禽肉胴體菌落總數(shù)的測(cè)定本文件規(guī)定了規(guī)定了禽肉胴體菌落總數(shù)計(jì)數(shù)的方法。本文件適用于適用于禽肉胴體菌落總數(shù)的測(cè)定。2規(guī)范性引用文件本文件沒(méi)有規(guī)范性引用文件。3術(shù)語(yǔ)和定義下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。禽肉胴體Poultrycarcass經(jīng)過(guò)宰前檢驗(yàn)、去內(nèi)臟、清洗、檢驗(yàn)等一系列工序后的整個(gè)禽肉產(chǎn)品和經(jīng)過(guò)分割、修剪等工序后的禽肉分部位產(chǎn)品。3.2菌落總數(shù)Aerobicplatecount禽肉胴體經(jīng)過(guò)處理，在一定條件下（如培養(yǎng)基、培養(yǎng)溫度和培養(yǎng)時(shí)間等）培養(yǎng)后，所得每g樣品中形成的微生物菌落總數(shù)。4設(shè)備和材料4.1滅菌設(shè)備：高壓蒸汽滅菌鍋4.2恒溫培養(yǎng)箱：37°C±1°C4.3冰箱：2°C~5°C4.4恒溫水浴箱：47°C±1°C4.5天平：感量為0.01g4.6均質(zhì)器4.7振蕩器4.8恒溫?fù)u床：37°C±1°C，200r/min±10r/min4.9無(wú)菌吸管：1mL（具0.01mL刻度）、10mL（具0.1mL刻度）或微量移液器無(wú)菌吸頭24.10無(wú)菌錐形瓶：容量100mL、250mL4.11無(wú)菌培養(yǎng)皿：直徑90mm4.12無(wú)菌試管4.13pH計(jì)4.14放大鏡或/和菌落計(jì)數(shù)器5培養(yǎng)基和試劑5.1平板計(jì)數(shù)瓊脂培養(yǎng)基：見(jiàn)附錄A.15.2無(wú)菌生理鹽水：見(jiàn)附錄A.26檢驗(yàn)程序禽胴體菌落總數(shù)的檢驗(yàn)程序詳見(jiàn)圖1。圖1禽胴體菌落總數(shù)的檢驗(yàn)程序7操作步驟7.1樣品勻液的制備7.1.1將整只禽胴體稱(chēng)重，加入到無(wú)菌的取樣袋中，并加入與禽胴體1:1質(zhì)量的無(wú)菌生理鹽水。將無(wú)菌取樣袋置于恒溫?fù)u床中，37°C200r/min振蕩10min，制成1:2的樣品勻液。37.1.2用1mL無(wú)菌吸管或微量移液器吸取1:2樣品勻液1mL，加入盛有9mL滅菌生理鹽水的無(wú)菌試管中，振蕩試管或換用1支無(wú)菌吸管反復(fù)吹打使其混合均勻，制成1:200的樣品勻液。更高稀釋度的樣品勻液均按此方法操作。7.2樣品的接種培養(yǎng)7.2.1根據(jù)對(duì)樣品污染狀況的估計(jì)，選擇3個(gè)適宜稀釋度的樣品勻液，吸取1mL樣品勻液于無(wú)菌平皿內(nèi)，每個(gè)稀釋度做兩個(gè)平皿。同時(shí)，分別吸取1mL空白稀釋液加入兩個(gè)無(wú)菌平皿內(nèi)作空白對(duì)照。7.2.2將15mL~20mL冷卻至46°C的平板計(jì)數(shù)瓊脂培養(yǎng)基（可放置于46°C±1°C恒溫水浴箱中保溫）傾注平皿，并轉(zhuǎn)動(dòng)平皿使其混合均勻。7.2.3待瓊脂凝固后，將平板翻轉(zhuǎn)，37°C±1°C培養(yǎng)48h±2h。7.3菌落計(jì)數(shù)7.3.1可用肉眼觀察，必要時(shí)用放大鏡或菌落計(jì)數(shù)器，記錄稀釋倍數(shù)和相應(yīng)的菌落數(shù)量。菌落計(jì)數(shù)以菌落形成單位（colony-formingunits，CFU）表示。7.3.2選取菌落數(shù)在30CFU~300CFU之間、無(wú)蔓延菌落生長(zhǎng)的平板計(jì)數(shù)菌落總數(shù)。低于30CFU的平板記錄具體菌落數(shù)，大于300CFU的可記錄為多不可計(jì)。每個(gè)稀釋度的菌落數(shù)應(yīng)采用兩個(gè)平板的平均數(shù)。7.3.3其中一個(gè)平板有較大片狀菌落生長(zhǎng)時(shí)，則不宜采用，而應(yīng)以無(wú)片狀菌落生長(zhǎng)的平板作為該稀釋度的菌落數(shù)；若片狀菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均勻，即可計(jì)算半個(gè)平板后乘以2，代表一個(gè)平板菌落數(shù)。7.3.4當(dāng)平板上出現(xiàn)菌落間無(wú)明顯界線(xiàn)的鏈狀生長(zhǎng)時(shí)，則將每條單鏈作為一個(gè)菌落計(jì)數(shù)。8結(jié)果與報(bào)告8.1菌落計(jì)數(shù)的計(jì)算方法8.1.1若只有一個(gè)稀釋度平板上的菌落數(shù)在適宜計(jì)數(shù)范圍內(nèi)，計(jì)算兩個(gè)平板菌落數(shù)的平均值，再將平均值乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)，作為每g樣品中菌落總數(shù)結(jié)果。8.1.2若有兩個(gè)連續(xù)稀釋度的平板菌落數(shù)在適宜計(jì)數(shù)范圍內(nèi)時(shí)，按式（1）計(jì)算：N=ΣC(n1+0.1n2)d..................式中：N—樣品中菌落數(shù)；C—平板（含適宜范圍菌落數(shù)的平板）菌落數(shù)之和；n1—第一稀釋度（低稀釋倍數(shù)）平板個(gè)數(shù)；n2—第二稀釋度（高稀釋倍數(shù)）平板個(gè)數(shù)；d—稀釋因子（第一稀釋度）。4ΣC254+262+32+36上述數(shù)據(jù)按8.2.2數(shù)字修約后，表示為53000或5.3×104。8.1.3若所有稀釋度的平板上菌落數(shù)均大于300CFU，則對(duì)稀釋度最高的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)，其他平板可記錄為多不可計(jì)，結(jié)果按平均菌落數(shù)乘以最高稀釋倍數(shù)計(jì)算。8.1.4若所有稀釋度的平板菌落數(shù)均小于30CFU，則應(yīng)按稀釋度最低的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)計(jì)8.1.5若所有稀釋度（包括液體樣品原液）平板均無(wú)菌落生長(zhǎng)，則以小于1乘以最低稀釋倍數(shù)計(jì)算。8.1.6若所有稀釋度的平板菌落數(shù)均不在30CFU~300CFU之間，其中一部分小于30CFU或大于300CFU時(shí)，則以最接近30CFU或300CFU的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)計(jì)。8.2菌落總數(shù)的報(bào)告8.2.1菌落數(shù)小于100CFU時(shí)，按“四舍五入”原則修約，以整數(shù)報(bào)告。8.2.2菌落數(shù)大于或等于100CFU時(shí)，第3位數(shù)字采用“四舍五入”原則修約后，取前2位數(shù)字，后面用0代替位數(shù)；也可用10的指數(shù)形式來(lái)表示，按“四舍五入”原則修約后，采用兩位有效數(shù)字。8.2.3若所有平板上為蔓延菌落而無(wú)法計(jì)數(shù)，則報(bào)告菌落蔓延。8.2.4若空白對(duì)照上有菌落生長(zhǎng)，則此次檢測(cè)結(jié)果無(wú)效。8.2.5結(jié)果以CFU/g為單位報(bào)告。5（資料性）培養(yǎng)基和試劑A.1平板計(jì)數(shù)瓊脂(platecountagar，PCA)培養(yǎng)基A.1.1.2酵母浸膏2.5gA.1.1.5蒸餾水1000mLA.1.2制法將上述成分加于蒸餾水中，煮沸溶解，調(diào)節(jié)pH至7.0±0.2。分裝