動物生物化學實驗實驗一氨基酸紙層析實驗室規(guī)則1.實驗前認真預(yù)習實驗內(nèi)容。2.實驗時遵守課堂紀律，不大聲喧嘩。3.嚴格按操作規(guī)程操作。4.愛護實驗室各種器具及儀器設(shè)備，如有損壞，及時報告，并按規(guī)定賠償。5.公用試劑用后放回原處，瓶蓋隨開隨蓋防止污染。6.注意安全，不得將易燃試劑接近火焰，嚴禁用口吸取有毒藥品和試劑，凡發(fā)生煙霧，有毒氣體和不良氣味的實驗應(yīng)在通風櫥內(nèi)進行。7.保持實驗室整潔，每次實驗畢，由三個組同學打掃及整理實驗室。實驗室安全知識簡介（一）實驗室安全1.安全用電2.水火無情3.嚴防中毒4.避免傷害5.生物危害6.射線傷害（二）實驗室滅火1.切斷室內(nèi)所有電源，火源2.報警3.導線著火時，切斷電源或使用四氯化碳滅火器，不能用水及二氧化碳滅火器，以免觸電4.可燃性液體著火時，可用濕布或沙土覆蓋，隔絕空氣滅火。不能用水滅火，這樣會擴大燃燒面積。5.金屬鈉著火時可用砂子覆蓋6.衣服著火切忌奔走，應(yīng)臥地滾動滅火。（三）實驗室急救1.觸電2.玻璃割傷及其他機械損傷3.燙傷4.化學試劑灼傷5.汞中毒實驗記錄及實驗報告每次實驗要做到課前認真預(yù)習，實驗操作中仔細觀察并如實記錄實驗現(xiàn)象與數(shù)據(jù)，課后及時完成實驗報告。課前預(yù)習實驗課前要將實驗名稱、目的和要求、實驗內(nèi)容與原理、操作方法和步驟等簡單扼要地寫在記錄本中，做到心中有數(shù)。實驗記錄準備一本正規(guī)的筆記本作為實驗記錄本。將實驗條件下觀察到的現(xiàn)象仔細地記錄下來。將實驗中觀測的每個結(jié)果和數(shù)據(jù)及時如實地記錄。實驗中使用儀器的類型、編號以及試劑的規(guī)格、化學式、分子量、準確的濃度等，也應(yīng)記錄清楚。實驗報告

實驗結(jié)束后，應(yīng)及時整理和總結(jié)實驗結(jié)果，寫出實驗報告。按照實驗內(nèi)容可分為定性和定量兩大類，實驗報告的格式：實驗序號、實驗名稱實驗?zāi)康膶嶒炘碇饕獌x器及試劑配制操作方法與實驗步驟結(jié)果與討論一、實驗?zāi)康牧私鈱游龇ǚ蛛x混合物的基本原理學習分配層析的基本原理掌握氨基酸紙層析的操作技術(shù)二、實驗原理1.層析原理利用混和物中各組分的理化性質(zhì)（分子大小，形狀、分子極性，吸附力，分子親和力和分配系數(shù)等）的不同，使各組分在兩相中的分布程度不同從而達到分離。層析分離中的一個相是固定的，稱為固定相，另一相是流動的，稱為流動相。當流動相流經(jīng)固定相時，各組分由于性質(zhì)不同，移動速度不同，從而使之分開。2.層析法的種類：

依據(jù)被分離物性質(zhì)不同分為：吸附層析、離子交換層析、凝膠層析、親和層析、分配層析、聚焦層析

依據(jù)操作方式不同又分為：紙層析、柱層析、薄層層析3.分配層析利用混合物中各組分在兩個互不相溶的溶劑中溶解性能不同，即分配分配系數(shù)不同，而將其分開。當把一種物質(zhì)在兩種不混溶的溶劑中振蕩時，它將在這兩相中不均勻的分配。達到平衡時，這種物質(zhì)在兩種溶劑中的濃度之比是一個常數(shù)。該常數(shù)就是分配系數(shù)溶質(zhì)在溶劑Ⅰ（固相）中的濃度溶質(zhì)在溶劑Ⅱ（液相）中的濃度α＝分配系數(shù)4.紙層析以濾紙為支持物而進行的層析固定相：濾紙纖維吸附的水流動相：被水飽和的有機溶劑

紙層析是分配層析的一種，在濾紙上水被吸附在纖維素的纖維之間形成固定相。當有機相沿紙流動經(jīng)過層析點時，層析點上溶質(zhì)就在水相和有機相之間進行分配。由于溶質(zhì)中各組分的分配系數(shù)不同，移動速率也不同，因而可以彼此分開。被分離物質(zhì)在紙層析圖譜上的位置用Rf值表示。它代表了某組分在濾紙上的移動速率，與該組分在一定溶劑系統(tǒng)中的分配系數(shù)有關(guān)，在一定的條件下某種物質(zhì)的Rf值是常數(shù)。原點到溶劑前沿的距離原點到層析點中心的距離Rf＝Rf值影響Rf值的因素物質(zhì)結(jié)構(gòu)：相似相溶原理隨分子極性不同而變化，極性越強，Rf值越小，移動越慢；極性越弱，Rf值越大，移動越快。溶劑系統(tǒng)pH：溶劑系統(tǒng)pH會影響極性基團的解離除此之外，濾紙及溫度和層析時間，都會對Rf值產(chǎn)生影響。三、實驗試劑及器材1.試劑

0.5%（W/V茚三酮溶液標準氨基酸溶液：

(1)0.4%Ala,(2)0.4%Leu,(3)0.4%Asp

氨基酸混合液：Ala，Leu,Asp混合配制溶劑系統(tǒng)：正丁醇：88％甲酸：水(15：3：2，V/V)

2.器材層析缸、毛細管、電吹風四、實驗操作點樣

用鉛筆在距濾紙一邊1.5厘米處劃線，并等距離劃4個點，毛細管吸樣品（約2cm高）點樣，直徑小于0.5cm，冷風吹干，重復一次。干燥后將濾紙卷成圓形，縫合濾紙，注意兩邊緣不能接觸。將濾紙點樣端向下，垂直放置在盛有展層劑的層析缸中，蓋緊缸蓋。代層析至濾紙3/4處取出濾紙，鉛筆在溶劑前沿處劃線，電吹風吹干。展層噴霧器均勻噴上茚三酮溶液，電吹風熱風吹干至看到AA紫色