ICS01.040.11CCSC10/29

T/HBIQAT/HBIQA0004—20249DeterminationofninetyrosinekinasedrugsinhumanurinebyHPLC-MS/MS2024-08-15發(fā)布 2024-10-15實(shí)施河北省檢驗(yàn)檢疫學(xué)會(huì)發(fā)布T/HBIQA0004T/HBIQA0004—2024前 言本文件按照GB/T1.1-2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別專利的責(zé)任。本文件由河北省檢驗(yàn)檢疫學(xué)會(huì)提出并歸口。本文件起草單位：河北省藥品醫(yī)療器械檢驗(yàn)研究院、河北醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院。本文件主要起草人：李揮、梁艷、李怡霖、宋莉、姜文。T/HBIQA0004T/HBIQA0004—2024PAGEPAGE7人體尿液中9種酪氨酸激酶類藥物含量的測(cè)定高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法范圍本文件規(guī)定了人體尿液中9種酪氨酸激酶類藥物含量的高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)方法。本文件適用于人體尿液中替萬替尼，LY2157299，索拉非尼，倫伐替尼，瑞戈非尼，卡博替尼，安羅替尼，阿帕替尼和吉非替尼含量的測(cè)定。規(guī)范性引用文件（包括所有的修改單適用于本文件。GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法。術(shù)語和定義本文件沒有需要界定的術(shù)語和定義。原理樣品用甲醇提取，提取液加入無水硫酸鎂鹽析后，用N-丙基乙二胺（PSA）吸附凈化，液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法測(cè)定，內(nèi)標(biāo)法定量。試劑和材料試劑和材料除另有規(guī)定外，試劑均為分析純，水為GB/T6682規(guī)定的一級(jí)水。甲醇：色譜純。乙酸乙酯：色譜純。丙酮：色譜純。甲酸：色譜純。乙酸：色譜純。乙腈：色譜純。無水硫酸鎂。N-丙基乙二胺（PSA）。5.1.9 標(biāo)準(zhǔn)品：替萬替尼（CAS號(hào)：1000873-98-2）、LY2157299（CAS號(hào)：700874-72-2）、索拉非AS2846173-0AS4171692-8AS7503703-7，（CAS號(hào)：1140909-48-3）（CAS號(hào)：1058156-90-3），（CAS：（CAS（CAS純度均≥98%。LY215729910.0110mL500μL50mL1μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)中間溶液于-20℃保存?zhèn)溆谩?0.01mg)10mL0.1mg/mL的內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液，于-20℃保存至分析。0.1%（體積分?jǐn)?shù)）1.0mL1L量瓶中，用水定容，混勻。儀器設(shè)備液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀：配備電噴霧離子源（ESI）。氮吹濃縮儀。渦旋震蕩儀。電子分析天平（0.01mg)。高速冷凍離心機(jī)（22000rpm）。試樣制備4℃3000r/min10待測(cè)。試驗(yàn)步驟試樣預(yù)處理取200μL尿液試樣（7）加入5mL離心管中，加入1.5mL乙腈進(jìn)行提取，并渦旋混勻30s。然后，分別加入350mgMgSO4和40mgPSA30s后，12000r/min離心101mL，經(jīng)0.22μm200μL含有內(nèi)標(biāo)的甲醇溶液作為復(fù)溶溶劑，待測(cè)定。標(biāo)準(zhǔn)曲線7步驟進(jìn)行處理，用得到的空白樣品提取液，將混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液逐級(jí)稀釋，得到倫伐替尼，索拉非尼，卡博替尼，阿帕替尼，吉非替尼，瑞戈拉非尼，安羅替尼：0.1、0.2、0.5、1、2、5、8和10ng/mL；替萬替尼和LY2157299：1、2、3、10、20、50、80100ng/mL的（100ng/mL）儀器參考條件液相色譜參考條件色譜柱：HypersilGOLDVANQUISHC18（100×2.1μm1.9μm），或相當(dāng)者。流動(dòng)相：A相為乙腈；B0.1%甲酸水溶液。柱溫：40℃。進(jìn)樣體積：5μL。流速：0.3mL/min1：表1梯度程序洗脫表時(shí)間/min流動(dòng)相A/%流動(dòng)相B/%015850.5158529556955715858158597030質(zhì)譜參考條件電離方式：電噴霧電離，正離子掃描模式。電噴霧電壓：3500V。45Arb。輔助氣流速：10Arb。離子傳輸溫度：325℃。霧化溫度：350℃。e.碰撞氣：氬氣。其他質(zhì)譜條件見附錄A。測(cè)定測(cè)定步驟將試樣溶液注入液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀中，得到9種酪氨酸酶類藥物的質(zhì)譜響應(yīng)值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線9（定性判定種組分峰的保留時(shí)間一致（變化范圍在±2.5%），并且所選擇的兩對(duì)子離子的質(zhì)荷比一致，樣品溶液2規(guī)定的范圍，則可判斷樣品中存在該組分。B。2定性確定時(shí)相對(duì)離子豐度的最大允許偏差相對(duì)離子豐度＞50%＞20%~50%＞10%~20%≤10%允許的相對(duì)偏差±20%±25%±30%±50%數(shù)據(jù)計(jì)算尿液樣本中各藥物濃度含量為：式中:Xi——試樣中待測(cè)組分含量，單位為納克每毫升(ng/mL)；ρi——由標(biāo)準(zhǔn)曲線得出的測(cè)試液中某種組分的質(zhì)量濃度，單位為納克每毫升(ng/mL)；V——定容體積，單位為毫升(mL)；K——稀釋倍數(shù)；V試樣——試樣體積，單位為毫升(mL)。空白試驗(yàn)取空白尿樣，按8.1-8.4測(cè)定步驟進(jìn)行。定量限和重復(fù)性方法定量限本方法索拉非尼的定量限為0.02ng/mL，卡博替尼的定量限為0.04ng/mL，吉非替尼的定量限為0.01ng/mL，瑞戈非尼的定量限為0.01ng/mL，安羅替尼的定量限為0.04ng/mL，替萬替尼的定量限為0.4ng/mL215299的定量限為0.2ng/mL，倫伐替尼的定量限為0.04ng/mL，阿帕替尼的定量限為0.02ng/mL。重復(fù)性在重復(fù)性實(shí)驗(yàn)條件下獲得兩次獨(dú)立實(shí)驗(yàn)結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過算數(shù)平均值的15%。附錄A（資料性附錄）表A.1目標(biāo)物的質(zhì)譜參數(shù)及參考保留時(shí)間化合物母離子(m/z)子離子(m/z)碎裂電壓(V)碰撞電壓(eV)參考保留時(shí)間(min)倫伐替尼427.1370.1a/312.010227/432.80索拉非尼465.1252.1a/270.111333/243.67卡博替尼502.2323.1a/297.113937/353.10瑞戈非尼483.1270.1a/288.112333/243.72阿帕替尼398.2212.1a/184.18126/373.03吉非替尼447.1128.1a/100.17524/472.74安羅替尼408.2339.1a/304.16018/402.78替萬替尼370.1253.1a/158.16521/223.46LY2157299370.1336.1a/325.