儀器分析

生物工程學院項目四——分光光度儀的分析使用——檢測飲料中苯甲酸鈉分光光度法的原理

分光光度計的結構和使用

分光光度法測定苯甲酸鈉含量分光光度計的維護和保養(yǎng)

4123教學目標能力目標知識目標素質目標

（1）會待測樣品預處理方法；（2）掌握分光光度計的操作步驟；（3）會用分光光度計測定樣品；（4）掌握日常保養(yǎng)和維護方法。

（1）了解分光光度法的原理，理解郎伯比爾定律各符號的含義；（2）理解偏離郎伯比爾定律的原因；（4）掌握分光光度法定量分析的方法。

（1）培養(yǎng)學生良好的職業(yè)道德；（2）培養(yǎng)學生嚴謹?shù)墓ぷ髯黠L和安全意識；

（3）培養(yǎng)學生精益求精、實事求是、一絲不茍的職業(yè)素質；

（4）團隊協(xié)作能力?！鞍咐苯虒W法?！靶袆訉颉苯虒W法?！把菔拘浴苯虒W法?！耙龑?自主學習”教學法。24教學方法13重點難點：（1）正確操作分光光度計（2）正確對樣品進行測定（3）準確書寫數(shù)據(jù)分析報告重點難點分光光度法測定苯甲酸鈉含量

任務3：導入3儀器操作與應用苯甲酸鈉是一種常用的防腐劑，適量添加能夠延長食品的保質期。但過量使用會危及人的身體健康。

學生利用已有的知識討論完成任務討論思考1教師講解示范1溶液的配制準確吸取1mg/mL的苯甲酸標準溶液10.00mL，在100mL容量瓶中定容（此溶液的濃度為100.0ug/mL）。再分別準確移取0、2.00、4.00、6.00、8.00、10.00mL上述溶液，在100mL容量瓶中定容（濃度分別為0、2.00、4.00、6.00、8.00、10.00ug/mL）。2吸收曲線的繪制選取6.00ug/mL的待測溶液，以蒸餾水為參比，于波長200～300nm范圍內測定吸光度，作吸收曲線，從曲線上查得最大吸收波長（227nm附近）。3標準曲線的繪制上述一系列不同濃度的標準溶液（0～10.00ug/mL），于最大吸收波長處分別測出其吸光度。然后以濃度為橫坐標，以相應的吸光度為縱坐標繪制出標準曲線。4樣品測定準確移取10.00mL苯甲酸未知液，在100mL容量瓶中定容，于最大吸收波長處測定吸光度。從標準曲線上查得未知液的濃度。

學生分組練習，配制標準溶液；配制標準系列；測定最大吸收，并用標準曲線法進行苯甲酸含量的測定，教師巡回指導。同時對每個學生進行過程考核和結果考核。

學生練習任務33儀器操作與應用歸納總結教師引導學生總結主要知識點和操作關鍵。43儀器操作與應用分光光度計的維護和保養(yǎng)如何延長儀器設備的使用周期？

任務四

教師講解演示1.堅持標準溶液現(xiàn)用現(xiàn)配，不使用過期標準液。使用儀器之前，一般要校正儀器，看看空白時透光率是否是100%。2.比色皿應該保持清潔，干燥。如有污物，可用稀鹽酸清洗后，再用1：1的酒精與乙醚清洗涼干。禁止用硬物碰或擦透明表面?；蛘呓ㄗh使用10%的鹽酸溶液浸泡，然后用無水乙醇沖洗2~3次。比色皿具有方向性，使用時要注意，仔細觀察比色皿上方應該有一個箭頭標志的，代表入射光方向。注入和倒出溶液時，應該選擇非透光面。最好使用配對的比色皿。

4設備維護和保養(yǎng)3.防止儀器振動，影響光學系統(tǒng)。4.在開機狀態(tài)，不測量時，應該打開樣品池門，否則，影響光電傳感器壽命。5.樣品集中測量，避免開機次數(shù)，可延長光源壽命。

5.儀器工作穩(wěn)定性差，漂移大時，應該考慮更換光源或光電元件。

6.一般分光儀主要有光源部分、光路部分、檢測器三的部分，光路有的情況是穩(wěn)壓電源問題，鎢燈問題及鎢燈位置與光路不一致等問題。光路部分主要有比色皿不干凈，燈光與比色皿位置不合適（在正常情況下，比色皿位置放一張白紙，可以清楚看到光斑形狀呈顯矩形，屬于正常情況。對于檢測器大多數(shù)是正常的，但是光敏管或者光電管有時侯也會出現(xiàn)問題。7.若峰出現(xiàn)很多“毛刺”，可能是掃描速度過快，濃度過高或者狹縫過小；

8.紫外分光光度計用來測紫外光時,石英皿用來調零時不穩(wěn)定,是由那些原因？

首先確定是否用成玻璃比色皿,判斷方法在紫外區(qū)任一波長下用空氣調零測比色皿的吸光度如果超過1ABS則比色皿用錯.再次用空氣調零看零點是否穩(wěn)定,如不穩(wěn)則是儀器問題,如空氣穩(wěn)定而放入石英皿后不穩(wěn)定,則檢查是否空白溶液吸光度太高,是否空白溶液藥品過期,或者空白溶液透明范圍不適合此波長測量比如甲醇在210NM以下吸光度很大無法調零。

9.儀器狹縫寬度的選擇

狹縫的寬度會直接影響到測定的靈敏度和校準曲線的線性范圍。狹縫寬度過大時，入射光的單色光降低，校準曲線偏離比耳定律，靈敏度降低；狹縫寬度過窄時，光強變弱，勢必要提高儀器的增益，隨之而來的是儀器噪聲增大，于測量不利。選擇狹縫寬度的方法是：測量吸光度隨狹縫寬度的變化。狹縫的寬度在一個范圍內，吸光度是不變的，當狹縫寬度大到某一程度時，吸光度開始減小。因此，在不減小吸光度時的最大狹縫寬度，即是所欲選取的合適的狹縫寬度。

注意事項：(1).儀器調零后跳動大的話那可能是儀器有問題.(2).調零穩(wěn)定的話,看樣品濃度是否過高,最好控制在0-1個吸光度之間.(3).濃度合適的話,看是否比色皿沒擦干凈,一般可用蒸餾水沖洗一下,擦干后用鏡頭紙擦干凈.(4).檢查樣品是否穩(wěn)定,如果零點不變而放上樣品變化,那么是樣品有變化,檢查樣品是否有問題.儀器維護

（1）.儀器工作電源一般為220V,允許10%的電壓波動.（2）.為了延長光源使用壽命,在不使時不要開光源燈.（3）.單色器是儀器的核心部分,裝在密封盒內不能拆開,為防止色散元件受潮發(fā)霉,必須經(jīng)常更換蛋色器盒干燥劑.(4).必須正確使用吸收池,保護吸收池光學面.(5).光電轉換元件不能長時間暴