家蠶30K蛋白基因的克隆表達(dá)及其抗凋亡功能研究的開題報告一、選題背景蛋白基因是控制細(xì)胞生長、分化和代謝的基本基因，其表達(dá)及調(diào)控直接影響蠶絲的質(zhì)量和收益。在過去的研究中，家蠶30K蛋白常被認(rèn)為與家蠶卵巢發(fā)育和成熟、絲腺分泌等過程密切相關(guān)。近年來，研究發(fā)現(xiàn)家蠶30K蛋白存在于蠶絲中，且有抗凋亡的作用。因此，本研究旨在克隆家蠶30K蛋白基因，對其進(jìn)行表達(dá)和純化，并進(jìn)一步探究其在蠶絲生產(chǎn)中的應(yīng)用潛力。二、研究目的1.克隆家蠶30K蛋白基因，建立重組表達(dá)系統(tǒng)；2.進(jìn)行蛋白表達(dá)和純化，并進(jìn)行質(zhì)量控制；3.驗證家蠶30K蛋白的抗凋亡功能；4.探究家蠶30K蛋白在蠶絲生產(chǎn)中的應(yīng)用潛力。三、研究內(nèi)容和方法1.克隆家蠶30K蛋白基因本研究將采用RT-PCR技術(shù)，從家蠶卵巢中提取總RNA，合成cDNA，然后利用基因特異性引物擴(kuò)增30K蛋白基因的全長；接著將PCR產(chǎn)物克隆到表達(dá)載體中，并經(jīng)測序驗證。通過序列分析可得到成功克隆出的重組表達(dá)系統(tǒng)。2.進(jìn)行蛋白表達(dá)和純化構(gòu)建的重組表達(dá)系統(tǒng)將轉(zhuǎn)入大腸桿菌BL21（DE3）中，然后經(jīng)IPTG誘導(dǎo)表達(dá)，考慮到30K蛋白的胞內(nèi)表達(dá)，在感染菌落后，將菌落添加到含有0.5MNaCl和1%TritonX-100的LB培養(yǎng)基中，進(jìn)行裂解，蛋白表達(dá)量和純化程度的質(zhì)量控制采用SDS和WesternBlot方法，確定最佳純化條件。一定程度改善蛋白表達(dá)。3.驗證抗凋亡能力本研究將以30K蛋白轉(zhuǎn)染人體細(xì)胞，通過MTT、Ann×V/PI、流式細(xì)胞術(shù)等方法，觀察對人體細(xì)胞凋亡的影響，探究是否具有一定的抗凋亡能力。4.探究在蠶絲生產(chǎn)中的應(yīng)用對30K蛋白的抗UV功能進(jìn)行研究，將其加入蠶絲原液中，并進(jìn)一步考察其在抗UV、增強(qiáng)紫外線防護(hù)等方面的應(yīng)用潛力；通過實驗控制，驗證插入30K蛋白的小蠶熟絲的質(zhì)量及生物活性水平的提高。四、研究意義1.提高了家蠶30K蛋白的利用價值，為蠶絲生產(chǎn)提供新的材料和手段；2.為遲滯或緩慢增長人體細(xì)胞的修復(fù)提供可能的治療策略；3.為家蠶30K蛋白的進(jìn)一步開發(fā)提供了實驗依據(jù)。五、研究進(jìn)度計劃第一年：家蠶30K蛋白基因的克隆及表達(dá)；第二年：30K蛋白的純化和性質(zhì)分析；第三年：測定30K蛋白對人類細(xì)胞凋亡的抑制作用以及在蠶絲生產(chǎn)中的應(yīng)用潛力。六、參考文獻(xiàn)[1]LeiHui,DiJia,WuXiuqing.30KProteinColocalizeswithProteinKinasesinthePlasmaMembranetoRegulateActivationoftheSignalingPathwayinSilkwormBombyxmori.[J]PloSONE,2012.[2]H.LiuandM.Xu.Anewfunctionof30Kprotein:AconstituentofribosomalsubunitinhibitsribosomalproteinorrRNAsynthesis[J].The3rdInternati