面積計算出每片的溶出量。原研藥片在4種溶出介質中的溶出曲線見表4和圖4,HPLC的色譜圖見圖3。原研藥SanofiAventis公司羅力得片在酸性介質(pH1.2鹽酸溶液)中溶出較少,15min溶出量僅為14%,而在pH5.5醋酸鈉緩沖液介質中快速溶出,15min溶出量在85%以上。3羅紅霉素在線性介質中的溶解度及溶出行為0.1mol·L-1鹽酸溶液:鹽酸9mL→1000mL。水:經(jīng)脫氣。3.1影響藥物胃腸道吸收的因素眾多,但藥物溶解于胃腸道及胃腸粘膜是藥物吸收的首要前提。因此,本實驗測定了羅紅霉素的溶解度和油水分配系數(shù)(與胃腸粘膜滲透性密切相關),以期對羅紅霉素的胃腸道吸收有初步的判斷,輔助分析羅紅霉素的腸吸收情況。羅紅霉素最大規(guī)格溶出度實驗濃度為0.33mg·mL-1,一般認為logP>2,藥物較容易在腸道中被吸收。胃腸道不同部位的酸堿性不同,胃pH1.0~3.0,十二脂腸pH4.0~6.0,空腸pH6.0~7.0,回腸pH7.0,結腸pH8.0。實驗結果表明,羅紅霉素在酸性介質中極不穩(wěn)定,在胃腸道近中性pH范圍,羅紅霉素的溶解度較低、油水分配系數(shù)較大,低溶解性高通透性,屬于溶出度生物藥劑學分類系統(tǒng)(BCS)Ⅱ類:低溶解度-高通透性藥物。因此,油水分配系數(shù)對腸吸收結果影響不大,而溶解度則有一定影響。通過對羅紅霉素理化性質的研究,認為:降低羅紅霉素在胃液(酸性介質)中的時間和釋放,延長藥物在腸道上的時間,可達到提高生物利用度的目的。3.2羅紅霉素原研藥SanofiAventis公司羅力得片在4種溶出介質中的溶出曲線結果,在酸性介質(pH1.2鹽酸溶液)中溶出較少,15min溶出量僅為14%,而在pH5.5醋酸鈉緩沖液介質中快速溶出,15min溶出量在85%以上。說明原研片的處方設計,是依據(jù)了羅紅霉素的理化性質,處方設計比較合理,類似于腸溶片。原研藥片在四種溶出介質中的溶出行為與羅紅霉素理化性質研究得出的結論相符。3.3通過對羅紅霉素理化性質和原研藥片溶出規(guī)律的研究,認為其制劑設計為類似于腸溶制劑更為合理,應當在酸性介質中溶出少、在近中性介質中快速溶出。3.4通過本項研究,認為羅紅霉素固體制劑溶出度檢查方法應進一步完善,中國藥典2010年版二部羅紅霉素固體制劑溶出度檢查方法僅規(guī)定了在pH5.5醋酸鈉緩沖液介質中的溶出不得低于75%,