2024-2025學(xué)年安徽省東至二中下學(xué)期高三年級七調(diào)考試（月考卷）生物試題考生請注意：1．答題前請將考場、試室號、座位號、考生號、姓名寫在試卷密封線內(nèi)，不得在試卷上作任何標記。2．第一部分選擇題每小題選出答案后，需將答案寫在試卷指定的括號內(nèi)，第二部分非選擇題答案寫在試卷題目指定的位置上。3．考生必須保證答題卡的整潔?？荚嚱Y(jié)束后，請將本試卷和答題卡一并交回。一、選擇題：（共6小題，每小題6分，共36分。每小題只有一個選項符合題目要求）1．科學(xué)家把在生物體不同類型的細胞中都表達的基因稱為管家基因，將只在某類細胞中特異性表達的基因稱為奢侈基因?；谝陨隙x判斷，下列說法正確的是（）A．人體的胰島素基因、核糖體蛋白基因都是管家基因B．生物體各種細胞具有相同的管家基因和不同的著侈基因C．細胞分化的本質(zhì)是不同的細胞表達了不同的奢侈基因D．奢侈基因是管家基因通過基因突變形成的等位基因2．下列關(guān)于人類遺傳病的敘述，錯誤的是（）A．人類因遺傳物質(zhì)改變引起的疾病不一定是遺傳病B．單基因遺傳病成人較青春期發(fā)病率高C．妊娠早期避免致畸劑，可以顯著降低遺傳病的發(fā)病率D．成人很少新發(fā)染色體病，但隨年齡增長多基因遺傳病的發(fā)病率顯著增加3．為了探究生長素的作用，將去尖端的玉米胚芽鞘切段隨機分成兩組，實驗組胚芽鞘上端一側(cè)放置含有適宜濃度IAA的瓊脂塊，對照組胚芽鞘上端同側(cè)放置不含IAA的瓊脂塊，兩組胚芽鞘下端的瓊脂塊均不含IAA。兩組胚芽鞘在同樣條件下，在黑暗中放置一段時間后，對照組胚芽鞘無彎曲生長，實驗組胚芽鞘發(fā)生彎曲生長，如圖所示。根據(jù)實驗結(jié)果判斷，下列敘述正確的是A．胚芽鞘b側(cè)的IAA含量與b＇側(cè)的相等B．胚芽鞘b側(cè)與胚芽鞘c側(cè)的IAA含量不同C．胚芽鞘b＇則細胞能運輸IAA而c＇側(cè)細胞不能D．瓊脂塊d＇從a＇中獲得的IAA量小于a＇的輸出量4．一種感染螨蟲的新型病毒，研究人員利用放射性同位素標記的方法，以體外培養(yǎng)的螨蟲細胞等為材料，設(shè)計可相互印證的甲、乙兩組實驗，以確定該病毒的核酸類型。下列有關(guān)實驗設(shè)計思路的敘述錯誤的是A．應(yīng)選用35S、32P分別標記該病毒如蛋白質(zhì)和核酸B．先將甲、乙兩組螨蟲細胞分別培養(yǎng)在含同位素標記的尿嘧啶或胸腺嘧啶的培養(yǎng)基中C．再將病毒分別接種到含有甲、乙兩組螨蟲細胞的培養(yǎng)液中D．一定時間后離心并收集、檢測病毒的放射性，以確定病毒的類型5．雄果蠅的三對基因Bb、Vv、rr分別位于II、II、IV號染色體上，以下說法正確的是（）A．一個精原細胞通過減數(shù)分裂形成兩種基因型的精子B．減數(shù)分裂時這6個基因各自分離，獨立進入6個不同的精子中C．形成配子的過程中，這三對染色體的非同源染色體自由組合方式有4種D．這三對基因在染色體上，所控制性狀的遺傳與性別相聯(lián)系6．細胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)是指細胞通過受體感受信息分子的刺激，經(jīng)胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)轉(zhuǎn)換，從而影響細胞生物學(xué)功能的過程。下圖表示兩種細胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)形式，有關(guān)敘述錯誤的是A．甲圖的激素可以表示性激素，以自由擴散的方式穿膜，與細胞膜的基本支架有關(guān)B．甲圖可說明信息分子可影響基因表達過程，②③的堿基互補配對方式不同C．甲圖中的d基本骨架為獨特的雙螺旋結(jié)構(gòu)，e為mRNA可作為翻譯的模板D．乙圖可以反應(yīng)細胞膜具有細胞間的信息交流的功能，圖中的受體化學(xué)本質(zhì)為糖蛋白二、綜合題：本大題共4小題7．（9分）同學(xué)們利用葡萄汁進行發(fā)酵實驗時，發(fā)現(xiàn)有一瓶葡萄醋的風(fēng)味非常獨特，猜測里面可能有一種特殊的醋酸菌，為分離出該菌進行了一系列的實驗?請回答下列相關(guān)問題：（1）葡萄壓榨成葡萄汁密封后會產(chǎn)生酒味，起關(guān)鍵作用的微生物是____________，該發(fā)酵過程要注意進行排氣是因為______________________?此時向發(fā)酵液中滴加___________________，會觀察到灰綠色?（2）同學(xué)們?yōu)榱藢⑦@種特殊的醋酸菌分離出來，使用________________法將發(fā)酵液接種在培養(yǎng)基上，得到比較純凈的菌落?接種過程中，操作要在酒精燈火焰附近進行的原因是_________________?（3）同學(xué)們根據(jù)培養(yǎng)出來的菌落的發(fā)酵效果選出合適的菌種?為了反復(fù)使用這些菌種進行發(fā)酵，同學(xué)們使用______________法對細胞進行固定化，該方法常用的載體有______________________(寫出三種)等?8．（10分）根據(jù)孟德爾的兩對相對性狀的雜交實驗，回答下列問題：（1）在孟德爾兩對相對性狀的雜交實驗中，全為黃色圓粒，自交后代表現(xiàn)為9：3：3：1的性狀分離比，據(jù)此實驗孟德爾提出了對基因自由組合現(xiàn)象的假說，其主要內(nèi)容是____________________，并通過_____________實驗驗證其假說，從而總結(jié)出了該定律。（2）有人提出孟德爾運用自交的方法也可進行驗證，如下是相應(yīng)的實驗方案：方法一：將進行自交，如果出現(xiàn)9：3：3：1的分離比，即可證明假說。方法二：將自交得，讓植株分別自交，單株收獲種子，并單獨種植在一起成為一個株系。觀察并統(tǒng)計的性狀。①你認為方法一可行嗎？_____________（填“可行”或“不可行”），理由是：_______________________________________。②方法二實驗結(jié)果分析：出現(xiàn)9：3：3：1的分離比，且的雙顯性植株自交后代中出現(xiàn)3：1的占_____________，出現(xiàn)9：3：3：1的占_____________；單顯性植株自交后代中出現(xiàn)性狀分離的占_____________，中雙隱性植株自交后代全部表現(xiàn)一致，則孟德爾的假說成立，若未出現(xiàn)上述情況則不成立。③已知上述假設(shè)成立，實驗發(fā)現(xiàn)自交得到的過程中有1/4比例的個體不發(fā)生性狀分離；還有_____________（比例）的后代出現(xiàn)3：1的性狀分離比，與該比例相對應(yīng)的中共有___________種基因型。9．（10分）我國很多地區(qū)春季干旱少雨，為春季園林綠化帶來很大的影響。為挑選較耐早園林植物，研究人員對東北玉簪、大萼鐵線蓮、蛇莓三種當?shù)爻Ｒ妶@林植物進行一系列研究實驗結(jié)果如下圖所示。據(jù)圖回答下列問題：

（1）結(jié)合所學(xué)知識分析圖甲可推測隨著干旱天數(shù)的增加，不同植物葉肉細胞內(nèi)________化合物的合成量均呈現(xiàn)減少趨勢，從而導(dǎo)致凈光合速率降低。與正常條件下的同種植物相比，干旱條件下葉肉細胞中積累的有機物有________________（答出三種）。（2）分析圖甲的實驗結(jié)果可以看出：適于在較干旱地區(qū)做園林植物的是________，結(jié)合圖乙的實驗數(shù)據(jù)可知，這種植物通過增加可溶性糖等物質(zhì)的含量，來提高________________以達到保水抗旱的目的。由于蛇莓細胞中可溶性糖的含量比大萼鐵線蕨的含量低，而凈光合速率卻比較高，說明蛇莓還可能通過_______________________________來提高暗反應(yīng)速率，進而達到增加光合速率的目的。10．（10分）下圖是某基因工程中構(gòu)建重組質(zhì)粒的過程示意圖，載體質(zhì)粒P0具有四環(huán)素抗性基因（tetr）和氨芐青霉素抗性基因（ampr）。請回答下列問題：（1）EcoRⅤ酶切位點為，EcoRⅤ酶切出來的線性載體P1為_______末端。（2）用TaqDNA聚合酶進行PCR擴增獲得目的基因片段，其兩端各自帶有一個腺嘌呤脫氧核苷酸，載體P1用酶處理，在兩端各添加了一個堿基為_______的脫氧核苷酸，形成P2，P2和目的基因片段在_______酶作用下，形成重組質(zhì)粒P3。PCR技術(shù)中，使用的DNA聚合酶不同于一般生物體內(nèi)的DNA聚合酶，其最主要的特點是_____________________________________。

（3）PCR技術(shù)可以臨床用于診斷感染性疾病、腫瘤及遺傳病等，它是一種用于放大擴增特定的DNA片段的分子生物學(xué)技術(shù)，其標準步驟為_______、退火、__________。（4）重組質(zhì)粒中抗生素抗性基因的作用是為了___________________。若該目的基因是從cDNA文庫中分離獲取的蔗糖轉(zhuǎn)運蛋白基因，將重組質(zhì)粒導(dǎo)入喪失吸收蔗糖能力的大腸桿菌突變體中，然后在_______為唯一含碳營養(yǎng)物質(zhì)的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，以完成目的基因表達的初步檢測。11．（15分）通過人工氣候箱控制不同溫度條件，研究巨柏幼苗在各設(shè)定溫度下的生長發(fā)育及光合作用變化，以期為巨柏優(yōu)質(zhì)壯苗培育奠定基礎(chǔ)。下圖為不同溫度條件下巨柏幼苗的凈光合速率和氣孔導(dǎo)度測量結(jié)果。回答相關(guān)問題：（1）巨柏幼苗在1．5℃下時的凈光合速率較低，請根據(jù)實驗結(jié)果從“酶活性”和“氣孔導(dǎo)度”兩個角度作出合理解釋：_______、________。（2）與2．5℃時的凈光合速率對比分析可知，_________（填“氣孔導(dǎo)度”或“酶活性”）對1．5℃時的凈光合速率限制作用更明顯。（3）能否由實驗結(jié)果判斷3．5℃和21．5℃時巨柏幼苗單位時間內(nèi)有機物生產(chǎn)量大小的關(guān)系？____（填“能”或“不能”），原因是_________。

參考答案一、選擇題：（共6小題，每小題6分，共36分。每小題只有一個選項符合題目要求）1、C【解析】

“管家基因”是在所有細胞中都表達的基因，其表達的產(chǎn)物用以維持細胞自身正常的新陳代謝；“奢侈基因”是指導(dǎo)合成組織特異性蛋白的基因，只在特定的細胞內(nèi)表達，其表達形成細胞功能的多樣性。由此可見，細胞分化是奢侈基因選擇性表達的結(jié)果。據(jù)此答題。【詳解】A、人體的胰島素基因只在胰島B細胞中表達，屬于奢侈基因，A錯誤；B、生物體各種細胞管家基因和奢侈基因都相同，只是奢侈基因發(fā)生選擇性表達，B錯誤；C、細胞分化的本質(zhì)是不同的細胞奢侈基因選擇性表達的結(jié)果，C正確；D、奢侈基因和管家基因都屬于細胞內(nèi)的正?；颍珼錯誤。故選C。2、C【解析】

1.遺傳病是指遺傳物質(zhì)改變而引起的疾病，包括單基因遺傳病、多基因遺傳病和染色體異常遺傳病。2.各類遺傳病在人體不同發(fā)育階段的發(fā)病風(fēng)險：染色體異常遺傳病在胎兒期發(fā)病率較高，在出生后發(fā)病率顯著降低；多基因遺傳病從胎兒期到出生后發(fā)病率逐漸升高，出生到青春期逐漸降低，在由青春期到成年發(fā)病率顯著增加；單基因遺傳病在出生后發(fā)病率迅速達到高峰，隨著年齡的增長逐漸降低，青春期后略有回升【詳解】A、人類因生殖細胞或受精卵中遺傳物質(zhì)的改變導(dǎo)致的疾病才是遺傳病，體細胞中遺傳物質(zhì)改變不一定會遺傳，A正確；B、青春期時各種遺傳病的發(fā)病率都處于較低水平，對于單基因遺傳病成人發(fā)病率比青春期發(fā)病率高，B正確；C、妊娠早期避免致畸劑可以降低畸形胎的產(chǎn)生率，但不能降低遺傳病的發(fā)病率，C錯誤；D、出生后染色體病風(fēng)險明顯低于胎兒期，在成人中發(fā)病風(fēng)險更低，但多基因遺傳病在成年之后，隨年齡增長發(fā)病率顯著增加，D正確。故選C。3、D【解析】試題分析：分析圖示可知，瓊脂塊a中不含生長素，胚芽鞘不生長也不彎曲，故瓊脂塊d中不含生長素；瓊脂塊a′中含生長素，胚芽鞘向放置瓊脂塊a′的對側(cè)彎曲生長，a′中的生長素部分用于胚芽鞘的生長，部分運輸?shù)江傊瑝Kd′；瓊脂塊a中不含生長素，瓊脂塊a′中含生長素，故胚芽鞘b側(cè)的IAA含量比b′側(cè)的少，生長較慢，A錯誤；瓊脂塊a中不含生長素，胚芽鞘b側(cè)與胚芽鞘c側(cè)的IAA含量相同，B錯誤；胚芽鞘b′側(cè)細胞和c′側(cè)細胞都能運輸IAA，C錯誤；瓊脂塊a′中的生長素部分用于胚芽鞘的生長，部分運輸?shù)江傊瑝Kd′．因此瓊脂塊d′從a′中獲得IAA量小于a′的輸出量，D正確。點睛：解答本題的關(guān)鍵在于對圖形的分析，特別是對生長素運輸?shù)睦斫馐菍x項分析的首要條件。4、A【解析】根據(jù)題干信息分析，本實驗的目的是確定病毒核酸的類型是DNA還是RNA，因此應(yīng)該分別標記DNA和RNA特有的堿基，即分別用放射性同位素標記尿嘧啶和胸腺嘧啶，A錯誤；由于病毒是沒有細胞結(jié)構(gòu)的，必須寄生于活細胞中，因此先將甲、乙兩組螨蟲細胞分別培養(yǎng)在含同位素標記的尿嘧啶或胸腺嘧啶的培養(yǎng)基中，B正確；再將病毒分別接種到含有甲、乙兩組螨蟲細胞的培養(yǎng)液中，C正確；一定時間后離心并收集、檢測病毒的放射性，以確定病毒的類型，D正確。5、A【解析】

該雄果蠅的一個精原細胞經(jīng)過減數(shù)分裂產(chǎn)生四個精子，其中兩個精子的基因型相同，另兩個精子也相同，但兩組精子共同組成為雄果蠅的基因型；減數(shù)分裂過程中三對基因分別分離，但彼此自由組合進入到配子中；形成配子的過程中，同源染色體分離并且非同源染色體自由組合，因此組合方式一共有23=8種；三對基因都位于常染色體上，因此所控制的性狀與性別無關(guān)?！驹斀狻緼、一個精原細胞通過減數(shù)分裂形成兩種基因型的精子，A正確；B、減數(shù)分裂時這三對基因各自分離，獨立進入不同的精子中，B錯誤；C、形成配子的過程中，這三對染色體彼此分離和自由組合產(chǎn)生的組合一共有8種，C錯誤；D、這三對基因在常染色體上，所控制性狀與性別無關(guān)，D錯誤。故選A。6、C【解析】

分析圖甲，某激素可以進入細胞內(nèi)與胞內(nèi)受體結(jié)合，從而影響核基因的表達。該激素可以表示脂溶性激素，如性激素，性激素可以以自由擴散的方式進入細胞，這與細胞膜的基本骨架磷脂雙分子層有關(guān)。圖中①表示自由擴散進入，②表示翻譯，③表示轉(zhuǎn)錄，d表示DNA，e表示mRNA，f表示蛋白質(zhì)（多肽）。乙圖可以反應(yīng)細胞膜具有細胞間的信息交流的功能，圖中的受體化學(xué)本質(zhì)為糖蛋白。【詳解】A.性激素屬于脂溶性激素，以自由擴散方式穿膜，與細胞膜的基本支架磷脂雙分子層有關(guān)，A正確；B.甲圖可說明信息分子可影響基因表達過程，其中②表示翻譯，③表示轉(zhuǎn)錄，它們的堿基互補配對方式不同，B正確；C.甲圖中的d（DNA）是以脫氧核糖與磷酸交替連接為基本骨架，C錯誤；D.乙圖表示細胞膜具有細胞間的信息交流的功能，圖中的受體化學(xué)本質(zhì)為糖蛋白，D正確。故選C。二、綜合題：本大題共4小題7、酵母菌酵母菌進行發(fā)酵（無氧呼吸）的過程會產(chǎn)生CO2，會使發(fā)酵罐的氣壓過大酸性的重鉻酸鉀溶液平板劃線或稀釋涂布平板酒精燈火焰附近能形成無菌區(qū)，防止接種過程中有雜菌污染包埋明膠、瓊脂糖、海藻酸鈉、醋酸纖維素和聚丙烯酰胺【解析】

1、參與果酒制作的微生物是酵母菌，其新陳代謝類型為異養(yǎng)兼性厭氧型．果酒制作的原理：（1）在有氧條件下，反應(yīng)式如下：；（2）在無氧條件下，反應(yīng)式如下：。2、參與果醋制作的微生物是醋酸菌，其新陳代謝類型是異養(yǎng)需氧型；果醋制作的原理：當氧氣、糖源都充足時，醋酸菌將葡萄汁中的果糖分解成醋酸；當缺少糖源時，醋酸菌將乙醇變?yōu)橐胰?，再將乙醛變?yōu)榇姿帷?、固定化技術(shù)包括包埋法、物理吸附法和化學(xué)結(jié)合法（交聯(lián)法）；由于細胞相對于酶來說更大，難以被吸附或結(jié)合，因此多采用包埋法；酶小容易從包埋的材料漏出，一般采用化學(xué)結(jié)合法和物理吸附法?！驹斀狻浚?）酒精的產(chǎn)生是利用酵母菌的無氧呼吸；酵母菌在發(fā)酵過程中會產(chǎn)生CO2，使發(fā)酵罐的氣壓過大，所以要注意排氣；酒精和酸性的重鉻酸鉀溶液反應(yīng)生成灰綠色。（2）分離菌種的方法有平板劃線法和稀釋涂布平板法；酒精燈火焰附近能形成無菌區(qū)，防止接種過程中有雜菌污染，所以接種過程需要在酒精燈火焰附近。（3）對細胞固定化采用包埋法，包埋法的材料有明膠、瓊脂糖、海藻酸鈉、醋酸纖維素和聚丙烯酰胺。本題以果酒和果醋的制作為材料，考查其原理，同時考查了微生物的培養(yǎng)與分離、固定化細胞，需要考生識記相關(guān)知識。8、在產(chǎn)生配子時，每對遺傳因子彼此分離，不同對的遺傳因子可以自由組合測交不可行讓進行自交只是對實驗進行了重復(fù)，并不能證明假說4/94/92/31/24【解析】

基因自由組合定律的實質(zhì)：進行有性生殖的生物在進行減數(shù)分裂產(chǎn)生配子的過程中，等位基因隨同源染色體分離而分離的同時，非同源染色體上的非等位基因進行自由組合；按照自由組合定律，具有兩對等位基因的個體產(chǎn)生的配子的基因型是四種，比例是1：1：1：1，可以用測交實驗進行驗證?！驹斀狻浚?）孟德爾通過兩對相對性狀的雜交實驗提出了基因自由組合現(xiàn)象的假說，其主要內(nèi)容是在產(chǎn)生配子時，每對遺傳因子彼此分離，不同對的遺傳因子可以自由組合，并用假說內(nèi)容對提出的問題進行了解釋，進而通過測交實驗驗證其假說，總結(jié)出了該定律。（2）①讓進行自交只是對實驗進行了重復(fù)，并不能證明假說，因此方法一不可行。②中出現(xiàn)了9種基因型，分別為1YYRR、2YyRR、2YYRr、4YyRr、2yyRr、1yyRR、2Yyrr、1YYrr、1yyrr，的分離比為9：3：3：1，用方法二進行驗證，如果的雙顯性植株自交后代中出現(xiàn)3：1的占4/9，即2YyRR和2YYRr；出現(xiàn)9：3：3：1的占4/9，即4YrRr；單顯性植株自交后代中出現(xiàn)性狀分離的占2/3，即2yyRr、2Yyrr；中雙隱性植株自交后代全部表現(xiàn)一致，則孟德爾的假說成立，若未出現(xiàn)上述情況則不成立。③根據(jù)②中的分析可知，實驗發(fā)現(xiàn)自交得到的過程中有1/4比例的個體（即四種純種）不發(fā)生性狀分離；還有1/2的后代出現(xiàn)3：1的性狀分離比，與該比例相對應(yīng)的中共有4種基因型，分別為YyRR、YYRr、Yyrr和yyRr。熟知兩對相對性狀雜交實驗的研究過程是解答本題的關(guān)鍵，熟知相關(guān)的基因型以及各種基因型自交產(chǎn)生的性狀分離比是解答本題的另一關(guān)鍵！9、C3（三碳）ATP、[H]（NADPH）、C5（五碳化合物）蛇莓細胞液濃度（細胞液滲透壓）提高光合作用相關(guān)酶的活性（調(diào)節(jié)氣孔開度增加二氧化碳吸收量等）【解析】

分析題圖：隨著干旱天數(shù)的增加，為防止水分過度蒸發(fā)，氣孔關(guān)閉，二氧化碳吸收量減少，造成植物光合作用速率下降。圖甲的實驗結(jié)果可以看出適于在較干旱地區(qū)做園林植物的是蛇莓；圖乙的實驗數(shù)據(jù)可知，植物通過增加可溶性糖等物質(zhì)的含量，來提高細胞液濃度以達到保水抗旱的目的。【詳解】（1）隨著干旱天數(shù)的增加，為防止水分過度蒸發(fā)，氣孔關(guān)閉，二氧化碳吸收量減少，葉肉細胞內(nèi)C3化合物的含量下降，ATP、[H]、C5化合物造成積累。（2）在整個實驗過程中，蛇莓的凈光合速率一直高于其他兩種植物，比較適于做干旱地區(qū)的綠植。歸根結(jié)底，干旱條件不光合速率降低是由于細胞內(nèi)水分減少造成的，增加細胞液濃度可提高細胞的保水能力。從圖乙中可以看出，蛇莓細胞中可溶性糖濃度并不是最高，但是凈光合速率最高，說明除了通過增加細胞液濃度提高細胞的保水能力進行抗旱外，還應(yīng)該有其他機制：如通過提高光合作用相關(guān)酶的活性、改變脫落酸等激素的含量（來調(diào)節(jié)氣孔開度）、利用酶促和非酶促系統(tǒng)清除氧自由基（保護膜結(jié)構(gòu)的完整性、保護色素不被分解，光反應(yīng)速率加快，也會間接影響暗反應(yīng)速率等）。利用實驗思想，結(jié)合所學(xué)知識分析題中不同植物同一環(huán)境下的不同表現(xiàn)的可能原因，本題主考查信息提取和分析處理能力。10、平胸腺嘧啶（T）DNA連接酶耐高溫變性延伸鑒別和篩選含目的基因的細胞蔗糖【解析】

1、基因表達載體的基本結(jié)構(gòu)包括復(fù)制原點、目的基因、標記基因、啟動子、終止子等。其中標記基因的作用是為了鑒定受體細胞中是否含有目的基因，從而將含有目的基因的受體細胞篩選出來，常用的標記基因是抗生素抗性基因。根據(jù)題干信息和圖形分析，P0是載體質(zhì)粒，其含有的氨芐青霉素抗性基因（ampr）和四環(huán)素抗性基因（tetr）都屬于標記基因，可以用檢測目的基因是否導(dǎo)入受體細胞；EcoRV酶為限制酶，其切割質(zhì)粒后悔破壞了四環(huán)素抗性基因（tetr）。2、PCR由變性--退火--延伸三個基本反應(yīng)步驟構(gòu)成：①模板DNA的變性：模板DNA經(jīng)加熱至94℃左右一定時間后，使模板DNA雙鏈或經(jīng)PCR擴增形成的雙鏈DNA解離，使之成為單鏈，以便它與引物結(jié)合，為下輪反應(yīng)做準備；②模板DNA與引物的退火(復(fù)性)：模板DNA經(jīng)加熱變性成單鏈后，溫度降至55℃左右，引物與模板DNA單鏈的互補序列配對結(jié)合；③引物的延伸：DNA模板--引物結(jié)合物在Taq酶的作用下，以dNTP為反應(yīng)原料，靶序列為模板，按堿基配對與半保留復(fù)制原理，合成一條新的與模板DNA鏈互補的半保留復(fù)制鏈?！驹斀狻浚?）根據(jù)題意分析，EcoRV酶識別的序列是-GATATC-，并且兩條鏈都在識別序列的堿基的中軸線T與A之間進行切割，因此其切出來的線性載體P1為平末端。（2）據(jù)圖分析，目的基因兩側(cè)為粘性末端，且漏出的堿基為A，則在載體P1的兩端需要個加一個胸腺嘧啶堿基T形成具有粘性末端的載體P2，再用DNA連接酶將P2與目的基因連接起來形