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T/FJSPSH標(biāo) 準(zhǔn)T/FJSPSH001—2023食品中安賽蜜的測定液相色譜法布 施福建省食品企業(yè)商會(huì)發(fā)布T/FJSPSH001-2023T/FJSPSH001-2023前 言本文件按照GB/T1.1-2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分:標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。本文件由泉州市壹合食品研究院有限公司提出。本文件由福建省食品企業(yè)商會(huì)歸口。本文件主要起草單位：泉州市壹合食品研究院有限公司、晉江市食品行業(yè)協(xié)會(huì)、福建省食品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)中心、奇峰（福建）食品有限公司、雅客（中國）有限公司、福建省福食安檢測技術(shù)有限公司、中紡檢測（福建）有限公司。本文件主要起草人：閆肅、陳昌熙、何曉玲、林景昌、吳愛陽、蔡志興、李昆朋。T/FJSPSH001-2023T/FJSPSH001-2023PAGEPAGE1食品中安賽蜜的測定液相色譜法范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了食品中安賽蜜（乙?；前匪徕洠┑臏y定方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于各類食品中安賽蜜（乙?；前匪徕洠┑臏y定。規(guī)范性引用文件下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法原理根據(jù)樣品基質(zhì)不同，用水或20%甲醇水溶液提取試樣中的安賽蜜，經(jīng)脫脂、去蛋白處理，過膜，用配紫外或二極管陣列檢測器的高效液相色譜儀測定，以色譜峰的保留時(shí)間定性，外標(biāo)法定量。試劑和材料除特殊注明外，所有試劑均為分析純，水為符合GB/T6682規(guī)定的一級(jí)水。甲醇（液相色譜級(jí)）。乙腈（液相色譜級(jí)）。正己烷。乙醇。0.02mol/L硫酸銨溶液：稱取硫酸銨2.642g加水溶解至1000mL。10%亞鐵氰化鉀溶液：稱取10g亞鐵氰化鉀加水溶解至100mL。20%乙酸鋅溶液：稱取20g乙酸鋅加水溶解至100mL。20%甲醇溶液：量取甲醇200ml加水溶解至1000mL。10%氨水溶液：量取氨水10ml加水溶解至100mL。1%氨水溶液：量取氨水1ml加水溶解至100mL。安賽蜜（乙?；前匪徕洠?biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：精確稱取安賽蜜標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)0.1000g,用流動(dòng)相溶解后移入100mL容量瓶中，并用流動(dòng)相稀釋至刻度，即含安賽蜜1mg/mL的溶液，或直接購買有證標(biāo)準(zhǔn)溶液。安賽蜜（乙?；前匪徕洠?biāo)準(zhǔn)中間液：吸取安賽蜜標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液2mL于50mL容量瓶，加流動(dòng)相至刻度，即含安賽蜜40mg/L的溶液。安賽蜜（乙酰磺胺酸鉀）標(biāo)準(zhǔn)使用液:吸取安賽蜜標(biāo)準(zhǔn)中間液0.25mL、1mL、2mL、4mL、5mL于10mL容量瓶中，加流動(dòng)相至刻度，即得各含安賽蜜1mg/L、4mg/L、8mg/L、16mg/L、20mg/L的標(biāo)準(zhǔn)使用液系列。微孔濾膜0.45μm（水系）。儀器和設(shè)備高效液相色譜儀（配紫外或二極管陣列檢測器）超聲清洗器離心機(jī)(最大轉(zhuǎn)速10000r/min、50mL角轉(zhuǎn)子)5.4電子天平（感量0.01g、0.0001g）高純水機(jī)渦旋混合機(jī)組織勻漿機(jī)研磨機(jī)分析步驟樣品制備取多個(gè)預(yù)包裝的飲料、液態(tài)奶等均勻樣品直接混合；非均勻的液態(tài)、半固態(tài)樣品用組織勻漿機(jī)勻漿；固體樣品用研磨機(jī)充分粉碎并攪拌均勻；奶酪、黃油、巧克力等采用50~60加熱熔融，并趁熱充分?jǐn)嚢杈鶆?。取其中?00g裝入玻璃容器中，密封，液體試樣于4℃保存，其他試樣于-18保存。提取水果干制品、蜜餞、水果罐頭、果凍等一般固體試樣稱取樣品2g（精確至0.01g）于50mL離心管中,加20%甲醇溶液30mL，旋渦混勻2min，超聲提取25min（55℃）,超聲過程中每5min振搖1次離心管,取出靜置至室溫，以7500r/min的速度離心5min,將上層清液轉(zhuǎn)移至另一支50mL離心管中。在殘?jiān)性偌尤?0%甲醇溶液15mL，重復(fù)以上提取過程，合并兩次提取液,加水至刻度,搖勻，經(jīng)0.45um微孔濾膜過濾，進(jìn)高效液相色譜儀分析。奶粉、面包、糕點(diǎn)、腌漬的蔬菜等高蛋白類試樣稱取樣品2g（精確至0.01g）于50mL離心管中，加水30mL，旋渦混勻2min，超聲提取25min（55℃），超聲過程中每5min振搖1次離心管，取出靜置至室溫，加入1mL10%亞鐵氰化鉀和1mL20%乙酸鋅溶液，旋渦混勻2min，以7500r/min的速度離心5min，將上層清液轉(zhuǎn)移至另一支50mL離心管中。在殘?jiān)性偌尤?0%甲醇溶液15mL，重復(fù)以上提取過程，合并兩次提取液，加水至刻度,搖勻，經(jīng)0.45um微孔濾膜過濾，進(jìn)高效液相色譜儀分析。奶油、奶酪、冰淇淋、綠豆糕、堅(jiān)果、油炸類糕點(diǎn)等高脂類試樣稱取樣品2g（精確至0.01g）于50mL離心管中，加入正己烷10mL，旋渦混勻2min，60℃水浴加熱10min，加熱過程中不時(shí)振搖,取出靜置至室溫，加入20mL1%氨水溶液、1mL乙醇,旋渦混勻2min，超聲提取25min（55℃）,取出靜置至室溫，加入1mL10%亞鐵氰化鉀和1mL20%乙酸鋅溶液，旋渦混勻2min，以7500r/min的速度離心5min，將上層清液轉(zhuǎn)移至另一支50mL離心管中。在殘?jiān)性偌尤?0%甲醇溶液15mL重復(fù)以上提取過程，合并兩次提取液，加水至刻度，搖勻，經(jīng)0.45um微孔濾膜過濾，進(jìn)高效液相色譜儀分析。果汁、蔬菜汁等一般液體試樣量取樣品10ml于50mL容量瓶中，加水至刻度，搖勻，經(jīng)0.45um微孔濾膜過濾，進(jìn)高效液相色譜儀分析。果酒、葡萄酒、食醋等低pH值類試樣量取樣品10ml于50mL小燒杯中，用10氨水調(diào)pH值至中性，轉(zhuǎn)移至50mL容量瓶中,加少量水洗滌燒杯，洗液并入容量瓶中，加水至刻度，搖勻，經(jīng)0.45um微孔濾膜過濾，進(jìn)高效液相色譜儀分析。液態(tài)奶、風(fēng)味發(fā)酵乳、植物蛋白飲料等高蛋白類液體試樣量取樣品10ml于50mL離心管中，加水30mL，搖勻，超聲提取25min（55℃），超聲過程中每5min振搖1次離心管，取出靜置至室溫，加入1mL10%亞鐵氰化鉀和1mL20%乙酸鋅溶液，搖勻，以7500r/min的速度離心5min，將上層清液轉(zhuǎn)移至另一支50mL離心管中。在殘?jiān)性偌尤?0%甲醇溶液5mL重復(fù)以上提取過程，合并兩次提取液，加水至刻度，搖勻，經(jīng)0.45um微孔濾膜過濾，進(jìn)高效液相色譜儀分析。碳酸飲料等試樣量取樣品10ml于50mL小燒杯中，超聲脫氣10min，用10%氨水調(diào)pH值至中性，轉(zhuǎn)移至50mL容量瓶中，加少量水洗滌燒杯，洗液并入容量瓶中，加水至刻度，搖勻，經(jīng)0.45um微孔濾膜過濾，進(jìn)高效液相色譜儀分析。蛋黃醬、沙拉醬、果醬等半固體試樣稱取樣品5g（精確至0.01g）于50mL離心管中,加水30mL，60℃水浴加熱20min，取出靜置至室溫，用10%氨水調(diào)pH值至中性，超聲提取25min（55℃），超聲過程中每5min振搖1次離心管，取出靜置至室溫，以7500r/min的速度離心5min，將上層清液轉(zhuǎn)移至另一支50mL離心管中。在殘?jiān)性偌尤?mL水重復(fù)以上提取過程，合并兩次提取液，加水至刻度，搖勻，經(jīng)0.45um微孔濾膜過濾，進(jìn)高效液相色譜儀分析。測定液相色譜儀參考條件分析柱：ODS-C18(150mm×4.6mm,5μm)。流動(dòng)相：0.02mol/L硫酸銨(70%)+甲醇(20%)+乙腈(10%)。波長：214nm。流速：1mL/min。標(biāo)準(zhǔn)曲線：進(jìn)樣含安賽蜜（乙?；前匪徕洠?mg/L、4mg/L、8mg/L、16mg/L、20mg/L標(biāo)準(zhǔn)溶液各10uL，進(jìn)行HPLC分析，然后以峰面積為縱坐標(biāo)，以安賽蜜的含量為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。試樣測定：吸取6.2處理后的試樣溶液10μL進(jìn)行HPLC分析，測定其峰面積，從標(biāo)準(zhǔn)曲線查得測定液中乙?；前匪徕浀暮?。結(jié)果計(jì)算試樣中安賽蜜的含量按下式計(jì)算：XcVm式中:X--試樣中安賽蜜的含量，單位為毫克每千克或毫克每升(mg/kg或mg/L)；c--由標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得進(jìn)樣液中安賽蜜的量,單位為毫克每升(mg/L)；V--試樣稀釋液總體積,單位為毫升(mL)；m--試樣質(zhì)量,單位為克或毫升(g或mL)。計(jì)算結(jié)果保留三位有效數(shù)字。精密度在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測定結(jié)果的絕對差值不得超過算術(shù)平均值的10%。其他固體樣品以2g定容體積至50mL計(jì)算，安賽蜜的檢出限為0.004g/kg，定量限為0.01g/kg。半固體樣品以5g定容體積至50mL，安賽蜜的檢出限為0.002g/kg,定量限為0.005g/kg。液體樣品以10mL定容體積至50mL計(jì)算，安賽蜜的檢出限為0.001g/L，定量限為0.0025g/L。附錄A安賽蜜液相色譜圖及光譜圖1mg/L安賽蜜標(biāo)準(zhǔn)溶液液相色譜圖見圖A.1圖A.11mg/L安賽蜜標(biāo)準(zhǔn)溶液液相色譜圖安賽蜜在液相色譜儀二極管陣列檢測器上的光譜圖見圖A.2圖A.2安賽蜜光譜圖附錄B回收率分別以橄欖蜜餞、蒸蛋糕、油炸花生仁、楊梅汁、葡萄酒、酸奶、碳酸飲料、沙拉醬為代表樣品，添加3個(gè)濃度水平的安賽蜜標(biāo)準(zhǔn)液，每個(gè)添加水平重復(fù)測定6次，計(jì)算平均加標(biāo)回收率和相對標(biāo)準(zhǔn)偏差，結(jié)果見表B1。表B1不同產(chǎn)品的加標(biāo)回收率和精密度(n=6)樣品名稱添加水平/(mg/kg)回收率/%RSD/%491.42.8橄欖蜜餞1295.11.94096.51