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第第頁中瑞祥紫外可見分光光度注意事項操作方法儀器構(gòu)成操作方法分光光度計已經(jīng)成為現(xiàn)代分子生物試驗室常規(guī)儀器。常用于核酸,蛋白定量以及細(xì)菌生長濃度的定量。儀器重要由光源、單色器、樣品室、檢測器、信號處理器和顯示與存儲系統(tǒng)構(gòu)成。原理分光光度計采用一個可以產(chǎn)生多個波長的光源,通過系列分光裝置,從而產(chǎn)生特定波長的光源,光線透過測試的樣品后,部分光線被汲取,計算樣品的吸光值,從而轉(zhuǎn)化成樣品的濃度。樣品的吸光值與樣品的濃度成正比。單色光輻射穿過被測物質(zhì)溶液時,被該物質(zhì)汲取的量與該物質(zhì)的濃度和液層的厚度(光路長度)成正比,其關(guān)系如下式:A=lg(I/I0)=lgT=kLc式中:A為吸光度;I0為入射的單色光強(qiáng)度;I為透射的單色光強(qiáng)度;T為物質(zhì)的透射率;k為摩爾汲取系數(shù);L為被分析物質(zhì)的光程,即比色皿的邊長;c為物質(zhì)的濃度;物質(zhì)對光的選擇性汲取波長,以及相應(yīng)的汲取系數(shù)是該物質(zhì)的物理常數(shù)。當(dāng)已知某純物質(zhì)在肯定條件下的汲取系數(shù)后可用同樣條件將該供試品配成溶液,測定其汲取度,即可由上式計算出供試品中該物質(zhì)的含量。在可見光區(qū),除某些物質(zhì)對光有汲取外,很多物質(zhì)自身并沒有汲取但可在肯定條件下加入顯色試劑或經(jīng)過處理使其顯色后再測定,故又稱比色分析。由于顯色時影響呈色深淺的因素較多,且常使用單色光純度較差的儀器,故測定時應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)品或?qū)φ掌吠瑫r操作操作方法1.接通電源,打開儀器開關(guān),掀開樣品室暗箱蓋,預(yù)熱10分鐘。2.將靈敏度開關(guān)調(diào)至“1”檔(若零點調(diào)整器調(diào)不到“0”時,需選用較高檔。)3.依據(jù)所需波長轉(zhuǎn)動波長選擇鈕。4.將空白液及測定液分別倒入比色杯3/4處,用擦鏡紙擦清外壁,放入樣品室內(nèi),使空白管對準(zhǔn)光路。5.在暗箱蓋開啟狀態(tài)下調(diào)整零點調(diào)整器,使讀數(shù)盤指針指向t=0處。6.蓋上暗箱蓋,調(diào)整“100”調(diào)整器,使空白管的t=100,指針穩(wěn)定后漸漸拉出樣品滑竿,分別讀出測定管的光密度值,并記錄。7.比色完畢,關(guān)上電源,取出比色皿洗凈,樣品室用軟布或軟紙擦凈注意事項1.該儀器應(yīng)放在干燥的房間內(nèi),使用時放置在堅固平穩(wěn)的工作臺上,室內(nèi)照明不宜太強(qiáng)。熱天時不能用電扇直接向儀器吹風(fēng),防止電燈泡燈絲發(fā)亮不穩(wěn)定。2.使用本儀器前,使用者應(yīng)當(dāng)首先了解本儀器的結(jié)構(gòu)和工作原理,以及各個掌控旋鈕之功能。在未按通電源之前,應(yīng)當(dāng)對儀器的安全性能進(jìn)行檢查,電源接線應(yīng)堅固,通電也要良好,各個調(diào)整旋鈕的起始位置應(yīng)當(dāng)正確,然后再按通電源開關(guān)
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