ICS00.000CCSX?團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)T/XXXX-XXXX人源間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體HumanmesenchymaIexosomes（征求意見稿）XXXX-XX-XX發(fā)布 XXXX-XX-XX實(shí)施中國食品藥品企業(yè)質(zhì)量安全促進(jìn)會(huì) 發(fā)布目次TOC\o"1-5"\h\z前言 III1范圍 12規(guī)范性引用文件 13術(shù)語和定義 1干細(xì)胞 1人源間充質(zhì)干細(xì)胞 13外泌體 14外泌體可溯源性資料信息分類標(biāo)識(shí)要求縮略語 15人源間充質(zhì)干細(xì)胞要求 26技術(shù)要求 21外泌體制備 26.2關(guān)鍵質(zhì)量屬性 27檢驗(yàn)方法 21形態(tài) 2數(shù)量、粒徑、濃度 2標(biāo)志蛋白 3蛋白含量 35微生物 38檢驗(yàn)規(guī)則 31總原則 42放行檢驗(yàn) 48.3留樣 48.4復(fù)合檢驗(yàn) 48.fi判定規(guī)則 49包裝、儲(chǔ)存和運(yùn)輸 49.1包裝 49.2標(biāo)簽 49.3存儲(chǔ) 49.4運(yùn)輸 410廢棄物處理 4附錄A（資料性）外泌體質(zhì)量檢驗(yàn)報(bào)告單 5參考文獻(xiàn) 6本文件按照GB/T1.1-2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利，本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別專利的責(zé)任。本文件由提出。本文件由歸口。本文件起草單位：本文件主要起草人：本文件為首次發(fā)布。人源間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體1范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了人源間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體的鑒定方法、檢驗(yàn)要求、檢驗(yàn)規(guī)則、標(biāo)簽、包裝、儲(chǔ)存、運(yùn)輸和廢棄物處理要求。本標(biāo)準(zhǔn)適用于人源間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體的制備與檢驗(yàn)。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法WS213丙型肝炎診斷WS273梅毒診斷WS293艾滋病和艾滋病病毒感染診斷標(biāo)準(zhǔn)WS299乙型病毒性肝炎診斷標(biāo)準(zhǔn)中華人民共和國藥典（2020年版）全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程（第4版）《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》T/CSCB0001-2020干細(xì)胞通用要求T/CSCB0003-2020人間充質(zhì)干細(xì)胞3術(shù)語和定義3.1干細(xì)胞stemceII干細(xì)胞是一類具有不同分化潛能，并在非分化狀態(tài)下自我更新的細(xì)胞。3.2人源間充質(zhì)干細(xì)胞humanmesenchymaIstemcelI一類存在于多種人體組織（如骨髓、臍帶血和臍帶組織、胎盤組織、脂肪組織等），具有多向分化潛力，非造血干細(xì)胞的成體干細(xì)胞。這類干細(xì)胞具有向多種間充質(zhì)系列細(xì)胞（如成骨、成軟骨及成脂肪細(xì)胞等）或非間充質(zhì)系列細(xì)胞分化的潛能，并具有獨(dú)特的細(xì)胞因子分泌功能。3.3外泌體exosome由活細(xì)胞經(jīng)過“內(nèi)吞、融合、釋放”的一類具有磷脂雙分子層，直徑在30-15Orlnl之間的細(xì)胞外囊泡。注：外泌體攜帶多種蛋白質(zhì)、mRNA、IniRNA和脂質(zhì)類物質(zhì)等，廣泛參與細(xì)胞間物質(zhì)運(yùn)輸與信息傳遞，調(diào)控生理和病理過程。4外泌體可溯源性資料信息分類標(biāo)識(shí)要求縮略語下列縮略語適用于本文件。IIBV——乙型肝炎病毒（HepatitisBVirus）HCMV 人巨細(xì)胞病毒（HumanCytomegaIovirus）HCV 丙型肝炎病毒(HepatitisCVirus)HEBV 人類皰疹病毒(HumanEpstein-BarrVirus)HIV 人類免疫缺陷病毒(HumanImmunodeficiencyVirus)HTLV 人類嗜T細(xì)胞病毒(HumanT-IymphotropicVirus)TP 梅毒螺旋體(TrePOnemaPallidum)GMP 良好生產(chǎn)規(guī)范(GOOdManufacturingPracticeofMedicalProducts)5人源間充質(zhì)干細(xì)胞要求細(xì)胞組織來源應(yīng)通過醫(yī)療機(jī)構(gòu)或區(qū)域倫理委員會(huì)審批，且供者簽署知情同意(應(yīng)用及研究)。應(yīng)建立細(xì)胞采集的供者評(píng)估和篩選標(biāo)準(zhǔn)、采集方法、運(yùn)輸標(biāo)準(zhǔn)和交接標(biāo)準(zhǔn)，保證供者和細(xì)胞的安全。需提供干細(xì)胞的獲取方式和途徑以及相關(guān)的臨床資料，包括供者的一般信息、既往病史、家族史等。既往史和家族史要對(duì)遺傳病(單基因和多基因疾病,包括心血管疾病和腫瘤等)相關(guān)信息進(jìn)行詳細(xì)采集。供體應(yīng)篩查確認(rèn)無HIV、HBV、HCV、HTLV、EBV、HCMv和TP感染。應(yīng)建立細(xì)胞培養(yǎng)的工藝標(biāo)準(zhǔn)、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、儲(chǔ)存標(biāo)準(zhǔn)和檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)，保證制備外泌體原材料的質(zhì)量可控及安全性。使用的間充質(zhì)干細(xì)胞和培養(yǎng)過程中的輔料應(yīng)符合《干細(xì)胞制劑質(zhì)量控制及臨床前研究指導(dǎo)原則(試行)》中的要求。6技術(shù)要求外泌體制備外泌體的制備應(yīng)符合《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》中的要求。關(guān)鍵質(zhì)量屬性形態(tài)透射電鏡下多呈杯狀圓形或類圓形的膜性小囊泡，可見囊泡的雙膜性結(jié)構(gòu)，中央為低電子密度成分分布較集中且邊界清晰。2.2粒徑應(yīng)分布在30T50nm范圍內(nèi)，且在該范圍內(nèi)存在粒徑峰值。2.3標(biāo)志蛋白需同時(shí)滿足以下條件。CD9、CD63以及CD81任意兩個(gè)表達(dá)陽性；Alix.TSgloI任意一個(gè)表達(dá)陽性;CaIneXin、histone3以及GMl30任意兩個(gè)表達(dá)陰性。2.4微生物真菌、細(xì)菌、支原體、HIV、HBV、HCV、HTLV、EBV、HCMV、TP、外源病毒因子、內(nèi)毒素為陰性。2.5純度外泌體顆粒數(shù)與蛋白量比值不低于IXl(TIlparticles/mgo7檢驗(yàn)方法1形態(tài)按照透射電鏡觀察法。數(shù)量、粒徑、濃度按照納米流式檢測(cè)法、納米顆粒跟蹤分析儀或納米庫爾特粒度儀分析。標(biāo)志蛋白按照《中華人民共和國藥典》通則“免疫印跡法”檢測(cè)。蛋白含量按照蛋白質(zhì)定量試劑盒(BCA)檢測(cè)。生物7.5.1總原則檢驗(yàn)方法優(yōu)先選擇現(xiàn)行版《中華人民共和國藥典》的方法，若考慮成本、生產(chǎn)量、快速檢測(cè)等需求，可以采用非藥典規(guī)定的檢驗(yàn)方法(即替代方法)，但應(yīng)進(jìn)行替代方法的驗(yàn)證，確認(rèn)其應(yīng)用效果優(yōu)于或等同于藥典的方法。7.5.2真菌按照《中華人民共和國藥典》通則“1101無菌檢查法''檢測(cè)。7.5.3細(xì)菌按照《中華人民共和國藥典》通則“1101無菌檢查法”檢測(cè)。7.5.4支原體按照《中華人民共和國藥典》通則“3301無菌檢查法”檢測(cè)。7.5.5HIV按照《艾滋病和艾滋病病毒感染診斷》(WS293-2019)核酸法檢驗(yàn)。7.5.6HBV按照《全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》核酸法檢驗(yàn)。7.5.7HCV按照《丙型病毒性肝炎診斷標(biāo)準(zhǔn)》(WS213-2008)核酸法檢驗(yàn)。7.5.8HTLV按照《全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》核酸法檢驗(yàn)。7.5.9EBV按照《全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》核酸法檢驗(yàn)。7.5.10HCMV按照《全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》核酸法檢驗(yàn)。7.5.11TP按照《梅毒診斷標(biāo)準(zhǔn)》(WS273-2007)核酸法檢驗(yàn)。7.5.12外源病毒因子按照《中華人民共和國藥典》通則“3302外源病毒因子檢查法”檢測(cè)。7.5.13內(nèi)毒素按照《中華人民共和國藥典》通則“1143細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法”檢測(cè)。8檢驗(yàn)規(guī)則8.1總原則在一個(gè)制備周期中，同一來源、同i批次、同一方法、同一生產(chǎn)線制備出來的產(chǎn)品為一批。8.2放行檢驗(yàn)8.2.1每一批產(chǎn)品中隨機(jī)抽取一定數(shù)量最小包裝單元進(jìn)行檢驗(yàn)。取樣量一般應(yīng)為檢驗(yàn)需求量的2倍。抽樣原則根據(jù)實(shí)際情況可參考《藥品抽樣原則及程序》（國藥監(jiān)藥管（2019）34號(hào)）制定。8.2.2放行檢驗(yàn)項(xiàng)目應(yīng)包括6.3關(guān)鍵質(zhì)量屬性規(guī)定的所有項(xiàng)目。8.2.3每一批制劑均應(yīng)進(jìn)行放行檢驗(yàn)，并附檢驗(yàn)報(bào)告。B.3留樣8.3.1每一批外泌體必須留樣，在無菌條件下留取適量外泌體進(jìn)行留樣。留樣量一般至少應(yīng)當(dāng)能夠確保按照相應(yīng)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)滿足2次全檢，并至少保留一件最小包裝的成品。8.3.2樣本至少保存到產(chǎn)品有效期后一年。3.3留樣的包裝形式應(yīng)當(dāng)與放行包裝形式一致。8.4復(fù)合檢驗(yàn)根據(jù)需要，應(yīng)有專業(yè)檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)/實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行復(fù)核檢驗(yàn)。85判定規(guī)則放行檢驗(yàn)項(xiàng)目全部符合6.3關(guān)鍵質(zhì)量屬性規(guī)定，即判為合格產(chǎn)品；有1項(xiàng)及以上不符合的，則被判為不合格產(chǎn)品。9包裝、儲(chǔ)存和運(yùn)輸1包裝直接與產(chǎn)品接觸的包裝材料，應(yīng)選擇低吸附、對(duì)外泌體關(guān)鍵質(zhì)量屬性無影響的材料和容器。接與產(chǎn)品接觸的包裝材料應(yīng)滿足無菌、無熱原要求。包裝內(nèi)應(yīng)附外泌體使用說明，最小包裝上應(yīng)附標(biāo)簽。9.2標(biāo)簽標(biāo)簽應(yīng)包括以下內(nèi)容：a.制劑名稱；b.外泌體數(shù)量；c.制劑體積；d.生產(chǎn)日期（年、月、日、時(shí)、分）；e.生產(chǎn)批號(hào)；f.儲(chǔ)存條件；9.3存儲(chǔ)應(yīng)在低于-80C環(huán)境下儲(chǔ)存，應(yīng)避免反復(fù)凍融或溫度劇烈波動(dòng)。94運(yùn)輸凍存的外泌體應(yīng)在干冰環(huán)境下運(yùn)輸，非凍存的外泌體應(yīng)在2~8℃條件下運(yùn)輸。10廢棄物處理對(duì)于制備、檢驗(yàn)及研究過程中不合格的外泌體、剩余廢棄間充質(zhì)干細(xì)胞或捐贈(zèng)組織（如供者脂肪、臍帶等），應(yīng)符合國家和地方性法規(guī)的要求，并應(yīng)交由當(dāng)?shù)丨h(huán)保部門資質(zhì)認(rèn)定的單位進(jìn)行最終處置。應(yīng)建立廢棄間充質(zhì)干細(xì)胞及外泌體管理文檔，嚴(yán)格執(zhí)行管理規(guī)范并詳細(xì)記錄。

附錄A（資料性）外泌體質(zhì)量檢驗(yàn)報(bào)告單表格編號(hào):申請(qǐng)單號(hào)制備時(shí)間申請(qǐng)人制劑批號(hào)體積外泌體數(shù)量樣本類型樣本編號(hào)樣本代次序號(hào)檢驗(yàn)項(xiàng)目標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定/參考值檢驗(yàn)結(jié)果結(jié)果判定123456檢驗(yàn)結(jié)論主檢人審核人批準(zhǔn)人檢驗(yàn)日期審核日期批準(zhǔn)日期注：本報(bào)告經(jīng)涂改、增刪或未加蓋本中心檢驗(yàn)報(bào)告專用章的復(fù)印件均無效參考文獻(xiàn)[1]原國家衛(wèi)生計(jì)生委，原食品藥品監(jiān)督總局，干細(xì)胞制劑質(zhì)量控制及臨床前研究指導(dǎo)原則(試行)，2015.[2]Minimalinformat