武昌實驗中學(xué)2025年高三下學(xué)期階段性測試（四）生物試題注意事項：1．答卷前，考生務(wù)必將自己的姓名、準考證號、考場號和座位號填寫在試題卷和答題卡上。用2B鉛筆將試卷類型（B）填涂在答題卡相應(yīng)位置上。將條形碼粘貼在答題卡右上角"條形碼粘貼處"。2．作答選擇題時，選出每小題答案后，用2B鉛筆把答題卡上對應(yīng)題目選項的答案信息點涂黑；如需改動，用橡皮擦干凈后，再選涂其他答案。答案不能答在試題卷上。3．非選擇題必須用黑色字跡的鋼筆或簽字筆作答，答案必須寫在答題卡各題目指定區(qū)域內(nèi)相應(yīng)位置上；如需改動，先劃掉原來的答案，然后再寫上新答案；不準使用鉛筆和涂改液。不按以上要求作答無效。4．考生必須保證答題卡的整潔?？荚嚱Y(jié)束后，請將本試卷和答題卡一并交回。一、選擇題：（共6小題，每小題6分，共36分。每小題只有一個選項符合題目要求）1．果蠅的眼色有一種隱性突變體——猩紅眼（r1r1）。研究者獲得了兩個新的朱砂眼隱性突變體——朱砂眼a（r2r2）和朱砂眼b（r3r3），做了如下雜交實驗。據(jù)此分析不合理的是組別親本組合F1Ⅰ朱砂眼a×猩紅眼野生型Ⅱ朱砂眼a×朱砂眼b朱砂眼Ⅲ朱砂眼b×猩紅眼野生型A．r1和r2不是等位基因B．r2和r3是等位基因C．r1和r3一定位于非同源染色體上D．III組F1的自交后代一定出現(xiàn)性狀分離2．下列關(guān)于生長素及其類似物的敘述正確的是A．缺乏氧氣會影響植物體內(nèi)生長素的極性運輸B．植物向光生長能夠說明生長素作用的兩重性C．在花期噴灑高濃度的2,4-D可防止落花落果D．用生長素類似物處理二倍體番茄幼苗，可得到多倍體3．顱面骨發(fā)育不全癥是由常染色體上顯性基因A控制的一種單基因遺傳病，其中基因型為AA的個體全部患??；基因型為Aa的個體有90%患病，10%正常；基因型為aa的個體全部正常。下圖為某家族該病的系譜圖，其中Ⅰ1、Ⅱ1不含有致病基因。不考慮染色體變異和基因突變，下列敘述正確的是（）A．Ⅰ2和Ⅲ3患病個體的基因型相同B．Ⅱ1與Ⅱ2再生一個孩子，患該病的概率為45%C．Ⅲ6與一個表現(xiàn)型正常的男性婚配，后代均不會患該病D．調(diào)查顱面骨發(fā)育不全癥的發(fā)病率時應(yīng)選擇患者家系進行調(diào)查4．下圖表示某動物一個精原細胞分裂時染色體配對時的一種情況，A~D為染色體上的基因，下列分析錯誤的是A．該變異發(fā)生在同源染色體之間故屬于基因重組B．該細胞減數(shù)分裂能產(chǎn)生3種基因型的精細胞C．C1D2和D1C2轉(zhuǎn)錄翻譯產(chǎn)物可能發(fā)生改變D．C1D2和D1C2可能成為C、D的等位基因5．如圖表示人體唾液腺細胞中發(fā)生的生理過程，下列有關(guān)說法錯誤的是A．圖中的②與⑥是同種物質(zhì)B．若②中A+U占36％，則①對應(yīng)片段中G占32％C．圖中的⑤能對淀粉水解起催化作用D．圖中的④只能識別并轉(zhuǎn)運一種氨基酸6．某生物興趣小組觀察了幾種生物不同分裂時期的細胞，并根據(jù)觀察結(jié)果繪制出如下圖形。下列與圖形有關(guān)的說法正確的是()①甲圖所示細胞處于有絲分裂后期，在此時期之前細胞中央出現(xiàn)了赤道板②甲圖所示細胞中，著絲點分裂后正常形成的2個子染色體攜帶遺傳信息相同③乙圖所示細胞可能處于減數(shù)第一次分裂后期，此階段發(fā)生同源染色體的分離④乙圖所示細胞中某一極的染色體數(shù)目可能為2N⑤丙圖結(jié)果可能來自于植物的雄蕊和雌蕊以及動物精巢等部位細胞⑥如果丙圖表示精巢內(nèi)的幾種細胞，則C組細胞可發(fā)生聯(lián)會并產(chǎn)生四分體A．②③⑤ B．①④⑥ C．②③⑤⑥ D．②③④⑤⑥二、綜合題：本大題共4小題7．（9分）為研究胰島素和生長激素對動物細胞克隆形成率的影響。請根據(jù)提供的實驗材料，以細胞數(shù)為檢測指標，提出實驗思路，并預(yù)測實驗結(jié)果。材料與用具：未經(jīng)克隆的小鼠肝細胞系、動物細胞培養(yǎng)液、胰島素溶液、生長激素溶液、胰蛋白酶、卡氏瓶、CO2培養(yǎng)箱、滋養(yǎng)細胞、血細胞計數(shù)板等。（要求與說明：分離單細胞和細胞計數(shù)的具體操作過程不作要求；培養(yǎng)過程中不更換培養(yǎng)液；培養(yǎng)液成分變化不利于細胞生長不作要求；不考慮加入激素后的體積變化等誤差。實驗條件適宜）請回答：（1）完善實驗思路：（實驗分組用表格表示）①取卡氏瓶若干個，均分為4組，編號為A、B、C、D，每組設(shè)置多個重復(fù)樣本。②實驗分組_____（2）預(yù)期結(jié)果與結(jié)論若胰島素和生長激素均能提高克隆形成率，且共同作用效果更佳，請設(shè)計一個坐標系，并以細胞數(shù)變化曲線示意圖表示相應(yīng)結(jié)果。______（3）分析和討論：①兩種激素均能提高克隆形成率的原因是，胰島素對維持_______是不可缺少的，生長激素具有______________的作用。②本實驗所用的滋養(yǎng)細胞是使用射線處理_______的小鼠成纖維細胞。8．（10分）癌細胞表面蛋白“PDL-1”與T細胞表面蛋白“PD-1”特異性結(jié)合后，可抑制T細胞活性并啟動其凋亡，導(dǎo)致腫瘤細胞發(fā)生免疫“逃逸”。研究者對“PD-1”基因進行克隆、表達及生物學(xué)活性鑒定，為制備抗體打基礎(chǔ)。研究中所用引物α和β堿基序列見圖1、幾種常用限制酶名稱及識別序列與酶切位點見圖2：α鏈：5'-TCACTCGAGACCATGCAGATCCCACAGGCGCCC-3'β鏈：5'-CTCGAATTCTCAGAGGGGCCAAGAGCAGTG-3'圖1（1）首先提取細胞中的mRNA反轉(zhuǎn)錄生成____________________作為模板；設(shè)計含有不同的限制酶切點的α和β序列為引物，通過____________________技術(shù)擴增目的基因。（2）選用圖1中的兩種名稱分別為____________________的限制酶將“pIRES2-EGFP質(zhì)粒”載體進行雙切，再用DNA連接酶將其與目的基因拼接，構(gòu)建表達載體。該表達載體的組成，除了目的基因、標記基因抗卡那霉素基因外，還必須具有____________________等。（3）而后一定溫度下，與經(jīng)過處理的感受態(tài)大腸桿菌混合培養(yǎng)在含有_____________培養(yǎng)基中，可篩選出已經(jīng)完成轉(zhuǎn)化的大腸桿菌，繼續(xù)培養(yǎng)該種大腸桿菌以擴增重組DNA。（4）將擴增后的“pIRES2-EGFP載體/PD-1重組DNA”轉(zhuǎn)入可高度表達外源基因的原代293T細胞。一段時間后，為確定PD-1基因是否表達，檢測細胞膜表面是否具有____________________。為判斷其是否具有生物學(xué)活性和功能，則可裂解293T細胞，提取該物質(zhì)看能否與____________________發(fā)生結(jié)合，從而阻斷“PD-1與PDL-1信號通路”。研究中還會有一步驟，只將“pIRES2-EGFP載體”轉(zhuǎn)入293T細胞，其目的是_________________________。9．（10分）近年來，網(wǎng)絡(luò)外賣在我國迅速發(fā)展，外賣餐食的微生物污染狀況也越來越多地受到人們的關(guān)注。研究人員通過實驗探究了同種外賣餐食送達時的溫度與其中的大腸桿菌、金黃色葡萄球菌的數(shù)量關(guān)系。請回答下列有關(guān)問題：（1）測量送達餐食的溫度時，應(yīng)測量餐食________（填“表面”或“中心”）部位的溫度。（2）通常采用固體培養(yǎng)基培養(yǎng)細菌并進行計數(shù)，在配制培養(yǎng)基時需加入________作為凝固劑，并用________法進行接種。（3）檢測金黃色葡萄球菌時，通常在培養(yǎng)基中加入一定量的NaCl，像這樣允許特定種類微生物生長的培養(yǎng)基稱為________培養(yǎng)基。為避免培養(yǎng)基中的菌落數(shù)太多影響計數(shù)，可對樣品進行適度的________。為了保證結(jié)果準確，一般選擇菌落數(shù)為________范圍的平板進行計數(shù)。統(tǒng)計的菌落數(shù)往往會比活菌的實際數(shù)目低，原因是________。（4）實驗結(jié)果顯示，送達溫度與菌落數(shù)量呈負相關(guān)，因此送達溫度較________的餐食，合格率較高。10．（10分）腎上腺糖皮質(zhì)激素是由腎上腺皮質(zhì)分泌的一種激素，在生物體的生命活動調(diào)節(jié)中起重要作用。如圖是腎上腺糖皮質(zhì)激素的分泌調(diào)節(jié)示意圖，請回答下列問題。（1）圖中“CRH”的中文名稱是__________，其分泌受到圖中__________物質(zhì)的調(diào)節(jié)。（2）從應(yīng)激刺激到糖皮質(zhì)激素的分泌過程屬于__________調(diào)節(jié)，腺垂體能接受CRH的調(diào)節(jié)是因為__________。（3）氫化可地松是糖皮質(zhì)類激素，具有快速、強大而非特異性的抗炎作用。異體蛋白注射到大鼠足跖內(nèi)，可在短時間內(nèi)引起組織的急性炎癥，炎癥部位明顯腫脹，體積增大?，F(xiàn)有可供小鼠注射的生理鹽水、一定濃度的氫化可地松溶液、蛋清等試劑，為驗證氫化可地松的抗炎作用，請寫出實驗思路并預(yù)期實驗結(jié)果____________________。11．（15分）材料一記者從福建省三明市科技局獲悉，近日，全國首個治療性單克隆抗體中試公共服務(wù)平臺項目在三明高新區(qū)金沙園開工建設(shè)。項目建成后，將用于研發(fā)創(chuàng)新型單克隆抗體藥物，成為腫瘤治療史上一個新的里程碑。材料二在一項新的研究中，來自以色列耶路撒冷希伯來大學(xué)、美國哥倫比亞大學(xué)醫(yī)學(xué)中心和紐約干細胞基金會研究所的研究人員成功地產(chǎn)生一種新類型的胚胎干細胞，它只攜帶單拷貝人類基因組，而不是通常在正常干細胞中發(fā)現(xiàn)的兩個拷貝人類基因組。（1）結(jié)合材料一回答下列問題：①雜交瘤細胞的特點是既能___，又能_______________。②單克隆抗體最主要的優(yōu)點在于它的_________________________。③單克隆抗體的兩個主要用途是：__________與________________。④惡性腫瘤細胞表面存在著一些異于普通健康細胞的_______，這些成分可以作為單克隆抗體的良好靶點。（2）結(jié)合材料二回答下列問題：①胚胎干細胞在功能上，具有_____________。②ES細胞可以增殖而不發(fā)生分化，對它可以進行冷凍保存，也可以進行___________。③人類基因組計劃測定的是____條染色體上DNA的堿基序列。

參考答案一、選擇題：（共6小題，每小題6分，共36分。每小題只有一個選項符合題目要求）1、C【解析】

基因分離定律的實質(zhì)：等位基因隨同源染色體的分開而分離；時間：減數(shù)第一次分裂后期?；蜃杂山M合定律的實質(zhì)：非同源染色體上的非等位基因自由組合；時間：減數(shù)第一次分裂后期?！驹斀狻緼、根據(jù)第Ⅰ組雜交朱砂眼a和猩紅眼雜交，子代全為野生型，說明朱砂眼a和猩紅眼是由不同的基因控制的，第Ⅰ組朱砂眼a基因型為R1R1r2r2，第Ⅲ組猩紅眼基因型為r1r1R2R2，子代全為R1r1R2r2，表現(xiàn)為野生型，因此r1和r2不是等位基因，A正確；B、根據(jù)第Ⅱ組雜交結(jié)果，朱砂眼a和朱砂眼b雜交，子代全為朱砂眼，說明朱砂眼ab實際上是一種性狀，因此r2和r3是等位基因，B正確；C、根據(jù)第Ⅲ組雜交朱砂眼b和猩紅眼雜交，子代全為野生型，說明了r1和r3是非等位基因，但由于一條染色體上有多個基因，所以r1和r3可能在一對同源染色體上，C錯誤；D、根據(jù)C項的分析親代Ⅲ組雜交朱砂眼b的基因型為R1R1r3r3，猩紅眼的基因型為r1r1R3R3，所以子代全為R1r1R3r3，自交后代一定出現(xiàn)性狀分離，D正確。故選C。本題要深刻理解基因分離定律和自由組合定律的實質(zhì)，如果是由1對基因控制的則子代與親代相同，如果是兩對基因則為野生型。2、A【解析】

A、生長素的極性運輸是一種主動運輸，需要能量和載體，植物體的能量主要來自有氧呼吸，所以缺乏氧氣會影響植物體內(nèi)生長素的極性運輸，A正確；B、生長素的兩重性是指低濃度促進生長，高濃度抑制生長。植物向光生長的原因是單側(cè)光照射導(dǎo)致莖尖端背光側(cè)生長素濃度高于向光側(cè)，背光側(cè)生長較快，向光側(cè)生長較慢，無論背光側(cè)還是向光側(cè)都體現(xiàn)了生長素的促進作用，不能體現(xiàn)兩重性，B錯誤；C、2,4-D是生長素類似物，低濃度可以防止落花落果，高濃度可以疏花疏果，花期應(yīng)該使用低濃度溶液，C錯誤；D、用秋水仙素處理二倍體番茄幼苗，可以得到多倍體；用適宜濃度的生長素類似物處理未授粉的番茄雌蕊柱頭，可以獲得無子番茄，D錯誤。故選A。生長素作用的兩重性分析方法(1)生長素的作用具有兩重性，即在一定濃度范圍內(nèi)促進植物器官生長，濃度過高則抑制植物器官生長。(2)生長素作用的兩重性多涉及坐標曲線圖形式的試題。一定要區(qū)分清促進作用或抑制作用時對應(yīng)的生長素濃度。不要誤把最適生長素濃度看成促進作用和抑制作用的“分水嶺”。(3)常見的體現(xiàn)生長素作用兩重性的實例①植物的頂端優(yōu)勢：生長素對頂芽表現(xiàn)為促進作用，對側(cè)芽表現(xiàn)為抑制作用。②除草劑：一定濃度的生長素類似物對雙子葉雜草表現(xiàn)為抑制作用，而對單子葉作物表現(xiàn)為促進作用。③根的向地性：近地側(cè)高濃度的生長素表現(xiàn)為抑制作用，遠地側(cè)低濃度的生長素表現(xiàn)為促進作用。3、B【解析】

該遺傳病為常染色體顯性遺傳病，其中Ⅰ1和Ⅱ1不含有致病基因即基因型均為aa，則Ⅰ2的基因型可能為AA或Aa，Ⅱ1的基因型為aa，Ⅱ2的基因型為Aa，患病的Ⅲ2和Ⅲ3的基因型為aa，Ⅲ6的基因型可能為aa或Aa?！驹斀狻緼、由分析可知，Ⅲ3的基因型為Aa，I2的基因型可能為AA或Aa，A錯誤；B、Ⅱ1與Ⅱ2再生一個孩子，孩子的基因型為50%Aa、50%aa，而基因型為Aa的個體約有90%患病，10%表現(xiàn)為正常，所以孩子患病概率為50%×90%=45%，B正確；C、根據(jù)題干信息，正常個體也可能含有致病基因，并遺傳給后代，C錯誤；D、調(diào)査遺傳病的發(fā)病率時應(yīng)在廣大人群中隨機抽樣調(diào)査，并確保調(diào)査對象足夠多，D錯誤。故選B。4、A【解析】

A、同源染色體中非姐妹染色單體之間的對應(yīng)片段（含等位基因的片段）發(fā)生交叉互換會產(chǎn)生基因重組，分析圖中交換的片段所含的基因不是對應(yīng)的等位基因，而是非等位基因所在的片段，所以不是基因重組，A錯誤；B、該細胞減數(shù)分裂能產(chǎn)生3種基因的細胞，分別是ABCD、ABC1D2、ABC2D1，B正確。C、由于C、D基因的部分片段交換，所以產(chǎn)生的新的C1D2和D1C2基因在轉(zhuǎn)錄和翻譯后，其產(chǎn)物可能發(fā)生改變，C正確；D、根據(jù)圖示分析，C1D2與C在染色體上的位置相同，而D1C2與D在染色體上位置相同，所以它們可能成為染色體上的新等位基因，D正確。故選A。5、C【解析】圖中的②與⑥都是mRNA，A正確；若②中A+U占36%，根據(jù)堿基互補配對原則，①中A+T占36%，則C+G占64%，因此其對應(yīng)片段中G占32%，B正確；圖中的⑤為多肽鏈，還不具有生物活性，需經(jīng)過內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體的加工才具有生物活性，C錯誤；一種tRNA只能識別并轉(zhuǎn)運一種氨基酸，D正確?！军c睛】本題結(jié)合人體唾液腺細胞中的生理過程圖解，考查遺傳信息的轉(zhuǎn)錄和翻譯，其中①為DNA分子；②為mRNA分子；③為RNA聚合酶；④為tRNA，能識別密碼子并轉(zhuǎn)運相應(yīng)的氨基酸；⑤為氨基酸，是合成蛋白質(zhì)的原料；⑥為mRNA，是翻譯的模板。6、A【解析】

根據(jù)題意和圖示分析可知：圖甲細胞中含有同源染色體，著絲點分裂，染色體移向細胞兩極，處于有絲分裂后期；圖乙中染色體、染色單體、DNA之間的比例為1：2：2，并且染色體數(shù)為2N，因此可能處于有絲分裂的前期或中期、減數(shù)第一次分裂的前期、中期后期。

圖丙中，A組細胞中染色體數(shù)為N，即染色體數(shù)目減半，可以表示減二的前期、中期、末期；B組細胞中染色體數(shù)目為2N，可以表示有絲分裂的間期、前、中、末期，減Ⅰ時期和減Ⅱ后期；C組細胞中染色體數(shù)目為4N，為體細胞的兩倍，只可能表示有絲分裂的后期?！驹斀狻竣偌讏D所示細胞處于有絲分裂后期，在此時期之前，染色體排列在細胞中央的赤道板上，但赤道板并不是真實存在的結(jié)構(gòu)，①錯誤；②由于DNA的復(fù)制是半保留復(fù)制，所以正常情況下姐妹染色單體上的遺傳信息是相同的，故甲圖所示細胞中，著絲點分裂后正常形成的2個子染色體攜帶遺傳信息相同，②正確；③乙圖所示細胞中DNA含量為4N，染色體數(shù)與體細胞中相同，為2N，可能處于減數(shù)第一次分裂后期，此階段發(fā)生同源染色體的分離，③正確；④乙圖細胞含有染色單體，可表示減數(shù)第一次分裂后期，移向一極的染色體應(yīng)為體細胞的一半。若細胞中某一極的染色體數(shù)目為2N，則只能表示有絲分裂后期，而有絲分裂后期不含姐妹染色單體，④錯誤；⑤丙圖細胞中染色體數(shù)最多為4N，可表示有絲分裂后期，染色體數(shù)最少為N，說明還可以發(fā)生減數(shù)分裂，故丙圖結(jié)果可能來自于植物的雄蕊和雌蕊以及動物精巢等部位細胞，⑤正確；⑥C組細胞染色體數(shù)為4N，只能表示有絲分裂后期，不會發(fā)生聯(lián)會并產(chǎn)生四分體，⑥錯誤。綜上分析，A正確，BCD錯誤。故選A。本題考查了有絲分裂和減數(shù)分裂的相關(guān)知識，要求考生能夠識記有絲分裂和減數(shù)分裂過程中的DNA、染色體、染色單體等數(shù)量變化，能夠根據(jù)數(shù)量確定分裂時期，并能夠識記相關(guān)時期的細胞特點，進而對選項逐項分析。二、綜合題：本大題共4小題7、②實驗分組胰島素和生長激素對動物細胞克隆形成率的影響實驗分組記錄表說明：“＋”表示添加該試劑A組B組C組D組動物細胞培養(yǎng)液＋＋＋＋滋養(yǎng)細胞＋＋＋＋胰島素溶液＋＋生長激素溶液＋＋③按上表情況向各組加入等量且適量的試劑。④從未經(jīng)克隆的小鼠肝細胞系中分離若干個單細胞，并分別向每個卡氏瓶中加入1個肝細胞，將各組放入CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。⑤每隔一段時間，從4組卡氏瓶中選取一個樣本，用胰蛋白酶處理獲得細胞懸液，并用血細胞計數(shù)板進行細胞數(shù)量。⑥對所獲的實驗數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析細胞正常代謝和生長刺激細胞生長（或細胞增殖）失去增殖力【解析】

胰島素降低血糖的作用，可歸結(jié)為胰島素促進肝細胞、肌肉細胞、脂肪細胞攝取、貯存和利用葡萄糖，胰島素還抑制氨基酸轉(zhuǎn)化成葡萄糖。生長激素能促進骨骼、內(nèi)臟和全身生長．促進細胞分裂，促進蛋白質(zhì)合成，影響脂肪和礦物質(zhì)代謝，在人體生長發(fā)育中起著關(guān)鍵性作用。動物細胞培養(yǎng)就是從動物機體中取出相關(guān)的組織，將它分散成單個細胞（使用胰蛋白酶或膠原蛋白酶）然后，放在適宜的培養(yǎng)基中，讓這些細胞生長和增殖。體外細胞培養(yǎng)所需營養(yǎng)物質(zhì)與體內(nèi)基本相同，例如，需要糖、氨基酸、無機鹽、促生長因子、微量元素等。本實驗為了研究胰島素和生長激素對提高細胞克隆形成率的作用，因變量為細胞克隆形成率，以細胞數(shù)為檢測指標。實驗設(shè)計要遵循等量性原則，單一變量原則、對照原則。【詳解】（1）②為了研究胰島素和生長激素對動物細胞克隆形成率的影響，實驗可分為四組。A組：動物細胞培養(yǎng)液+滋養(yǎng)細胞，B組：動物細胞培養(yǎng)液+滋養(yǎng)細胞+胰島素溶液，C組：動物細胞培養(yǎng)液+滋養(yǎng)細胞+生長激素溶液，D組：動物細胞培養(yǎng)液+滋養(yǎng)細胞+胰島素溶液+生長激素溶液。A組為空白對照組。（2）A組為空白對照，細胞數(shù)目最少。B、C組比D組少。生長激素對細胞數(shù)量和生長的促進作用大于胰島素對細胞的促進作用，因此C組比B組多。（3）①胰島素對維持細胞正常代謝和生長是不可缺少的。生長激素具有刺激細胞生長（或細胞增殖）的作用。因此兩種激素均能提高克隆形成率。②本實驗所用的滋養(yǎng)細胞是使用射線處理失去增殖力的小鼠成纖維細胞，作為對照實驗。熟悉胰島素、生長激素及實驗設(shè)計的原則、實驗結(jié)果的預(yù)測及分析等是解答本題的關(guān)鍵。8、cDNAPCRXhoIEoRI啟動子、終止子、復(fù)制原點卡那霉素PD-1蛋白PDL-1或答PD-1抗體作為對照【解析】

基因工程技術(shù)的基本步驟：（1）目的基因的獲?。悍椒ㄓ袕幕蛭膸熘蝎@取、利用PCR技術(shù)擴增和人工合成。（2）基因表達載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標記基因等。（3）將目的基因?qū)胧荏w細胞：根據(jù)受體細胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣。將目的基因?qū)胫参锛毎姆椒ㄓ修r(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)雱游锛毎钣行У姆椒ㄊ秋@微注射法；將目的基因?qū)胛⑸锛毎姆椒ㄊ歉惺軕B(tài)細胞法。（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因采用DNA分子雜交技術(shù)；②檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA采用分子雜交技術(shù)；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)采用抗原—抗體雜交技術(shù)。個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等?！驹斀狻浚?）基因文庫包括基因組文庫和部分基因文庫（cDNA）。其中基因組文庫包含某種生物所有的基因，而部分基因文庫只包含某種生物的部分基因，可以mRNA為模板反轉(zhuǎn)錄形成cDNA；由于PCR技術(shù)利用的是DNA分子復(fù)制的原理，所以用該cDNA進行PCR技術(shù)擴增短時間內(nèi)可以獲得大量的目的基因。（2）分析圖1中堿基序列，α鏈上有“—CTCGAC—”識別序列，β鏈上有“—GAATTC—”堿基識別序列，與圖2中XhoI限制酶和EoRI限制酶的識別序列相同。故選用XhoI限制酶和EoRI限制酶將“pIRES2-EGFP質(zhì)?！陛d體進行雙切，再用DNA連接酶將其與目的基因拼接，構(gòu)建基因表達載體。基因表達載體的組成包括目的基因、標記基因、啟動子、終止子、復(fù)制原點等。（3）根據(jù)第（2）題可知，基因表達載體上的標記基因是卡那霉素抗性基因，因此一定溫度下，與經(jīng)過Ca2+處理的感受態(tài)大腸桿菌混合培養(yǎng)在含有卡那霉素的培養(yǎng)基，可篩選出已經(jīng)完成轉(zhuǎn)化的大腸桿菌。（4）基因表達的產(chǎn)物是蛋白質(zhì)，一段時間后，為確定PD-1基因是否表達，可以檢測細胞膜表面是否具有PD-1基因表達的PD-1蛋白。為判斷其是否具有生物學(xué)活性和功能，可采用抗原—抗體雜交技術(shù)，即從裂解293T細胞中，提取PD-1蛋白看能否與PDL-1發(fā)生結(jié)合，從而阻斷“PD-1與PDL-1信號通路”。為了增加實驗的可信度，還需要設(shè)置對照實驗，只將“pIRES2-EGFP載體”轉(zhuǎn)入293T細胞，因為不含PD-1基因，所以“PD-1與PDL-1信號通路”不會阻斷。題考查基因工程的相關(guān)知識，要求考生識記基因工程的概念、原理及操作步驟，掌握各操作步驟中需要注意的細節(jié)，能結(jié)合所學(xué)的知識在新的情景材料下分析運用。9、中心瓊脂稀釋涂布平板選擇稀釋30-300當兩個或多個細胞聚集在一起，平板上觀察到的只是一個菌落高【解析】

稀釋平板計數(shù)是根據(jù)微生物在固體培養(yǎng)基上所形成的單個菌落，即是由一個單細胞繁殖而成這一培養(yǎng)特征設(shè)計的計數(shù)方法，即一個菌落代表一個單細胞。計數(shù)時，首先將待測樣品制成均勻的系列稀釋液，盡量使樣品中的微生物細胞分散開，使成單個細胞存在（否則一個菌落就不只是代表一個細胞），再取一定稀釋度、一定量的稀釋液接種到平板中，使其均勻分布于平板中的培養(yǎng)基內(nèi)。經(jīng)培養(yǎng)后，由單個細胞生長繁殖形成菌落，統(tǒng)計菌落數(shù)目，即可計算出樣品中的含菌數(shù)。此法所計算的菌數(shù)是培養(yǎng)基上長出來的菌落數(shù)，故又稱活菌計數(shù)。一般用于某些成品檢定（如殺蟲菌劑等）、生物制品檢驗、土壤含菌量測定及食品、水源的污染程度的檢驗?！驹斀狻浚?）餐食的表面溫度較低，測量送達餐食的溫度時，應(yīng)測量餐食中心部位的溫度。（2）固體培養(yǎng)基需要加入凝固劑瓊脂。稀釋涂布平板法可以用來對菌落進行計數(shù)，從而得知細菌的數(shù)目。（3）金黃色葡萄球菌有較高的耐鹽性，通常在培養(yǎng)基中加入一定量的NaCl可以篩選金黃色葡萄球菌，像這樣允許特定種類微生物生長的培養(yǎng)基稱為選擇培養(yǎng)基。培養(yǎng)基中的菌落數(shù)太多會影響計數(shù)，因此可對樣品進行適度的稀釋。菌落太少誤差較大，菌落太多容易聚集成一個菌落，因此為了保證結(jié)果準確，一般選擇菌落數(shù)為30-300范圍的平板進行計數(shù)。統(tǒng)計的菌落數(shù)往往會比活菌的實際數(shù)目低，原因是當兩個或多個細胞聚集在一起，平板上觀察到的只是一個菌落。（4）送達溫度與菌落數(shù)量呈負相關(guān)，因此送達溫度較高的餐食，說明含菌量較少，合格率較高。熟悉微生物的培養(yǎng)與分離是解答本題的關(guān)鍵。10、促糖皮質(zhì)激素釋放激素ACTH、糖皮質(zhì)激素(神經(jīng)遞質(zhì))神經(jīng)—體液腺垂體細胞表面存在與CRH結(jié)合的特異性受體實驗思路：選取兩組大小與生理狀況一致的小鼠，分別注射等量的生理鹽水和一定濃度的氫化可地松溶液，一段時間后，向兩組小鼠的足跖內(nèi)注射等量的蛋清溶液，隨后觀察兩組小鼠足跖的腫脹情況。實驗結(jié)果：注射一定濃度的氫化可地松溶液的小鼠足跖腫脹情況小于注射生理鹽水的小鼠【解析】

據(jù)圖分析：下丘腦是內(nèi)分泌調(diào)節(jié)的樞紐。下丘腦可以分泌相關(guān)的促激素釋放激素作用于垂體，促進垂體相關(guān)的促激素作用于相應(yīng)的內(nèi)分泌腺，促進內(nèi)分泌腺分泌相應(yīng)的激素。同時內(nèi)分泌腺分泌的激素可以負反饋作用于下丘腦和垂體，影響二者分泌促激素釋放激素和促激素?！驹斀狻浚?）由腎上腺糖皮質(zhì)激素的分泌調(diào)節(jié)示意圖可知，腎上腺糖皮質(zhì)激素的分泌屬于分級調(diào)節(jié)，其分泌受下丘腦、垂體的調(diào)控，故可判斷下丘腦分泌的CRH是促糖皮質(zhì)激素釋放激素，作用于垂體，促進垂體分泌促糖皮質(zhì)激素，促糖皮質(zhì)激素最終促進腎上腺皮質(zhì)分泌糖皮質(zhì)激素。圖中信息提示糖皮質(zhì)激素可通過長反饋來調(diào)節(jié)下丘腦的分泌，ACTH可通過短反饋來調(diào)節(jié)下丘腦的分泌。所以CRH的分泌受到圖中ACTH、糖皮質(zhì)激素(神經(jīng)遞質(zhì))等物質(zhì)的調(diào)節(jié)。（2）應(yīng)激刺激產(chǎn)生的興奮通過反射弧傳到下丘腦，下丘腦分泌相關(guān)激素(CRH)調(diào)控垂體的分泌，垂體分泌的激素調(diào)控腎上腺皮質(zhì)的分泌，這一過程為神經(jīng)—體液調(diào)節(jié)。下丘腦分泌的CRH可作用于腺垂體，是因為腺垂體細胞的表面有與CRH結(jié)合的特異性受體。（3）該實驗屬于驗證性實驗，需明確實驗的原理：氫化可地松是糖皮質(zhì)類激素，具有快速、強大而非特異