補(bǔ)體依賴的細(xì)胞毒實(shí)驗(yàn)

Complement-dependentcytotoxicity抗原（antigen,Ag）:

能夠刺激機(jī)體產(chǎn)生抗體和致敏淋巴細(xì)胞，并能與之特異性結(jié)合的物質(zhì)?？贵w(antibody,Ab)：

B細(xì)胞識別抗原后增殖分化為漿細(xì)胞所產(chǎn)生的可特異性結(jié)合抗原的一組糖蛋白。

抗原-抗體反應(yīng)的特點(diǎn)與影響因素反應(yīng)條件：

適當(dāng)?shù)臏囟入娊赓|(zhì)酸堿度特點(diǎn)：

特異性可逆性可見性（合適的抗原抗體比例）凝集反應(yīng)(agglutination):顆粒性抗原與抗體的反應(yīng)。沉淀反應(yīng)(precipitation):可溶性抗原與抗體的反應(yīng)。補(bǔ)體參與的反應(yīng)免疫標(biāo)記技術(shù)（immunolabellingtechnique）:用示蹤物質(zhì)標(biāo)記抗原或抗體，進(jìn)行抗原-抗體反應(yīng)的檢測。

抗原-抗體反應(yīng)的基本檢測方法本次實(shí)驗(yàn)?zāi)康?掌握細(xì)胞毒實(shí)驗(yàn)的原理2補(bǔ)體依賴細(xì)胞毒實(shí)驗(yàn)基本操作步驟3了解補(bǔ)體依賴細(xì)胞毒實(shí)驗(yàn)的應(yīng)用補(bǔ)體的作用和激活途徑補(bǔ)體的作用溶菌和溶細(xì)胞促進(jìn)中和溶解病毒調(diào)理吞噬炎癥介質(zhì)免疫粘附補(bǔ)體的激活途徑經(jīng)典途徑旁路途徑MBL途徑

實(shí)驗(yàn)原理+補(bǔ)體臺盼藍(lán)染液抗原與抗體結(jié)合實(shí)驗(yàn)主要材料小鼠抗血清（

）3.補(bǔ)體：新鮮豚鼠血清（補(bǔ)）4.

磷酸鹽緩沖液（PBS

），載玻片、蓋玻片、一次性移液管5.臺盼藍(lán)染色液(講臺上取)實(shí)驗(yàn)材料需要清洗回收:請及時(shí)清洗完交至講臺處由老師檢查：剪刀、鑷子、玻璃培養(yǎng)皿、

研磨棒。操作步驟一、小鼠胸腺/脾臟細(xì)胞懸液的制備

4~6周齡小鼠斷頸處死，取出胸腺/脾臟放至含有1~3mLPBS(一次性移液管)的平皿中，置于復(fù)篩網(wǎng)上，用剪刀和鑷子將組織處理成單細(xì)胞懸液。胸腺注意事項(xiàng)：小鼠斷頸要迅速、徹底，以防小鼠掙扎過程中出血過多。脾臟操作步驟振蕩混勻，置37C水浴箱，10min振蕩混勻，置37C水浴箱，20min每管各加50ul0.4%臺盼藍(lán)，混勻后立即鏡下觀察振蕩混勻，滴片加蓋玻片，鏡檢Ag+Abcomplement二、細(xì)胞毒實(shí)驗(yàn)：按下表加樣PBS/脾臟細(xì)胞結(jié)果觀察

臺盼藍(lán)染色：如果細(xì)胞膜不完整、破裂，臺盼藍(lán)染料進(jìn)入細(xì)胞，細(xì)胞變藍(lán)。如果細(xì)胞膜完整，細(xì)胞不為臺盼藍(lán)染色，則為正常細(xì)胞或凋亡細(xì)胞。此方法對反映細(xì)胞膜的完整性，區(qū)別壞死細(xì)胞有意義。ABA.對照組B.實(shí)驗(yàn)組注意事項(xiàng)：臺盼藍(lán)染色后放置時(shí)間不能太長，2-5min之內(nèi)觀察結(jié)果，否則出現(xiàn)假陽性，需要重新染色。計(jì)算殺傷率：在高倍鏡下計(jì)數(shù)200個(gè)細(xì)胞中死細(xì)胞的百分率補(bǔ)體依賴