煙草據(jù)WTO調(diào)查：2004年全世界因狂犬病致死人數(shù)約5.5萬人中國衛(wèi)生部通報：2004年７月，狂犬病列法定報告?zhèn)魅静∷劳鰯?shù)之首。發(fā)病死亡率近100%

能產(chǎn)生狂犬病抗體蛋白的轉(zhuǎn)基因每100kg豬或牛的胰腺中僅可提取4~5g。

1979年，美國將人的胰島素基因重組到大腸桿菌內(nèi)，實現(xiàn)了細(xì)菌生產(chǎn)胰島素，大大降低了生產(chǎn)成本。治療糖尿病特效藥——

據(jù)WTO調(diào)查：

2005年全世界約有糖尿病患者1.8億人，我國約6000萬。胰島素思考：轉(zhuǎn)基因技術(shù)實現(xiàn)了一種生物的某些性狀在另一種生物中表達(dá)。這些性狀的表達(dá)與我們學(xué)過的基因的什么過程有關(guān)？密碼子在生物界是的！DNA(基因)

mRNA蛋白質(zhì)(性狀)轉(zhuǎn)錄翻譯通用問題探討：蘇云金桿菌含有一種可以合成毒蛋白的基因。讓細(xì)菌的毒蛋白基因在棉花細(xì)胞中表達(dá)，可培育出抵抗棉鈴蟲害的抗蟲棉。

想一想需要做哪些關(guān)鍵工作？蘇云金桿菌毒蛋白普通棉花抗蟲棉一、“分子手術(shù)刀”二、“分子縫合針”三、“分子運輸車”轉(zhuǎn)基因思考：⒈自然界是否存在一種生物的DNA進(jìn)入另一生物的情況？⒉動物容易讓外來DNA侵入自身而得以遺傳嗎？為什么？植物呢？⒊單細(xì)胞生物，容易遭到入侵嗎？⒋單細(xì)胞生物并沒有在進(jìn)化中滅絕，而是產(chǎn)生了一些特殊的酶來防范。這些酶應(yīng)該有什么特點？可能酶能識別外來侵入的DNA并將其分解，而對自身的DNA不能起作用?！胺肿邮中g(shù)刀”

——限制性核酸內(nèi)切酶一、限制性核酸內(nèi)切酶——“分子手術(shù)刀”⒈主要來源：⒉種類與命名：⒊作用特點：⒋作用結(jié)果：原核生物閱讀“分子的手術(shù)刀”2min一、限制性核酸內(nèi)切酶——“分子手術(shù)刀”⒈主要來源：⒉種類與命名：⒊作用特點：⒋作用結(jié)果：幾種最常用的限制酶及其識別和作用位點EcoRⅠSamⅠHindⅢBamHⅠ識別特定核苷酸序列原核生物產(chǎn)生黏性末端或平末端Goon,切斷磷酸二酯鍵GAATTC

CTTAAGCCCGGG

GGGCCCAAGCTT

TTCGAAGGATCC

CCTAGG⒉種類與命名：

現(xiàn)在已經(jīng)從約300種微生物中分離出了約4000種限制性內(nèi)切酶(限制酶)。EcoRⅠSmaⅠ粘質(zhì)沙雷氏桿菌（Serratiamarcesens）大腸桿菌（EscherichiacoliR）練習(xí)：流感嗜血桿菌的d菌株(Haemophilusinfluenzaed)中先后分離到3種限制酶，則分別命名為:HindⅠ、HindⅡ和HindⅢSmaⅠ平末端平末端

EcoRⅠ黏性末端黏性末端

EcoRⅠ黏性末端黏性末端Goback重復(fù)演示……GAATTC…………CTTAAG…………GAATTC…………CTTAAG……EcoRⅠ……GAATTC…………CTTAAG…………GAATTC…………CTTAAG……不同來源的DNA片段混合將不同種來源的DNA片段連接起來生物A基因片段生物B基因片段……G

AATTC…………CTTAA

G…………G

AATTC…………CTTAA

G……酶切二、“分子縫合針”

——DNA連接酶⒈分類：⑴E·coliDNA連接酶⑵T4DNA連接酶⒉作用：P5

可把黏性末端之間的縫隙“縫合”起來，E·coliDNA連接酶或T4DNA連接酶即恢復(fù)被限制酶切開的兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵

T4DNA連接酶還可把平末端之間的縫隙“縫合”起來，但效率較低DNA連接酶與DNA聚合酶是一回事嗎？為什么？

不是一回事。相同點：形成磷酸二酯鍵但是：1）DNA聚合酶只能將單個核苷酸加到已有的核酸片段上，形成磷酸二酯鍵；而DNA連接酶是在兩個DNA片段之間形成磷酸二酯鍵2）DNA聚合酶需要以一條DNA鏈為模板；而DNA連接酶不需要模板。三、“分子運輸車”

——基因進(jìn)入受體細(xì)胞的載體⒈載體需要的條件：⑴有1~多個限制酶切點⑵對受體細(xì)胞無害⑶導(dǎo)入基因能在受體細(xì)胞中復(fù)制、表達(dá)⑷有某些標(biāo)記基因，便于篩選⒉常用運載體：⑴細(xì)菌的質(zhì)粒⑵噬菌體或某些動植物病毒⑶假如目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞后不能復(fù)制或不能轉(zhuǎn)錄，轉(zhuǎn)基因生物能有預(yù)想的效果嗎？⑴作為分子運輸車——載體，如果沒有切割位點將會怎樣？⑵霍亂菌的質(zhì)粒多個限制酶切點，你會用它來做分子運輸車