尼古丁對(duì)子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞力學(xué)特征的影響及機(jī)制研究子宮內(nèi)膜異位癥是婦科常見病,累及10-50%的育齡女性,臨床表現(xiàn)為痛經(jīng)、盆腔腫塊、不孕等,嚴(yán)重危及女性的生活質(zhì)量和生育功能。藥物治療效果差,保守性手術(shù)復(fù)發(fā)率高。流行病學(xué)研究發(fā)現(xiàn)吸煙女性子宮內(nèi)膜異位癥發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)可以下降50%,具體原因不清,闡明其機(jī)制有助于進(jìn)一步認(rèn)識(shí)該疾病的病理生理機(jī)制,為預(yù)防和治療提供新思路。為了在體內(nèi)驗(yàn)證尼古丁具有降低子宮內(nèi)膜異位癥發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的作用,本文第一部分采用轉(zhuǎn)RFP小鼠子宮作為供體移植到去勢(shì)裸小鼠腹腔腹膜上,設(shè)立對(duì)照組(C)、雌激素組(E)、雌激素加尼古丁組(E+N)及雌激素加孕激素組(E+P),分別給予苯甲酸雌二醇、尼古丁及己酸羥孕酮后測(cè)腹腔病灶的熒光強(qiáng)度及面積大小,同時(shí)用放射免疫法檢查血清雌二醇濃度。結(jié)果E+N組總病灶熒光強(qiáng)度低于E組,差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),但E+N組血清雌二醇水平未發(fā)現(xiàn)低于E組。表明尼古丁在體內(nèi)試驗(yàn)具有抑制子宮內(nèi)膜異位癥樣病灶的生長(zhǎng)作用且該模型尼古丁組血E2濃度未見降低。為了證實(shí)尼古丁是否通過雌激素受體通路實(shí)現(xiàn)降低子宮內(nèi)膜異位癥發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的作用,本文第二部分在體外實(shí)驗(yàn)研究了尼古丁處理后對(duì)ERE報(bào)告基因表達(dá)影響的影響,并用正常(NESC)和內(nèi)異癥子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞(在位EuESC、異位EcESC)原代培養(yǎng)給予尼古丁和雌激素處理后對(duì)其生長(zhǎng)、雌激素調(diào)控基因CCND1、MYC、PGR以及雌激素受體ESR1、ESR2及GPER表達(dá)水平的影響。未發(fā)現(xiàn)尼古丁具有抑制ERE報(bào)告基因表達(dá)水平、細(xì)胞生長(zhǎng)以及雌激素調(diào)控基因和雌激素受體表達(dá)水平的作用,尼古丁也沒有明顯抑制芳香化酶的表達(dá)水平,尼古丁可能不是通過抑制雌激素受體通路而降低子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)病率。為了證實(shí)尼古丁是否通過對(duì)子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞運(yùn)動(dòng)和遷移能力的影響表現(xiàn)降低子宮內(nèi)膜異位癥發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的作用,本文第三部分在體外實(shí)驗(yàn)用凝膠收縮實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞黏附實(shí)驗(yàn)以及活細(xì)胞運(yùn)動(dòng)實(shí)驗(yàn)研究了尼古丁和雌激素對(duì)NESC、EuESC和EcESC運(yùn)動(dòng)和遷移能力的影響。發(fā)現(xiàn)EuESC凝膠收縮能力強(qiáng)于NESC,EuESC及EcESC細(xì)胞運(yùn)動(dòng)能力強(qiáng)于NESC,尼古丁可以抑制雌激素促NESC凝膠收縮作用及細(xì)胞黏附作用而在EuESC中不明顯,在細(xì)胞運(yùn)動(dòng)實(shí)驗(yàn)中尼古丁對(duì)三種細(xì)胞的影響都不明顯。尼古丁對(duì)NESC遷移的抑制及黏附的促進(jìn)可能抑制了ESC的轉(zhuǎn)移和侵襲從而影響了子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)生和發(fā)展。為了研究尼古丁抑制ESC運(yùn)動(dòng)和黏附的機(jī)制,本文第四部分在體外實(shí)驗(yàn)用pull-down方法和免疫熒光方法檢測(cè)了尼古丁和雌激素對(duì)NESC、EuESC和EcESC的RhoA活性的影響和對(duì)黏著斑的影響。結(jié)果表明EuESC的RhoA活性明顯高于NESC,尼古丁可以抑制EuESC的RhoA活性而加雌激素后這種抑制作用不明顯。NESC、EuESC及EcES三者的張力纖維和黏著斑形成逐步升高,尼古丁處理對(duì)張力纖維影響不明顯而對(duì)黏著斑形成無(wú)論雌激素存在與否都有抑制作用。結(jié)論：NESC、EuESC和EcESC三種細(xì)胞運(yùn)動(dòng)能力逐漸升高,而尼古丁通過抑制RhoA的活性影響細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)能力而降低子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。綜上所述,尼古丁通過抑制RhoA的活性影響子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞的運(yùn)動(dòng),抑制間質(zhì)細(xì)胞的遷移,促進(jìn)黏附,可能是尼古丁降低子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的重要原因之一。本研究未能發(fā)現(xiàn)尼古丁對(duì)雌激素經(jīng)典通路有抑制作用。NESC、