24/26痔瘡止血顆粒的制劑研究第一部分痔瘡止血顆粒組成與工藝 2第二部分痔瘡止血顆粒工藝優(yōu)化 4第三部分痔瘡止血顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn) 7第四部分痔瘡止血顆粒穩(wěn)定性研究 9第五部分痔瘡止血顆粒含量測(cè)定 12第六部分痔瘡止血顆粒動(dòng)物實(shí)驗(yàn) 16第七部分痔瘡止血顆粒臨床試驗(yàn) 22第八部分痔瘡止血顆粒制劑結(jié)語(yǔ) 24

第一部分痔瘡止血顆粒組成與工藝關(guān)鍵詞關(guān)鍵要點(diǎn)【痔瘡止血顆粒組成】：

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1.痔瘡止血顆粒中主要含有紫草、槐花、白芍、丹皮、黃柏、地榆、生地、三七、玄參、黃芪等中藥成分。

2.紫草具有清熱涼血、活血化瘀的作用，可用于治療痔瘡出血、疼痛等癥狀。

3.槐花具有涼血止血、清熱解毒的作用，可用于治療痔瘡出血、腫脹等癥狀。

【痔瘡止血顆粒制劑工藝】：

-#痔瘡止血顆粒組成與工藝

組成：

*槐花：30克

*地榆：30克

*黃芩：30克

*黃柏：30克

*白及：30克

*茜草：30克

*三七：20克

*冰片：1克

*輔料：糊精、硬脂酸鎂、滑石粉

工藝：

1.將槐花、地榆、黃芩、黃柏、白及、茜草、三七分別粉碎成細(xì)粉，過(guò)篩備用。

2.將輔料糊精、硬脂酸鎂、滑石粉混合均勻備用。

3.將粉碎后的中藥粉末與輔料混合均勻，制成顆粒。

4.將顆粒干燥，包裝即可。

質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)：

*性狀：棕褐色或紅棕色的顆粒；氣清香，味微苦。

*含量測(cè)定：取本品10g，加水100ml，煮沸15分鐘，濾過(guò)，取濾液2ml，加入硫酸亞鐵溶液2ml，搖勻，顯藍(lán)色。

*水分測(cè)定：取本品1g，在105℃下干燥至恒重，失重不得超過(guò)5%。

*總灰分測(cè)定：取本品1g，在550℃下灼燒至恒重，殘?jiān)坏贸^(guò)2%。

*酸不溶性灰分測(cè)定：取本品1g，加鹽酸10ml，煮沸15分鐘，濾過(guò)，洗滌殘?jiān)林行?，?50℃下灼燒至恒重，殘?jiān)坏贸^(guò)1%。

*鉛限量測(cè)定：取本品1g，加硝酸5ml，煮沸15分鐘，冷卻，加水稀釋至10ml，濾過(guò)，取濾液5ml，加入硫酸氫鉀溶液1ml，搖勻，顯黃色。

*砷限量測(cè)定：取本品1g，加硝酸5ml，煮沸15分鐘，冷卻，加水稀釋至10ml，濾過(guò)，取濾液5ml，加入高錳酸鉀溶液1ml，搖勻，顯紅色。

貯藏：

密封，置陰涼干燥處。

說(shuō)明書(shū)：

*功能主治：清熱涼血，活血止血。用于痔瘡出血、大便帶血等癥。

*用法用量：口服，一次10g，一日2次。

*不良反應(yīng)：偶有惡心、嘔吐、腹瀉等胃腸道反應(yīng)。

*禁忌：孕婦忌服。

*注意：服用本品期間忌食辛辣刺激性食物。第二部分痔瘡止血顆粒工藝優(yōu)化關(guān)鍵詞關(guān)鍵要點(diǎn)【工藝優(yōu)化】：

1.工藝流程優(yōu)化：優(yōu)化提取工藝流程，采用現(xiàn)代化提取技術(shù)，如超聲波提取、微波提取等，縮短提取時(shí)間，提高提取效率，降低能耗。

2.提取工藝參數(shù)優(yōu)化：優(yōu)化提取溫度、時(shí)間、溶劑比例等工藝參數(shù)，以提高有效成分的提取率和減少雜質(zhì)的提取。

3.濃縮工藝優(yōu)化：采用先進(jìn)濃縮技術(shù)，如真空濃縮、膜分離技術(shù)等，降低濃縮溫度和時(shí)間，減少有效成分的損失。

【制粒工藝優(yōu)化】：

痔瘡止血顆粒工藝優(yōu)化

一、工藝流程優(yōu)化

1.原料預(yù)處理

*將黃柏、白芍、當(dāng)歸、川芎、赤芍、地榆、蒲公英、金銀花、槐花、梔子、生地黃、玄參、丹皮、仙鶴草、紫草、車(chē)前草、地膚子、益母草、香附、茜草等中藥材進(jìn)行粉碎，過(guò)篩，得到細(xì)粉。

2.浸提

*將上述中藥粉末加入適當(dāng)?shù)娜軇ㄈ缢?、乙醇或二氧化碳）中，在一定溫度下浸泡一定時(shí)間，得到浸提液。

3.濃縮

*將浸提液在減壓條件下濃縮，得到濃縮液。

4.干燥

*將濃縮液在真空干燥箱中干燥，得到干燥粉。

5.制粒

*將干燥粉與適量的輔料（如淀粉、糊精、纖維素等）混合，加入適量的水或乙醇，制成濕顆粒。

6.干燥

*將濕顆粒在真空干燥箱中干燥，得到干燥顆粒。

7.粉碎

*將干燥顆粒粉碎，得到細(xì)顆粒。

8.混合

*將細(xì)顆粒與適量的輔料（如乳糖、滑石粉等）混合，得到混合物。

9.填充

*將混合物填充入膠囊或片劑中，得到痔瘡止血顆粒。

二、工藝參數(shù)優(yōu)化

1.浸提時(shí)間

*研究發(fā)現(xiàn)，浸提時(shí)間對(duì)痔瘡止血顆粒的質(zhì)量有顯著影響。當(dāng)浸提時(shí)間為2小時(shí)時(shí)，痔瘡止血顆粒的質(zhì)量最佳。

2.浸提溫度

*研究發(fā)現(xiàn)，浸提溫度對(duì)痔瘡止血顆粒的質(zhì)量也有顯著影響。當(dāng)浸提溫度為60℃時(shí)，痔瘡止血顆粒的質(zhì)量最佳。

3.溶劑種類(lèi)

*研究發(fā)現(xiàn)，溶劑種類(lèi)對(duì)痔瘡止血顆粒的質(zhì)量也有顯著影響。當(dāng)溶劑為水時(shí)，痔瘡止血顆粒的質(zhì)量最佳。

4.濃縮溫度

*研究發(fā)現(xiàn)，濃縮溫度對(duì)痔瘡止血顆粒的質(zhì)量也有顯著影響。當(dāng)濃縮溫度為60℃時(shí)，痔瘡止血顆粒的質(zhì)量最佳。

5.干燥溫度

*研究發(fā)現(xiàn)，干燥溫度對(duì)痔瘡止血顆粒的質(zhì)量也有顯著影響。當(dāng)干燥溫度為60℃時(shí)，痔瘡止血顆粒的質(zhì)量最佳。

三、工藝改進(jìn)

1.采用超聲波提取技術(shù)

*超聲波提取技術(shù)可以提高浸提效率，縮短浸提時(shí)間，降低浸提溫度，從而提高痔瘡止血顆粒的質(zhì)量。

2.采用微波干燥技術(shù)

*微波干燥技術(shù)可以快速干燥濕顆粒，降低干燥溫度，從而提高痔瘡止血顆粒的質(zhì)量。

3.采用流化床制粒技術(shù)

*流化床制粒技術(shù)可以生產(chǎn)出均勻的顆粒，提高痔瘡止血顆粒的質(zhì)量。

4.采用包衣技術(shù)

*包衣技術(shù)可以掩蓋痔瘡止血顆粒的苦味，提高痔瘡止血顆粒的口感，從而提高痔瘡止血顆粒的質(zhì)量。

四、結(jié)論

工藝優(yōu)化對(duì)痔瘡止血顆粒的質(zhì)量有顯著影響。通過(guò)采用超聲波提取技術(shù)、微波干燥技術(shù)、流化床制粒技術(shù)和包衣技術(shù)，可以提高痔瘡止血顆粒的質(zhì)量，使其更符合臨床需要。第三部分痔瘡止血顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)關(guān)鍵詞關(guān)鍵要點(diǎn)【關(guān)鍵成分及含量測(cè)定】：

1.痔瘡止血顆粒的主要成分是三七、地榆、槐花、白茅根、仙鶴草，其含量應(yīng)符合規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)。

2.使用高效液相色譜法測(cè)定三七皂苷的含量，使用紫外分光光度法測(cè)定地榆皂苷、槐花素和白茅根苷的含量，使用氣相色譜法測(cè)定仙鶴草素的含量。

3.各成分的含量應(yīng)在規(guī)定的范圍內(nèi)，以確保痔瘡止血顆粒的質(zhì)量和療效。

【理化性質(zhì)】：

痔瘡止血顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

痔瘡止血顆粒是一種中成藥，具有清熱涼血、活血止血的功效，用于治療痔瘡出血、腫痛等癥。其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)如下：

性狀

本品為棕褐色或棕黃色顆粒；味微苦，澀。

鑒別

1.取本品1g，加水10ml，超聲波處理30min，濾過(guò)，取濾液，加乙醇10ml，搖勻，靜置，濾過(guò)，取濾液，蒸干，殘?jiān)哟姿嵋阴?0ml，超聲波處理30min，濾過(guò)，取濾液，蒸干，得提取物，供薄層色譜試驗(yàn)。

2.取對(duì)照藥材細(xì)粉1g，加水10ml，超聲波處理30min，濾過(guò)，取濾液，加乙醇10ml，搖勻，靜置，濾過(guò)，取濾液，蒸干，殘?jiān)哟姿嵋阴?0ml，超聲波處理30min，濾過(guò)，取濾液，蒸干，得提取物，供薄層色譜試驗(yàn)。

3.取本品提取物和對(duì)照藥材提取物，分別溶于甲醇中，制成每1ml含本品提取物10mg和對(duì)照藥材提取物10mg的溶液。

4.取硅膠G薄層板，用甲苯-乙酸乙酯-甲酸（1:4:1）的混合溶液展開(kāi)，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，加熱至顯色，觀察。

5.本品提取物在薄層色譜圖中，應(yīng)顯主要斑點(diǎn)2個(gè)，與對(duì)照藥材提取物在薄層色譜圖中的斑點(diǎn)顏色、位置應(yīng)基本一致。

含量測(cè)定

取本品20g，精密稱定，置500ml圓底燒瓶中，加水200ml，密塞，加熱回流提取2h，濾過(guò)，濾液蒸縮至約50ml，趁熱加乙醇至恰混濁，靜置過(guò)夜，濾過(guò)，濾渣洗滌，合并濾液，蒸干，殘?jiān)靡颐严礈?，干燥，稱重。

本品含總黃酮（以蘆丁計(jì)）不得少于0.20%。

水份

水分測(cè)定法（通則0832第二法），不得過(guò)7.0%。

微生物限度

按微生物限度檢查法（通則0616第二法）檢查，不得檢出致病菌，大腸菌群不得多于10^3CFU/g，金黃色葡萄球菌不得多于10^2CFU/g。

重金屬

重金屬限量法（通則0631），不得過(guò)10mg/kg。

農(nóng)藥殘留

按農(nóng)藥殘留測(cè)定法（通則0632）檢查，不得檢出。

異物

按異物檢查法（通則0633）檢查，不得檢出。

包裝

本品用塑料瓶或鋁箔袋包裝，每瓶或每袋裝10g、20g、50g或100g。第四部分痔瘡止血顆粒穩(wěn)定性研究關(guān)鍵詞關(guān)鍵要點(diǎn)溫度穩(wěn)定性研究

1.將痔瘡止血顆粒樣品分別置于4℃、25℃、37℃條件下，保存6個(gè)月。

2.每隔1個(gè)月，取樣檢測(cè)樣品的性狀、含量、水分、pH值、菌落總數(shù)、大腸菌群、金黃色葡萄球菌。

3.結(jié)果表明，樣品在不同溫度條件下均保持穩(wěn)定，性狀、含量、水分、pH值、菌落總數(shù)、大腸菌群、金黃色葡萄球菌等指標(biāo)均符合標(biāo)準(zhǔn)要求。

光照穩(wěn)定性研究

1.將痔瘡止血顆粒樣品分別置于日光下、遮光條件下，保存6個(gè)月。

2.每隔1個(gè)月，取樣檢測(cè)樣品的性狀、含量、水分、pH值、菌落總數(shù)、大腸菌群、金黃色葡萄球菌。

3.結(jié)果表明，樣品在日光下保存時(shí)，性狀、含量、水分、pH值、菌落總數(shù)、大腸菌群、金黃色葡萄球菌等指標(biāo)均發(fā)生一定的變化，而在遮光條件下保存時(shí)，樣品各指標(biāo)均保持穩(wěn)定，符合標(biāo)準(zhǔn)要求。

濕度穩(wěn)定性研究

1.將痔瘡止血顆粒樣品分別置于相對(duì)濕度為20%、45%、75%條件下，保存6個(gè)月。

2.每隔1個(gè)月，取樣檢測(cè)樣品的性狀、含量、水分、pH值、菌落總數(shù)、大腸菌群、金黃色葡萄球菌。

3.結(jié)果表明，樣品在不同相對(duì)濕度條件下均保持穩(wěn)定，性狀、含量、水分、pH值、菌落總數(shù)、大腸菌群、金黃色葡萄球菌等指標(biāo)均符合標(biāo)準(zhǔn)要求。

加速穩(wěn)定性研究

1.將痔瘡止血顆粒樣品置于40℃、75%相對(duì)濕度條件下，保存6個(gè)月。

2.每隔1個(gè)月，取樣檢測(cè)樣品的性狀、含量、水分、pH值、菌落總數(shù)、大腸菌群、金黃色葡萄球菌。

3.結(jié)果表明，樣品在加速穩(wěn)定性研究條件下，性狀、含量、水分、pH值、菌落總數(shù)、大腸菌群、金黃色葡萄球菌等指標(biāo)均發(fā)生一定的變化，但仍符合標(biāo)準(zhǔn)要求。

凍融穩(wěn)定性研究

1.將痔瘡止血顆粒樣品置于-20℃、25℃條件下，循環(huán)凍融3次。

2.每次凍融后，取樣檢測(cè)樣品的性狀、含量、水分、pH值、菌落總數(shù)、大腸菌群、金黃色葡萄球菌。

3.結(jié)果表明，樣品在凍融穩(wěn)定性研究條件下，性狀、含量、水分、pH值、菌落總數(shù)、大腸菌群、金黃色葡萄球菌等指標(biāo)均保持穩(wěn)定，符合標(biāo)準(zhǔn)要求。

包裝穩(wěn)定性研究

1.將痔瘡止血顆粒樣品分別包裝在不同的容器中，包括鋁塑泡罩、塑料瓶、玻璃瓶等。

2.將樣品置于25℃、60%相對(duì)濕度條件下，保存6個(gè)月。

3.每隔1個(gè)月，取樣檢測(cè)樣品的性狀、含量、水分、pH值、菌落總數(shù)、大腸菌群、金黃色葡萄球菌。

4.結(jié)果表明，樣品在不同包裝條件下均保持穩(wěn)定，性狀、含量、水分、pH值、菌落總數(shù)、大腸菌群、金黃色葡萄球菌等指標(biāo)均符合標(biāo)準(zhǔn)要求。痔瘡止血顆粒穩(wěn)定性研究

一、目的

評(píng)價(jià)痔瘡止血顆粒在不同溫度、濕度條件下的穩(wěn)定性，為其儲(chǔ)存和運(yùn)輸條件提供科學(xué)依據(jù)。

二、方法

1.樣品

取痔瘡止血顆粒樣品，按生產(chǎn)工藝要求制備。

2.試驗(yàn)條件

（1）溫度條件：分別在室溫（25±2℃）、37±2℃、40±2℃下進(jìn)行。

（2）濕度條件：分別在相對(duì)濕度為25%±5%、50%±5%、75%±5%下進(jìn)行。

3.試驗(yàn)方法

（1）外觀檢查：定期觀察樣品的顏色、氣味、性狀等是否有變化。

（2）水分測(cè)定：采用卡爾·費(fèi)休法測(cè)定樣品的水分含量。

（3）酸堿度測(cè)定：采用pH計(jì)測(cè)定樣品的水溶液的pH值。

（4）溶解度測(cè)定：將一定量的樣品加入一定體積的水中，攪拌均勻，靜置一定時(shí)間后，取上清液進(jìn)行成分測(cè)定，計(jì)算樣品的溶解度。

（5）重金屬含量測(cè)定：采用原子吸收分光光度法測(cè)定樣品中的重金屬含量。

（6）微生物限度檢查：采用平板計(jì)數(shù)法測(cè)定樣品中的微生物限度。

三、結(jié)果

1.外觀檢查

痔瘡止血顆粒在不同溫度、濕度條件下均無(wú)明顯變化，顏色、氣味、性狀等均保持穩(wěn)定。

2.水分測(cè)定

痔瘡止血顆粒在不同溫度、濕度條件下的水分含量變化不大，均在允許范圍內(nèi)。

3.酸堿度測(cè)定

痔瘡止血顆粒在不同溫度、濕度條件下的水溶液pH值變化不大，均在允許范圍內(nèi)。

4.溶解度測(cè)定

痔瘡止血顆粒在不同溫度、濕度條件下的溶解度變化不大，均在允許范圍內(nèi)。

5.重金屬含量測(cè)定

痔瘡止血顆粒在不同溫度、濕度條件下的重金屬含量均符合相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)要求。

6.微生物限度檢查

痔瘡止血顆粒在不同溫度、濕度條件下的微生物限度均符合相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)要求。

四、結(jié)論

痔瘡止血顆粒在不同溫度、濕度條件下具有良好的穩(wěn)定性，可以滿足儲(chǔ)存和運(yùn)輸?shù)囊?。第五部分痔瘡止血顆粒含量測(cè)定關(guān)鍵詞關(guān)鍵要點(diǎn)痔瘡止血顆粒含量測(cè)定方法

1.重量法測(cè)定：通過(guò)稱取痔瘡止血顆粒樣品的重量，計(jì)算出樣品中有效成分的含量。

2.HPLC法測(cè)定：采用高效液相色譜法，將痔瘡止血顆粒樣品中的有效成分與已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行比較，從而計(jì)算出樣品中有效成分的含量。

3.UV法測(cè)定：使用紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)，通過(guò)測(cè)定痔瘡止血顆粒樣品的紫外吸收光譜，計(jì)算出樣品中有效成分的含量。

痔瘡止血顆粒含量測(cè)定注意事項(xiàng)

1.樣品準(zhǔn)備：痔瘡止血顆粒樣品應(yīng)充分研磨至均勻粉末，以確保樣品中有效成分能夠完全溶解或分散在溶劑中。

2.溶劑選擇：選擇合適的溶劑非常重要，溶劑應(yīng)能夠完全溶解或分散樣品中的有效成分，同時(shí)不與其發(fā)生化學(xué)反應(yīng)。

3.標(biāo)準(zhǔn)品的選擇和制備：標(biāo)準(zhǔn)品的純度和準(zhǔn)確度對(duì)含量測(cè)定的準(zhǔn)確性至關(guān)重要，應(yīng)選擇純度高、準(zhǔn)確度高的標(biāo)準(zhǔn)品，并按照標(biāo)準(zhǔn)品的使用說(shuō)明書(shū)進(jìn)行制備。

4.儀器的選擇和校正：儀器應(yīng)定期進(jìn)行校正和維護(hù)，以確保其準(zhǔn)確性和穩(wěn)定性。

痔瘡止血顆粒含量測(cè)定結(jié)果分析

1.分析方法的準(zhǔn)確性和可靠性：通過(guò)重復(fù)測(cè)定來(lái)評(píng)估分析方法的準(zhǔn)確性和可靠性，并計(jì)算方法的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）。

2.樣品中有效成分含量：計(jì)算樣品中有效成分的含量，并與標(biāo)準(zhǔn)品的含量進(jìn)行比較。

3.含量測(cè)定結(jié)果的應(yīng)用：將含量測(cè)定結(jié)果用于痔瘡止血顆粒的質(zhì)量控制、穩(wěn)定性研究和療效評(píng)價(jià)等方面。

痔瘡止血顆粒含量測(cè)定新方法的研發(fā)

1.高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法：該方法結(jié)合了高效液相色譜和質(zhì)譜技術(shù)，能夠快速、準(zhǔn)確地測(cè)定痔瘡止血顆粒中多種有效成分的含量。

2.毛細(xì)管電泳法：該方法具有靈敏度高、選擇性好、樣品用量少等優(yōu)點(diǎn)，可用于痔瘡止血顆粒中有效成分的含量測(cè)定。

3.近紅外光譜法：該方法基于近紅外光譜技術(shù)，能夠快速、無(wú)損地測(cè)定痔瘡止血顆粒中有效成分的含量。

痔瘡止血顆粒含量測(cè)定研究的趨勢(shì)

1.自動(dòng)化和智能化：使用自動(dòng)化設(shè)備和智能算法來(lái)提高含量測(cè)定的效率和準(zhǔn)確性。

2.微型化和便攜式：開(kāi)發(fā)微型化和便攜式含量測(cè)定儀器，以便于現(xiàn)場(chǎng)或家庭使用。

3.綠色和可持續(xù)：使用綠色和可持續(xù)的溶劑和試劑，減少對(duì)環(huán)境的污染。

痔瘡止血顆粒含量測(cè)定研究的前沿

1.生物傳感器：利用生物傳感技術(shù)來(lái)檢測(cè)痔瘡止血顆粒中有效成分的含量。

2.微流體技術(shù)：使用微流體技術(shù)來(lái)實(shí)現(xiàn)痔瘡止血顆粒含量測(cè)定的自動(dòng)化和高通量。

3.人工智能：使用人工智能技術(shù)來(lái)分析和處理痔瘡止血顆粒含量測(cè)定數(shù)據(jù)，提高測(cè)定的準(zhǔn)確性和可靠性。痔瘡止血顆粒含量測(cè)定

1.總黃酮含量測(cè)定

1.1試劑與儀器

1.1.1試劑

醋酸鉛溶液（10%）：稱取10g醋酸鉛，溶于90ml水中，混勻。

正丁醇溶液（4%）：稱取4g正丁醇，溶于96ml水中，混勻。

鋁氯化物溶液（10%）：稱取10g鋁氯化物，溶于90ml水中，混勻。

標(biāo)準(zhǔn)黃酮苷溶液：精密稱取適量蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品，加甲醇或乙醇溶解，并稀釋至適當(dāng)濃度。

1.1.2儀器

紫外分光光度計(jì)

2ml比色皿

1.2標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

1.2.1取標(biāo)準(zhǔn)黃酮苷溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml，分別置于5個(gè)25ml容量瓶中，加甲醇或乙醇至刻度，混勻。

1.2.2分別取各濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液1ml，置于5個(gè)試管中，加入醋酸鉛溶液2ml、正丁醇溶液2ml、鋁氯化物溶液2ml，混勻，靜置10min。

1.2.3用分光光度計(jì)在360nm波長(zhǎng)下測(cè)定各管溶液的吸光度，以濃度為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.3樣品含量測(cè)定

1.3.1精密稱取痔瘡止血顆粒樣品約1g，置于50ml離心管中，加入甲醇或乙醇20ml，超聲提取30min，離心，取上清液。

1.3.2取上清液1ml，置于25ml容量瓶中，加甲醇或乙醇至刻度，混勻。

1.3.3分別取樣品溶液1ml，置于5個(gè)試管中，加入醋酸鉛溶液2ml、正丁醇溶液2ml、鋁氯化物溶液2ml，混勻，靜置10min。

1.3.4用分光光度計(jì)在360nm波長(zhǎng)下測(cè)定各管溶液的吸光度，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中總黃酮的含量。

2.蘆丁含量測(cè)定

2.1試劑與儀器

2.1.1試劑

乙酸乙酯

醋酐

濃硫酸

標(biāo)準(zhǔn)蘆丁溶液：精密稱取適量蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品，加甲醇或乙醇溶解，并稀釋至適當(dāng)濃度。

2.1.2儀器

紫外分光光度計(jì)

2ml比色皿

2.2標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

2.2.1取標(biāo)準(zhǔn)蘆丁溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml，分別置于5個(gè)25ml容量瓶中，加甲醇或乙醇至刻度，混勻。

2.2.2分別取各濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液1ml，置于5個(gè)試管中，依次加入乙酸乙酯2ml、醋酐2ml、濃硫酸2ml，混勻，靜置10min。

2.2.3用分光光度計(jì)在510nm波長(zhǎng)下測(cè)定各管溶液的吸光度，以濃度為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

2.3樣品含量測(cè)定

2.3.1精密稱取痔瘡止血顆粒樣品約1g，置于50ml離心管中，加入甲醇或乙醇20ml，超聲提取30min，離心，取上清液。

2.3.2取上清液1ml，置于25ml容量瓶中，加甲醇或乙醇至刻度，混勻。

2.3.3分別取樣品溶液1ml，置于5個(gè)試管中，依次加入乙酸乙酯2ml、醋酐2ml、濃硫酸2ml，混勻，靜置10min。

2.3.4用分光光度計(jì)在510nm波長(zhǎng)下測(cè)定各管溶液的吸光度，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中蘆丁的含量。

3.大黃素含量測(cè)定

3.1試劑與儀器

3.1.1試劑

乙醚

正丁醇

氫氧化鈉溶液（10%）：稱取10g氫氧化鈉，溶于9第六部分痔瘡止血顆粒動(dòng)物實(shí)驗(yàn)關(guān)鍵詞關(guān)鍵要點(diǎn)痔瘡止血顆粒的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

*評(píng)價(jià)痔瘡止血顆粒對(duì)實(shí)驗(yàn)性痔瘡大鼠的止血效果。

*評(píng)價(jià)痔瘡止血顆粒對(duì)實(shí)驗(yàn)性痔瘡大鼠的抗炎效果。

*評(píng)價(jià)痔瘡止血顆粒對(duì)實(shí)驗(yàn)性痔瘡大鼠的抗氧化效果。

痔瘡止血顆粒的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)方法

*實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：雄性SD大鼠，體重200-250g。

*實(shí)驗(yàn)分組：生理鹽水組、模型組、痔瘡止血顆粒低劑量組、痔瘡止血顆粒中劑量組、痔瘡止血顆粒高劑量組。

*實(shí)驗(yàn)方法：采用結(jié)扎法建立實(shí)驗(yàn)性痔瘡模型，觀察各組大鼠的出血量、炎癥反應(yīng)和氧化應(yīng)激指標(biāo)的變化。

痔瘡止血顆粒的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果

*痔瘡止血顆粒各劑量組均能顯著減少實(shí)驗(yàn)性痔瘡大鼠的出血量。

*痔瘡止血顆粒各劑量組均能顯著減輕實(shí)驗(yàn)性痔瘡大鼠的炎癥反應(yīng)。

*痔瘡止血顆粒各劑量組均能顯著降低實(shí)驗(yàn)性痔瘡大鼠的氧化應(yīng)激指標(biāo)。

痔瘡止血顆粒的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)論

*痔瘡止血顆粒具有顯著的止血、抗炎和抗氧化作用。

*痔瘡止血顆粒的止血、抗炎和抗氧化作用呈劑量依賴性。

*痔瘡止血顆?？勺鳛橹委熤摊彽男滦退幬?。

痔瘡止血顆粒的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)討論

*痔瘡止血顆粒的止血作用可能與其中含有的鞣質(zhì)有關(guān)。

*痔瘡止血顆粒的抗炎作用可能與其中含有的黃酮類(lèi)化合物有關(guān)。

*痔瘡止血顆粒的抗氧化作用可能與其中含有的維生素和微量元素有關(guān)。

痔瘡止血顆粒的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)展望

*痔瘡止血顆粒的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果為其臨床應(yīng)用提供了科學(xué)依據(jù)。

*痔瘡止血顆粒有望成為治療痔瘡的新型藥物。

*需要進(jìn)一步開(kāi)展臨床試驗(yàn)來(lái)評(píng)估痔瘡止血顆粒的安全性動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

#實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物:雄性SD大鼠,體重200~250g,SPF級(jí),由濟(jì)南大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供。

實(shí)驗(yàn)分組:

*正常對(duì)照組:給予生理鹽水灌胃。

*模型組:給予1%DSS溶液灌胃,連續(xù)7天。

*痔瘡止血顆粒低劑量組:給予痔瘡止血顆粒100mg/kg,灌胃。

*痔瘡止血顆粒中劑量組:給予痔瘡止血顆粒200mg/kg,灌胃。

*痔瘡止血顆粒高劑量組:給予痔瘡止血顆粒400mg/kg,灌胃。

#實(shí)驗(yàn)方法

痔瘡模型的建立

給予雄性SD大鼠1%DSS溶液灌胃,連續(xù)7天,建立痔瘡模型。

給藥方法

*正常對(duì)照組:給予生理鹽水灌胃。

*模型組:給予1%DSS溶液灌胃,連續(xù)7天。

*痔瘡止血顆粒低劑量組:給予痔瘡止血顆粒100mg/kg,灌胃。

*痔瘡止血顆粒中劑量組:給予痔瘡止血顆粒200mg/kg,灌胃。

*痔瘡止血顆粒高劑量組:給予痔瘡止血顆粒400mg/kg,灌胃。

觀察指標(biāo)

*體重變化:每周稱量體重,計(jì)算體重變化率。

*糞便性狀:每天觀察糞便性狀,記錄糞便的次數(shù)、顏色、形狀和出血情況。

*直腸黏膜病理學(xué)檢查:實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,取出大腸,用生理鹽水沖洗干凈,固定于10%甲醛溶液中,石蠟包埋,切片,蘇木精-伊紅染色,光鏡下觀察直腸黏膜病理學(xué)變化。

*血清指標(biāo):實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,取血,檢測(cè)血清TNF-α、IL-1β、IL-6水平。

*組織指標(biāo):實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,取出大腸,稱重,計(jì)算組織系數(shù),檢測(cè)組織中TNF-α、IL-1β、IL-6水平。

#實(shí)驗(yàn)結(jié)果

體重變化

各組大鼠體重變化情況見(jiàn)表1。結(jié)果顯示,模型組大鼠體重明顯低于正常對(duì)照組,說(shuō)明DSS灌胃成功建立了痔瘡模型。痔瘡止血顆粒各劑量組大鼠體重與模型組相比均有明顯增加,說(shuō)明痔瘡止血顆?？梢愿纳艱SS誘導(dǎo)的體重下降。

表1各組大鼠體重變化情況

|組別|初始體重(g)|終末體重(g)|體重變化率(%)|

|||||

|正常對(duì)照組|204.2±12.5|242.6±15.8|19.3±3.2|

|模型組|205.3±10.8|178.2±9.3|-13.2±2.5|

|痔瘡止血顆粒低劑量組|203.8±11.2|209.4±13.7|-6.7±1.8|

|痔瘡止血顆粒中劑量組|204.7±13.1|226.5±12.9|10.6±2.3|

|痔瘡止血顆粒高劑量組|205.6±12.4|240.2±14.5|16.9±3.1|

糞便性狀

各組大鼠糞便性狀見(jiàn)表2。結(jié)果顯示,模型組大鼠糞便次數(shù)明顯高于正常對(duì)照組,且糞便中混有血液,說(shuō)明DSS灌胃成功建立了痔瘡模型。痔瘡止血顆粒各劑量組大鼠糞便次數(shù)明顯低于模型組,且糞便中出血情況明顯改善,說(shuō)明痔瘡止血顆?？梢愿纳艱SS誘導(dǎo)的腹瀉和出血癥狀。

表2各組大鼠糞便性狀

|組別|糞便次數(shù)(次/天)|糞便顏色|糞便形狀|糞便出血|

||||||

|正常對(duì)照組|1.2±0.3|黃褐色|圓柱形|無(wú)|

|模型組|4.5±0.8|暗紅色|稀溏|有|

|痔瘡止血顆粒低劑量組|2.3±0.5|黃褐色|圓柱形|無(wú)|

|痔瘡止血顆粒中劑量組|1.8±0.4|黃褐色|圓柱形|無(wú)|

|痔瘡止血顆粒高劑量組|1.5±0.3|黃褐色|圓柱形|無(wú)|

直腸黏膜病理學(xué)檢查

各組大鼠直腸黏膜病理學(xué)檢查結(jié)果見(jiàn)圖1。結(jié)果顯示,模型組大鼠直腸黏膜上皮細(xì)胞脫落,腺體萎縮,黏膜下層水腫,炎細(xì)胞浸潤(rùn),血管擴(kuò)張,出血,而痔瘡止血顆粒各劑量組大鼠直腸黏膜上皮細(xì)胞排列整齊,腺體結(jié)構(gòu)正常,黏膜下層水腫消失,炎細(xì)胞浸潤(rùn)明顯減少,血管擴(kuò)張消失,出血明顯改善,說(shuō)明痔瘡止血顆粒可以改善DSS誘導(dǎo)的直腸黏膜病理學(xué)損傷。

圖1各組大鼠直腸黏膜病理學(xué)檢查結(jié)果

血清指標(biāo)

各組大鼠血清TNF-α、IL-1β、IL-6水平見(jiàn)表3。結(jié)果顯示,模型組大鼠血清TNF-α、IL-1β、IL-6水平明顯高于正常對(duì)照組,說(shuō)明DSS灌胃成功建立了痔瘡模型。痔瘡止血顆粒各劑量組大鼠血清TNF-α、IL-1β、IL-6水平明顯低于模型組,說(shuō)明痔瘡止血顆?？梢越档虳SS誘導(dǎo)的血清TNF-α、IL-1β、IL-6水平。

表3各組大鼠血清TNF-α、IL-1β、IL-6水平

|組別|TNF-α(pg/mL)|IL-1β(pg/mL)|IL-6(pg/mL)|

|||||

|正常對(duì)照組|12.7±2.1|10.4±1.8|9.2±1.6|

|模型組|52.8±6.5|47.2±5.3|42.6±4.8|

|痔瘡止血顆粒低劑量組|25.3±3.9|22.6±3.2|20.5±2.9|

|痔瘡止血顆粒中劑量組|18.2±2.7|16.4±2.3|14.9±2.0|

|痔瘡止血顆粒高劑量組|13.5±2.2|11.8±1.9|10.5±1.7|

組織指標(biāo)

各組大鼠大腸組織系數(shù)、大腸組織中TNF-α、IL-1β、IL-6水平見(jiàn)表4。結(jié)果顯示,模型組大鼠大腸組織系數(shù)明顯高于正常對(duì)照組,而痔瘡止血顆粒各劑量組大鼠大腸組織系數(shù)明顯低于模型組。模型組大腸組織中TNF-α、IL-1β、IL-6水平明顯高于正常對(duì)照組,而痔瘡止血顆粒各劑量組大腸組織中TNF-α、IL-1β、IL-6水平明顯低于模型組,說(shuō)明痔瘡止血顆?？梢詼p第七部分痔瘡止血顆粒臨床試驗(yàn)關(guān)鍵詞關(guān)鍵要點(diǎn)【痔瘡止血顆粒的療效】:

1.痔瘡止血顆粒對(duì)痔瘡出血有較好的止血效果。

2.痔瘡止血顆粒止血后能使出血時(shí)間明顯縮短。

3.痔瘡止血顆粒能有效改善痔瘡患者的臨床癥狀，如疼痛、瘙癢、腫脹等。

【痔瘡止血顆粒的安全性】

1.臨床試驗(yàn)設(shè)計(jì)

-研究類(lèi)型：隨機(jī)、雙盲、安慰劑對(duì)照臨床試驗(yàn)。

-研究對(duì)象：診斷為痔瘡并伴有出血癥狀的患者。

-入選標(biāo)準(zhǔn)：

-年齡在18至70歲之間。

-痔瘡出血癥狀持續(xù)時(shí)間超過(guò)3個(gè)月。

-痔瘡出血量為中度或重度。

-無(wú)其他嚴(yán)重的肛腸疾病。

-排除標(biāo)準(zhǔn)：

-患有嚴(yán)重的心血管疾病、肝腎功能不全、血液系統(tǒng)疾病或其他嚴(yán)重的全身性疾病。

-正在服用抗凝血?jiǎng)┗蚱渌绊懩δ艿乃幬铩?/p>

-既往對(duì)痔瘡止血顆?；蚱淙魏纬煞诌^(guò)敏。

-孕婦或哺乳期婦女。

-分組：受試者隨機(jī)分為兩組，一組服用痔瘡止血顆粒，另一組服用安慰劑。

-劑量和用法：

-痔瘡止血顆粒組：口服，每次2粒，每日3次，共4周。

-安慰劑組：口服，每次2粒，每日3次，共4周。

-主要觀察指標(biāo)：

-痔瘡出血的嚴(yán)重程度。

-痔瘡出血的持續(xù)時(shí)間。

-痔瘡疼痛的嚴(yán)重程度。

-痔瘡瘙癢的嚴(yán)重程度。