湖州師范學院生命科學學院生物系實驗九

誘變劑的微核測試《遺傳學》省級精品課程一、實驗目的《遺傳學》省級精品課程1、了解細胞微核形成的機理及其形態(tài)特點，2、學習植物根尖細胞的微核檢測技術(shù)。二、實驗原理《遺傳學》省級精品課程※

微核(micronuclei)簡稱MCN，是真核類生物細胞中的一種異常結(jié)構(gòu)，往往是細胞經(jīng)輻射或化學藥物的作用而產(chǎn)生的。在細胞間期，微核呈圓形或橢圓形，游離于主核之外，大小應(yīng)在主核1/3以下。微核的折光率及細胞化學反應(yīng)性質(zhì)和主核一樣，也具合成DNA的能力。※微核形成:有絲分裂后期喪失著絲粒的染色體斷片不能向兩極移動，游離于細胞質(zhì)中，在間期細胞核形成時，在核產(chǎn)生一到幾個很小的圓形結(jié)構(gòu)—微核，直徑大約是細胞直徑的1/20～1/5。微核微核微

核《遺傳學》省級精品課程微核率的大小是和用藥的劑量或輻射累積效應(yīng)呈正相關(guān)

，因此，微核是常用的遺傳毒理學指標之一，指示染色體或紡錘體的損傷。微核測試已用于輻射損傷、輻射防護、化學誘變劑、新藥試驗、染色體遺傳疾病及癌癥前期診斷等各方面。《遺傳學》省級精品課程二、實驗原理三、實驗材料大蒜或蠶豆四、實驗儀器設(shè)備及藥品顯微鏡、恒溫培養(yǎng)箱、恒溫水浴鍋、鑷子、載玻片及蓋玻片等。鹽酸、甲醇、石炭酸品紅、秋水仙素（硫酸銅、重鉻酸鉀）?！哆z傳學》省級精品課程五、實驗步驟1、幼根的培養(yǎng)大蒜：提前

3—5d進行培養(yǎng)，將大蒜瓣剝?nèi)ネ膺吥べ|(zhì)枯皮，下端可見許多微微凸起的根原體，將蒜瓣架在燒杯（大小與蒜瓣適宜）口上，杯中盛滿清水，使蒜瓣的下部浸入水中，置培養(yǎng)箱中，注意每天換水，經(jīng)3—5d后，即可長出1-2cm的嫩根。蠶豆：浸種24h，期間換水2次，25℃

芽，36-48h生根1-2cm?！哆z傳學》省級精品課程2、處理根尖：陽性檢測采用0.1%秋水仙素[0.1g/L硫酸銅（大蒜）、0.5g/L重鉻酸鉀（蠶豆）]，對照用自來水處理，處理時間24h，處理液浸沒根尖。3、恢復培養(yǎng)：處理后的根尖用自來水浸洗3次，每次2-3min，洗凈后在水中恢復培養(yǎng)24h。4、固定：切取1cm左右的根尖，用甲醇：冰醋酸（3：1）固定液固定24h后棄去固定液，移入70％酒精中，4℃冰箱保存?！哆z傳學》省級精品課程五、實驗步驟5、酸解：棄去固定液，用蒸餾水漂洗2-3次，吸凈水，加入6M鹽酸浸沒根尖，于室溫解離

10min（或者1N鹽酸60℃8-10min），棄去鹽酸，漂洗根尖2-3次，徹底洗凈鹽酸。6、染色：截下1-2mm長的根尖，滴加適量的石炭酸品紅染液，染色10min，加蓋玻片，壓片觀察，記錄有微核的細胞數(shù)目?！哆z傳學》省級精品課程五、實驗步驟六、實驗結(jié)果1、微核形成與識別：首先在低倍鏡中找到分生組織區(qū)細胞分散均勻，分裂相較多的部位，再轉(zhuǎn)高倍鏡觀察，找到微核。在主核大小的1/3以下，并與主核分離的小核。小核著色與主核相當或稍淺。小核形態(tài)為圓形、橢圓形或不規(guī)則型。《遺傳學》省級精品課程1、微核形成與識別《遺傳學》省級精品課程1、微核形成與識別《遺傳學》省級精品課程《遺傳學》省級精品課程123436小時秋水仙素對大蒜根尖的影響1—0.1%秋水仙素對大蒜根尖細胞的多倍體和微核2—0.2%秋水仙素對大蒜根尖細胞的《多遺倍傳體和學》微省核級精品課程3、4—0.05%秋水仙素對大蒜根尖細胞的多倍體和微核2、微核千分率（

MCN‰

）

每一處理觀

察3個根尖，每個根尖計數(shù)100個-300細胞，統(tǒng)計其中含的細胞數(shù)，計算平均數(shù)，即為

該處理的微核千分率。微核千分率（

MCN‰

）=

×1000‰六、實驗結(jié)果《遺傳學》省級精品課程片

號第一片第二片第三片各自觀察的細胞數(shù)或微核數(shù)細胞數(shù)微核數(shù)細胞數(shù)微核數(shù)細胞數(shù)微核數(shù)總

計平均微千分率《遺傳學》省級精品課程蠶豆（大蒜）根尖微核檢測記錄表樣品實測MCN‰平均值對照組（標準水）MCN‰平均值3、污染指標

=（PI）六、實驗結(jié)果采用如下標準進行分析以確定樣品的污染程度：MCN‰在10‰以下，表示基本沒有污染；MCN‰在10‰－18‰?yún)^(qū)間，則表示有輕度污染；

MCN‰在18‰－30‰?yún)^(qū)間，則表示有中度污染；

MCN‰在30‰以上，則表示有重度污染；《遺傳學》省級精品課程七、作業(yè)1