溢油對(duì)海洋生物影響評(píng)估技術(shù)指南中華人民共和國自然資源部發(fā)布I本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T1.1—2009給出的規(guī)則起草。本標(biāo)準(zhǔn)由中華人民共和國自然資源部提出。歸口。本標(biāo)準(zhǔn)由全國海洋標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)海洋環(huán)境保護(hù)分技術(shù)委員會(huì)(SAC/TC283/SC1)本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：國家海洋環(huán)境監(jiān)測中心。歸口。1溢油對(duì)海洋生物影響評(píng)估技術(shù)指南本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了溢油對(duì)海洋生物影響的評(píng)估步驟和評(píng)估方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于石油及其制品對(duì)海洋生物影響的評(píng)估。2規(guī)范性引用文件下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。GB17378.4—2007海洋監(jiān)測規(guī)范第4部分：海水分析GB/T21247—2007海面溢油鑒別系統(tǒng)規(guī)范GB/T29617—2013數(shù)字密度計(jì)測試液體密度、相對(duì)密度和API比重的試驗(yàn)方法GB/T34546.2—2017海洋溢油生態(tài)損害評(píng)估技術(shù)導(dǎo)則第2部分：海洋溢油3縮略語下列縮略語適用于本文件。MR:溢油對(duì)海洋生物物理和機(jī)械損害等級(jí)賦分(mechanicalinjuryrankingscore)OBR:溢油對(duì)海洋生物影響指數(shù)(oilbiologicaleffectranking)PR:溢油對(duì)海洋生物長期潛在影響等級(jí)賦分(persisentrankingscore)TR:溢油對(duì)海洋生物急性毒性等級(jí)賦分(toxicityrankingscore)4資料收集溢油事故發(fā)生后，按照GB/T34546.2—2017中6.1的相關(guān)規(guī)定收集海域功能區(qū)劃類型和經(jīng)濟(jì)生物養(yǎng)殖情況等信息。5樣品采集、保存和運(yùn)輸采用棕色玻璃瓶或鐵質(zhì)油桶現(xiàn)場采集溢油事故油品和分散劑，樣品量不應(yīng)少于5L或5kg。樣品采集后避光冷藏保存，并于1d內(nèi)運(yùn)至實(shí)驗(yàn)室。樣品采集、保存和運(yùn)輸按照GB/T21247—2007中第5章的規(guī)定執(zhí)行。6毒性測試6.1受試生物選擇6.1.1選擇原則毒性測試中受試生物的選擇應(yīng)遵循以下原則：2a)要充分考慮溢油事發(fā)海域的物種多樣性，受試生物要盡可能涵蓋魚類、甲殼類、藻類和軟體類；b)受試生物能反映事發(fā)海域的海洋生物區(qū)系特征，以我國海洋生態(tài)系統(tǒng)中的代表性生物為優(yōu)選對(duì)象；c)事發(fā)海域具有重要經(jīng)濟(jì)價(jià)值的物種應(yīng)優(yōu)先考慮；d)當(dāng)受試生物不易獲得時(shí)，可采用國際組織或科學(xué)界推薦的海洋測試物種作為補(bǔ)充(參見附錄e)選取受試生物的早期發(fā)育階段(魚類/受精卵、甲殼類和軟體類/幼蟲或幼體)進(jìn)行毒性測試。6.1.2基本要求毒性測試中受試生物選擇的基本要求見表1。表1毒性測試中受試生物選擇的基本要求甲殼類感區(qū)≥1種≥1種≥1種≥1種物種d≥1種≥1種≥1種物種感區(qū)≥1種和軟體類中的任一種注：若溢油事發(fā)海域及鄰近海域涉及多種功能區(qū)類型，則按環(huán)境目標(biāo)要求最高的確定。b主要包括海濱風(fēng)景旅游區(qū)、人體直接接觸海水的海上運(yùn)動(dòng)或娛樂區(qū)、與人類食用主要包括一般工業(yè)用水區(qū)、港口水域等。6.2溢油油品水溶性組分溶液的制備與分析6.2.1實(shí)驗(yàn)材料應(yīng)取事發(fā)點(diǎn)鄰近區(qū)域未受溢油污染的海水，并用0.45μm玻璃纖維濾膜過濾。若無法獲取，取海鹽溶于去離子水或純凈水中，并調(diào)節(jié)鹽度與事發(fā)海域一致。6.2.1.2儀器與容器所需儀器與容器主要包括：a)平底龍頭瓶或下口瓶(玻璃或聚四氟乙烯材質(zhì));b)磁力攪拌器；3油品水溶性組分制備步驟如下：a)容器經(jīng)清洗干凈后，將稀釋水置于容器中；b)取適量原油或油樣，采用重量法配制，每1L稀釋水中加入油品25g,液面與瓶口間的空間應(yīng)為總?cè)芤后w積的(20%～30%);c)混合溶液置于磁力攪拌器下攪拌，攪拌強(qiáng)度適中，形成的漩渦深度約至稀釋水高度的(20%~25%),連續(xù)攪拌96h,之后靜置6h后水溶性組分從下口取出；d)平行制備3個(gè)樣品，混合后作為實(shí)驗(yàn)用液的母液，置于棕色瓶中密封，并冷藏保存，有效期原則上不超過4d。若溢油事故處置中使用了分散劑，則應(yīng)制備分散劑水溶性組分。分散劑水溶性組分的制備方法與6.2.2.3油品與分散劑混合后水溶性組分的制備若溢油事故處置中使用了分散劑，則應(yīng)制備油品與分散劑混合后水溶性組分。分散劑與油品按照質(zhì)量比1:10比例配制，然后每1L稀釋水中加入分散劑與油品混合物25g,并按6.2.2.1的規(guī)定制備油品與分散劑混合后水溶性組分。油品水溶性組分和油品與分散劑混合后水溶性組分制備的實(shí)驗(yàn)?zāi)敢海瑧?yīng)按GB17378.4—2007中13.1熒光分光光度法測定油類含量。各受試生物的毒性測試均為急性毒性測試，采用6.2.2所制備的母液開展毒性測試，推薦的毒性測試方法參見附錄B。實(shí)驗(yàn)用液現(xiàn)用現(xiàn)稀釋配制，配制前母液需進(jìn)行油類含量測定，油類含量下降率不高于10%,否則需重新制備。采用毒性單位(TU)表征急性毒性的大小，按式(1)計(jì)算：TU;=1/L(E)Cso (1)TU;油品、分散劑或二者水溶性組分對(duì)某一受試生物的毒性單位；L(E)Cs?——油品、分散劑或二者水溶性組分對(duì)某一受試生物出現(xiàn)半致死或效應(yīng)水平時(shí)暴露溶液當(dāng)使用母液作為毒性測試溶液，受試生物死亡率小于50%時(shí)，TU;取值0.5。47溢油對(duì)海洋生物影響評(píng)估7.1急性毒性評(píng)估根據(jù)6.3.2的測試結(jié)果，按照式(2)計(jì)算油品水溶性組分、分散劑水溶性組分以及油品和分散劑混合后水溶性組分的毒性測試結(jié)果之和：TA=TU?+TU?+TU? (2)式中：TA——毒性測試結(jié)果；TU?——油品水溶性組分對(duì)不同受試生物毒性測試結(jié)果中的最大毒性值；TU?——分散劑水溶性組分對(duì)不同受試生物毒性測試結(jié)果中的最大毒性值；TU?——油品和分散劑混合后水溶性組分對(duì)不同受試生物毒性測試結(jié)果中的最大毒性值。當(dāng)溢油事故處理過程中未使用分散劑或類似產(chǎn)品，則TU?和TU?記為“0”;如TU?小于1,則TU?默認(rèn)為1參與計(jì)算；當(dāng)使用2種或2種以上的分散劑，則分別進(jìn)行毒性測試，針對(duì)某一具體生物采用毒性值均值進(jìn)行TU?和TU?計(jì)算。根據(jù)TA的計(jì)算結(jié)果，按照表2中對(duì)應(yīng)的范圍進(jìn)行TR賦分。表2溢油急性毒性賦分表128364554627.2物理和機(jī)械損害評(píng)估對(duì)應(yīng)原油或油制品類型，按照表3對(duì)MR進(jìn)行賦分。如無法獲取原油或油制品類型，按GB/T29617—2013中的規(guī)定計(jì)算API比重，然后按照表3對(duì)MR進(jìn)行賦分。表3溢油物理和機(jī)械損害賦分表原油或油制品類型1超重或重質(zhì)原油52中質(zhì)原油43輕質(zhì)原油34柴油25汽油17.3長期潛在影響評(píng)估PR根據(jù)溢油油品在環(huán)境中的殘留時(shí)間來確定，若油品在環(huán)境中的殘留時(shí)間已知，可根據(jù)表4賦5表4溢油長期潛在影響賦分表環(huán)境中油品的殘留時(shí)間541年～2年31個(gè)月～12個(gè)月2小于1個(gè)月1TR,——溢油第j類油品對(duì)海洋生物急性毒性等級(jí)賦分；MR;——溢油第j類油品對(duì)海洋生物物理和機(jī)械損害等級(jí)賦分；PR,——溢油第j類油品對(duì)海洋生物長期潛在影響等級(jí)賦分；表5溢油對(duì)海洋生物影響等級(jí)1級(jí)溢油對(duì)海洋生物具有顯著影響，對(duì)海洋生態(tài)系2級(jí)溢油對(duì)海洋生物具有較顯著影響，對(duì)海洋生3級(jí)溢油對(duì)海洋生物影響不明顯6(資料性附錄)推薦的海洋測試物種推薦的海洋測試物種見表A.1。表A.1推薦的海洋測試物種類別學(xué)名費(fèi)歇爾弧菌(Vibriofischeri)環(huán)節(jié)藻(Champiaparvula)小球藻(Chlorellavulgaris)三角褐指藻(Phaeodactylumtricornutum)中肋骨條藻(Skeletonemacostatum)甲殼類黑褐新糠蝦(Mesopodopsisslabberi)鹵蟲(Artemiasalina)河螺贏蜚(Corophiumacherusicum)中國對(duì)蝦(Fenneropenaeuschinensis)雜色鱗(Cyprinodonvariegatus)鱸魚(Dicentrarchuslabrax)黃尾平口石首魚(Leiostomusxanthurus)海水青鱒(Oryziasmelastigma)銀鮭(Oncorhynchuskisutch)長牡蠣(Crassostreagigas)美洲牡蠣(Crassostreavirginica)貽貝(Mytilusedulis)菲律賓蛤仔(Ruditapesphilippinarum)紫海膽(Strongylocentrotuspurpuratus)褶皺臂尾輪蟲(Brachionusplicatilis)(資料性附錄)推薦的毒性測試方法推薦的毒性測試方法見表B.1。水質(zhì)：水樣對(duì)弧菌類光發(fā)射抑制影響的測定(發(fā)光細(xì)甲殼類海洋石油勘探開發(fā)污染物生物毒性第2四種雙殼類動(dòng)物幼體的短期毒性測試方法[1]GB/T18420.2—2009海洋石油勘探開發(fā)污染物生物毒性第2部分：檢測方法[2]HY/T147.5-2013海洋監(jiān)測技術(shù)規(guī)程第5部分：海洋生態(tài)StartingwithEmbryosofFourSpeciesofAmbientSamplesandEffluentswithFishes,Macroinvertebrates,andEchinoidEmbryos[8]ISO6341:2012Waterquality—DeterminationoftheinhibitimagnaStraus(Cladocer