降壓物質(zhì)檢查法

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山東省藥品檢驗(yàn)所1整理課件內(nèi)容提要根本概念和原理2021年版增修訂內(nèi)容檢查法歐洲藥典降壓物質(zhì)檢查法組胺類物質(zhì)檢查法整理課件根本概念和原理

檢驗(yàn)?zāi)康慕M胺、緩激肽一類的物質(zhì)具有血管擴(kuò)張作用，超過一定劑量會(huì)使血壓快速降低，對人體產(chǎn)生危害。來自動(dòng)物或微生物發(fā)酵提取物及生產(chǎn)過程中有可能混入此類物質(zhì)的原料，應(yīng)建立降壓物質(zhì)檢查項(xiàng)，如抗生素、氨基酸、多肽等。來自動(dòng)植物、微生物發(fā)酵提取物及生產(chǎn)過程中有可能混入組胺類或類組胺類物質(zhì)的注射劑(靜脈〕，應(yīng)建立降壓物質(zhì)檢查項(xiàng)。如抗生素、中藥注射劑、氨基酸、多肽類等。整理課件根本概念和原理降壓物質(zhì)檢查法定義：本法系比較組胺對照品〔S〕與供試品〔T〕引起麻醉貓血壓下降的程度，以判定供試品中所含降壓物質(zhì)的限度是否符合規(guī)定本法原理是利用貓對組胺樣物質(zhì)具有較為敏感的作用，通過靜脈給予一定劑量的供試品，觀察對麻醉貓血壓的影響，以判定供試品中降壓物質(zhì)的限度是否符合要求。整理課件2021年版增修訂情況歷史沿革1985年版藥典至現(xiàn)行藥典〔2005年版〕方法根本一致2005年版動(dòng)物去掉了狗〔5kg以上〕2021年版修訂整理課件2021版與2005版區(qū)別2010版2005版1、經(jīng)驗(yàn)證保持活性符合要求的條件下

如無沉淀析出2、制備配制3、按品種項(xiàng)下規(guī)定的限值，且供試品溶液與對照品稀釋液的注入體積應(yīng)相等的要求，制備適當(dāng)濃度的供試品溶液。按品種項(xiàng)下規(guī)定的限量，配成適當(dāng)濃度的供試品溶液。試驗(yàn)時(shí)，一般要求供試品溶液與對照品稀釋液的注入體積應(yīng)相等整理課件2021版與2005版區(qū)別4、一般為13.3～20.0kPa一般為13.3~16.0kPa5、每次注射應(yīng)在前一次反應(yīng)恢復(fù)穩(wěn)定以后進(jìn)行，且相鄰兩次注射的間隔時(shí)間應(yīng)盡量保持一致相鄰兩次注射的間隔時(shí)間應(yīng)一致（3~5分鐘），每次注射應(yīng)在前一次反應(yīng)恢復(fù)穩(wěn)定以后進(jìn)行6、則判定即認(rèn)為整理課件

修訂背景1、強(qiáng)調(diào)對照品的降壓活性要符合要求2、強(qiáng)調(diào)貓的正常血壓范圍為13.3~20.0kPa3、強(qiáng)調(diào)每次注射應(yīng)在前一次反響恢復(fù)穩(wěn)定以后進(jìn)行，而不強(qiáng)調(diào)要3~5分鐘之內(nèi)。

整理課件檢查法-材料1血壓記錄裝置：生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)〔多導(dǎo)生理記錄儀〕，相應(yīng)的傳感器，血壓計(jì)〔定標(biāo)用〕2動(dòng)脈插管〔細(xì)的硬塑料管〕、靜脈插管〔10號(hào)或12號(hào)鈍針頭〕、三通等連接裝置，可調(diào)定量加樣器，軟管〔硅膠管或乳膠管〕。31ml、2ml、5ml、10ml注射器〔4號(hào)半針頭〕，玻璃容器：吸管、容量瓶等4相應(yīng)精度天平〔對照品萬分之一〕、動(dòng)物天平〔秤〕5試劑：供試品、組胺對照品、肝素鈉〔針劑或原料均可〕、苯巴比妥鈉注射液、戊巴比妥鈉等麻醉劑，生理鹽水(氯化鈉注射液〕6手術(shù)器械、保溫手術(shù)臺(tái)、固定貓用的繩具等整理課件檢查法-材料手術(shù)器械：剪毛剪、手術(shù)剪、眼科剪、止血鉗、手術(shù)刀、手術(shù)鑷、眼科鑷〔直和彎〕、氣管插管、動(dòng)脈夾、脫脂棉、紗布整理課件檢查法-對照品

對照品溶液的配制精密稱取磷酸組胺對照品適量，按組胺計(jì)算，加水溶解使成每1ml中含1.0mg的溶液，分裝于適宜的容器內(nèi)，4～8℃貯存。經(jīng)驗(yàn)證保持活性符合要求的條件下

，可在3個(gè)月內(nèi)使用。對照品稀釋液的配制臨用前，精密量取組胺對照品溶液適量，用氯化鈉注射液配成每1ml中含組胺0.5ug的溶液。注：1對照品割開勿使玻璃屑調(diào)入2折算×0.362，1mg磷酸組胺相當(dāng)于組胺3貯存液用滅菌水配制，保存，使用時(shí)取出放置至室溫整理課件檢查法-供試品溶液供試品溶液的配制按品種項(xiàng)下規(guī)定的劑量，配成適當(dāng)濃度的供試品溶液。試驗(yàn)時(shí)，一般要求供試品溶液與對照品稀釋液的注入體積應(yīng)相等。注：供試品溶液與對招品溶液注入體積應(yīng)相等，一般為0.2ml/kg體重舉例：注射用阿齊霉素，標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定注射量為2000u/kg，那么應(yīng)配成10000u/ml，按0.2ml/kg注射，給藥量為2000u/kg供試品和對照品如體積相差過大，可通過補(bǔ)充生理鹽水量調(diào)整。整理課件檢查法取健康合格、體重2kg以上的貓，雌者無孕。用適宜的麻醉劑(如巴比妥類)麻醉后，固定于保溫手術(shù)臺(tái)上，別離氣管并插入插管以使呼吸暢通，必要時(shí)可進(jìn)行人工呼吸。在一側(cè)頸動(dòng)脈插入連接測壓計(jì)的動(dòng)脈套管，管內(nèi)充滿適宜的抗凝劑溶液，以記錄血壓。也可用其他適當(dāng)儀器記錄血壓。在一側(cè)股靜脈內(nèi)插入靜脈插管，供注射藥液用。試驗(yàn)中應(yīng)注意保持動(dòng)物體溫。全部手術(shù)完畢后，將測壓計(jì)調(diào)節(jié)到與動(dòng)物血壓相當(dāng)?shù)母叨?一般為13.3～16.0kPa)，開啟動(dòng)脈夾，待血壓穩(wěn)定后，方可進(jìn)行藥液注射。各次注射速度應(yīng)相同。每次注射后立即注入一定量的氯化鈉注射液，相鄰兩次注射的間隔時(shí)間應(yīng)一致(3～5分鐘)，每次注射應(yīng)在前一次反響恢復(fù)穩(wěn)定以后進(jìn)行。整理課件動(dòng)物要求健康合格，體重2kg以上的貓，雌者無孕。來源：目前可為市售家貓一般在3kg以上為好，麻醉耐受性，血壓穩(wěn)定無孕實(shí)驗(yàn)過程中注意保溫整理課件檢查法-麻醉常用麻醉劑和劑量戊巴比妥鈉：靜脈注射或腹腔注射30～40mg/kg，一般配成30～40mg/ml，按每kg體重給藥1ml，一次給藥可維持麻醉2～4h，優(yōu)點(diǎn)為起效快，缺點(diǎn)維持時(shí)間短苯巴比妥鈉+戊巴比妥鈉：〔比例不同實(shí)驗(yàn)室不同〕苯巴比妥鈉〔1ml：100mg〕135mg/kg＋約2mg/kg戊巴比妥鈉〔可配成10mg/ml〕 烏拉坦：靜脈注射或腹腔注射1～1.25g/kg，優(yōu)點(diǎn)對呼吸抑制小。整理課件檢查法-儀器連接頸動(dòng)脈－動(dòng)脈插管－換能器－記錄儀股靜脈－靜脈插管－給藥裝置整理課件檢查法-動(dòng)物靈敏度檢查自靜脈依次注入上述對照品稀釋液，劑量按動(dòng)物體重每1kg注射組胺0.05ug、0.1ug及0.15ug，重復(fù)2～3次，如0.1ug劑量所致的血壓下降值均不小于2.67kPa，同時(shí)相應(yīng)各劑量所致反響的平均值有差異，可認(rèn)為該動(dòng)物的靈敏度符合規(guī)定。注：組胺濃度為0.5ug/ml，那么給藥量為0.1、0.2、0.3ml/kg整理課件檢查法-供試品檢查取對照品稀釋液按動(dòng)物體重每1kg注射組胺0.1ug的劑量(ds)，供試品溶液按品種項(xiàng)下規(guī)定的劑量(dT),照以下次序注射一組4個(gè)劑量：ds、dT、dT、ds。然后以第一與第三、第二與第四劑量所致的反響分別比較；如dT致的反響值均不大于ds所致反響值的一半，即認(rèn)為供試品的降壓物質(zhì)檢查符合規(guī)定。整理課件檢查法-復(fù)試否那么應(yīng)按上述次序繼續(xù)注射一組4個(gè)劑量，并按相同方法分別比較兩組內(nèi)各對dS、dT劑最所致的反響值。如dT所致的反響值均不大于dS所致的反響值，仍認(rèn)為供試品的降壓物質(zhì)檢查符合規(guī)定；如dT所致的反響值均大于dS所致的反響值，即認(rèn)為供試品的降壓物質(zhì)檢查不符合規(guī)定；否那么應(yīng)另取動(dòng)物復(fù)試。如復(fù)試的結(jié)果仍有dT所致的反響值大于dS所致的反響值，即認(rèn)為供試品的降壓物質(zhì)檢查不符合規(guī)定。整理課件所用動(dòng)物經(jīng)靈敏度檢查如仍符合規(guī)定，可繼續(xù)用于降壓物質(zhì)檢查。整理課件原始記錄組胺對照品溶液及其稀釋液的配制供試品溶液的配制實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的種類及性別、體重〔許可證號(hào)〕麻醉劑的名稱、配制及劑量抗凝劑的名稱及用量記錄血壓儀器名稱及型號(hào)動(dòng)物的根底血壓、動(dòng)物靈敏度的測定供試品溶液及對照品稀釋液的注入體積測量值與結(jié)果判斷完整圖譜整理課件組胺類物質(zhì)檢查法附錄XIXM化學(xué)藥注射劑平安性檢查法應(yīng)用指導(dǎo)原那么化學(xué)藥注射劑平安性檢查包括異常毒性、細(xì)菌內(nèi)毒素〔或熱原〕、降壓物質(zhì)〔或組胺物質(zhì)〕、過敏反響等項(xiàng)。根據(jù)處方、工藝、用法及用量等設(shè)定相應(yīng)的檢查工程并進(jìn)行適用性研究。整理課件4．組胺類物質(zhì)檢查本法系將一定濃度的供試品和組胺對照品依次注入離體豚鼠回腸浴槽內(nèi)，分別觀察出現(xiàn)的收縮反響幅度并加以比較，以判定供試品是否符合規(guī)定的一種方法。不合格供試品說明含有組胺和類組胺物質(zhì)。在臨床上可能引起血壓下降和類似過敏反響等嚴(yán)重的不良反響。檢查方法參照本附錄“附組胺類物質(zhì)檢查法〞整理課件設(shè)定限值前研究在確定限值前，應(yīng)考察供試品對組胺對照品引起的離體豚鼠回腸收縮反響的干擾〔抑制或增強(qiáng)〕，求得最大無收縮干擾濃度。假設(shè)供試品的配方、生產(chǎn)工藝等任何有可能影響試驗(yàn)結(jié)果的條件發(fā)生改變時(shí)，需重新進(jìn)行干擾試驗(yàn)。整理課件干擾試驗(yàn)按組胺類物質(zhì)檢查法，依以下順序準(zhǔn)確注入供試品稀釋液與對照品稀釋液低劑量、對照品稀釋液低劑量、供試品稀釋液與對照品稀釋液高劑量、對照品稀釋液高劑量〔dS+T、dS、dSH+T、dSH〕，重復(fù)一次，如dS+T及dSH+T所致的反響值與dS及dSH所致的反響值根本一致，可認(rèn)為供試品不干擾組胺物質(zhì)檢查；否那么該品種不適合設(shè)立組胺物質(zhì)檢查項(xiàng)，建議設(shè)立降壓物質(zhì)檢查項(xiàng)。整理課件限值確定除特殊要求外，原那么上與降壓物質(zhì)檢查限值一致，以臨床單次用藥劑量的1/5～5倍量和每公斤體重0.1μg組胺劑量計(jì)算注射劑含組胺類物質(zhì)檢查限值，其計(jì)算公式為：限值L=K/M，其中K值為人每公斤體重接受的組胺量〔0.1μg/kg〕，M為降壓物質(zhì)檢查限值〔mg/kg、ml/kg、IU/kg〕。供試品劑量應(yīng)低于最大無收縮干擾劑量。抗腫瘤藥、心血管病藥等急重病癥用藥應(yīng)采用高限。整理課件組胺類物質(zhì)檢查法定義：本法系比較組胺對照品〔S〕與供試品〔T〕引起豚鼠離體回腸收縮的程度，以判定供試品中所含組胺類物質(zhì)的限度是否符合規(guī)定。整理課件對照品溶液的制備精密稱取磷酸組胺對照品適量，按組胺計(jì)算，加水溶解并定量稀釋制成每1ml中含1.0mg的溶液，分裝于適宜的容器內(nèi)，4～8℃貯存，在確保收縮活性符合要求的前提下，可在3個(gè)月內(nèi)使用。整理課件對照品稀釋液的制備試驗(yàn)當(dāng)日，精密量取組胺對照品溶液適量，用氯化鈉注射液按高、低劑量組〔dSH、dS〕配成兩種濃度的稀釋液，高劑量dSH應(yīng)不致使回腸收縮到達(dá)極限，低劑量dS所致反響值約為高劑量的一半，調(diào)節(jié)劑量使可以重復(fù)出現(xiàn)。一般組胺上下劑量的終濃度為10-6～10-8g/ml，注入體積0.2～1.0ml為宜。整理課件供試品溶液的制備按品種項(xiàng)下規(guī)定的限量，照對照品稀釋液低劑量〔dS〕配制成適當(dāng)?shù)臐舛取Ｔ囼?yàn)時(shí)，一般供試品溶液與對照品稀釋液的注入體積應(yīng)相等。整理課件回腸肌營養(yǎng)液的制備A液：試驗(yàn)當(dāng)日，取氯化鈉160.0g、氯化鉀4.0g、氯化鈣〔按無水物計(jì)算〕2.0g、氯化鎂〔按無水物計(jì)算〕1.0g與磷酸氫二鈉〔含12個(gè)結(jié)晶水〕0.10g，加注射用水700ml使溶解，再參加注射用水適量，使成1000ml。B液：取硫酸阿托品0.5mg、碳酸氫鈉1.0g、葡萄糖〔含1個(gè)結(jié)晶水〕0.5g，加適量注射用水使溶解，加A液50.0ml，混合后加注射用水使成1000ml。B液應(yīng)臨用前配制，并在24h內(nèi)應(yīng)用。整理課件檢查法取健康合格的成年豚鼠，雌雄均可，雌者無孕，體重250～350g，禁食24h，迅速處死，將血排凈。立即剖腹取出回腸一段〔選用遠(yuǎn)端腸段，該段最敏感〕，注意防止因牽拉使回腸受損，必要時(shí)仔細(xì)別離腸系膜。剪取2～3cm長，用注射器抽取上述溶液B，小心沖洗出腸段的內(nèi)容物。將腸段下端固定于離體器官恒溫水浴裝置的浴槽底部，上端用線與肌張力換能器相連；浴槽中事先放入一定量的B液〔約10～30ml〕，通入95％O2和5％CO2的混合氣體，維持恒溫〔34～36°C〕，用適當(dāng)方法記錄回腸收縮曲線。如果使用杠桿，其長度應(yīng)能使腸段的收縮放大約20倍。選擇1g的預(yù)負(fù)荷，可根據(jù)其靈敏度加以調(diào)節(jié)?；啬c放入浴槽后，靜置15～30min，方可開始注入藥液。每次注入藥液前，要用B液沖洗浴槽3次〔最好是溢出，而不排空浴槽〕。相鄰兩次給藥的間隔時(shí)間應(yīng)一致〔約2min〕，每次給藥前應(yīng)在前一次反響恢復(fù)穩(wěn)定后進(jìn)行。整理課件取對照品稀釋液和供試品溶液，照以下次序準(zhǔn)確注入浴槽：dS、dT、dT、dS、dSH，如dSH所致的反響值大于dS所致反響值時(shí)判定試驗(yàn)有效。如供試品溶液引起回腸收縮，那么分別計(jì)算dS、dT所致反響的平均值。假設(shè)dT所致反響的均值不大于dS所致反