尼達(dá)尼布治療糖尿病腎病db/db小鼠腎纖維化的作用研究研究背景糖尿病腎病(diabeticnephropathy,DN),作為當(dāng)今世界大部分地區(qū)終末期腎臟病(End-stagerenaldisease,ESRD)的常見原因,包括腎臟替代治療資源有限的地區(qū)。全球糖尿病患病率迅速增長,特別是在發(fā)展中國家,DN和ESRD的患病率的持續(xù)上升。由于治療費(fèi)用高昂、療效差及高病死率,且尚未有特異性治療方案,DN的治療一直是醫(yī)學(xué)界棘手的問題。傳統(tǒng)上,DN被認(rèn)為是血流動(dòng)力學(xué)因素與代謝因素相互作用的結(jié)果,然而,近些年研究發(fā)現(xiàn)炎癥介質(zhì)在疾病的早期階段發(fā)揮重要作用,最近的證據(jù)顯示,酪氨酸激酶受體(RTK)激活可誘導(dǎo)多種與間質(zhì)纖維化進(jìn)展相關(guān)信號(hào)分子,在腎臟纖維化過程中起關(guān)鍵作用。尼達(dá)尼布(BIBF1120)是成纖維細(xì)胞生長因子受體(FGFR),血小板衍生生長因子受體(PDGFR),血管內(nèi)皮生長因子受體(VEGFR)和Src家族激酶的三重激酶抑制劑,FDA已批準(zhǔn)其用于治療特發(fā)性肺纖維化(IPF)。然而尚未報(bào)道BIBF1120在DN腎臟纖維化中的藥理功效。鑒于多種RTK參與腎纖維化的病理生理進(jìn)程,低選擇性靶向RTK的受體抑制劑BIBF1120可能可以有效的減輕糖尿病腎病腎臟纖維化程度。研究目的本實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)旨意在db/db糖尿病腎病小鼠基礎(chǔ)上研究BIBF1120能否有效的減輕DN腎臟纖維化程度,進(jìn)而延緩DN進(jìn)展,為今后治療DN抗纖維化新藥的研發(fā)提供實(shí)驗(yàn)證據(jù)。研究方法建立db/db小鼠糖尿病腎病模型,并設(shè)置BIBF1120干預(yù)組。將小鼠分為三組:對(duì)照組(db/m)、糖尿病腎病組(db/db+DMSO)、BIBF1120干預(yù)組(db/db+BIBF1120)。在8周齡所有小鼠進(jìn)入實(shí)驗(yàn),在處理2周后(10周齡)處死動(dòng)物,分別留取血液、尿液及腎組織標(biāo)本,并測定腎臟重量。測定小鼠空腹血糖、胰島素、血清肌酐(Scr)、總膽固醇(T-CHO)、甘油三酯(TG)、尿白蛋白肌酐比(UACR),高倍鏡觀察小鼠腎組織形態(tài)學(xué)表現(xiàn),并應(yīng)用軟件半定量分析,免疫組化法比較各組小鼠腎臟組織細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)蛋白(即CollagenI)、CD68(活性巨噬細(xì)胞的標(biāo)記物)的相對(duì)表達(dá)并應(yīng)用軟件半定量分析。研究結(jié)果1.各組小鼠腎臟功能指標(biāo)和腎臟系數(shù):db/db小鼠Scr、UACR及腎臟系數(shù)比db/m組小鼠升高(P<0.05),應(yīng)用BIBF1120干預(yù)后出現(xiàn)改善趨勢,db/db+BIBF1120組比db/db+DMSO組中小鼠Scr、UACR水平呈現(xiàn)下降趨勢(P<0.05)。2.各組小鼠腎臟組織病理:db/db組小鼠腎臟病理顯示出明顯形態(tài)損傷,其特征在于管狀擴(kuò)張、上皮萎縮和間質(zhì)擴(kuò)張伴膠原堆積。相比之下,應(yīng)用BIBF1120治療的小鼠腎臟顯示較輕的纖維化程度。Masson及PAS染色的光密度分析顯示BIBF1120顯著減少纖維化區(qū)域及腎小球系膜基質(zhì)擴(kuò)展指數(shù)(GMI)(P<0.05)。3.各組小鼠腎小管上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)程度:db/db組小鼠ECM蛋白CollagenI的表達(dá)較db/m組小鼠表達(dá)明顯增高(P<0.05),相對(duì)于db/db+DMSO組,db/db+BIBF1120組小鼠腎臟組織中CollagenI的表達(dá)明顯減少(P<0.05)。4.各組小鼠腎組織巨噬細(xì)胞浸潤檢測:與db/m組相比,db/db組小鼠腎臟中CD68陽性巨噬細(xì)胞數(shù)量明顯增加(