1LS/T6149—2024糧油檢驗谷物中黃曲霉毒素B?測定超導量點免疫熒光快速定量法本文件描述了采用超導量點免疫熒光快速定量法測定谷物中黃曲霉毒素B?的方法，規(guī)定了試劑、下列文件中的內容通過文中的規(guī)范性引用而構成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法LS/T6402糧油檢驗設備和方法標準適用性驗證及結果評價一般原則3術語和定義超級半導體包被的量子點原子發(fā)光物。4原理試樣中的黃曲霉毒素B?抗原和固定在檢測線T線上的黃曲霉毒素B?抗原與超導量點標記黃曲霉毒素B?抗體競爭反應，熒光分析儀讀取的熒光信號與試樣中黃曲霉毒素B?含量成反比，置曲線自動計算樣品中黃曲霉毒素B?的含量。5.3氯化鉀(KCl)。5.4吐溫80(C??H??O?0)。2LS/T6149—2024(5.4)10mL,超純水溶解后定容至1L。6儀器設備及材料6.2礱谷機。6.3粉碎機：能使試樣粉碎后全部通過0.85mm篩。6.4離心機：轉速不低于4000r/min。6.5渦旋振蕩器。6.6免疫熒光分析儀：能測定并顯示超導量點免疫熒光定量檢測卡的測定結果。6.7黃曲霉毒素B?超導量點免疫熒光定量檢測卡：技術要求按附錄A。常溫避光儲存，具體儲存條件和容量參照使用說明。6.9計時器。7樣品制備7.1扦樣與分樣按照GB/T5491執(zhí)行。7.2樣品處理7.2.2準確稱取5.00g±0.01g混合均勻后的試樣(7.2.1)于50.0mL離心管中，加入25.0mL試樣提取液(5.7),用渦旋振蕩器(6.5)振蕩10min;靜置5min后用濾紙(6.8)過濾(或取1.0mL混合液于離心管中，經(jīng)離心機(6.4)以4000r/min離心3min)。取濾液或離心后的上清液100μL于另一潔凈離心管注：不同廠家黃曲霉毒素B?超導量點免疫熒光定量檢測卡所用的樣品處理方法可能不同，需按照產品使用說明中規(guī)定的方法操作。8樣品測定8.1開啟免疫熒光分析儀(6.6)。8.2將超導量點免疫熒光定量檢測卡(6.7)從冷藏狀態(tài)取出，加樣孔朝上平放至室溫。8.4檢測卡加樣后，水平靜置反應15min,然后在3min內將檢測卡插入免疫熒光分析儀(6.6),儀器將自動進行檢測。勻后取100μL至一潔凈的離心管中，加入400μL稀釋緩沖液(5.6),充分混勻，按照8.2～8.5進行測定。注：不同廠家免疫熒光分析儀的使用方法可能有所不同，需按照產品說明書的規(guī)定進行操作。3LS/T6149—20249結果計算和表述黃曲霉毒素B?的含量按式(1)計算。X=f×C…………(1)X——試樣中黃曲霉毒素B?的含量，單位為微克每千克(μg/kg);f-—試液稀釋倍數(shù)；C——免疫熒光分析儀自動計算并顯示的結果，單位為微克每千克(μg/kg)。計算結果保留小數(shù)點后兩位。10重復性在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的絕對差值不應超過算術平均值的20%。11檢出限和定量限方法檢出限為0.5μg/kg,定量限為1.5μg/kg。4LS/T6149—2024(規(guī)范性)超導量點免疫熒光快速定量檢測卡性能評價要求A.1檢出限評價連續(xù)獨立測定20個空白樣品，按LS/T6402的規(guī)定計算檢出限，計算的檢出限應不高于設備的聲稱檢出限。A.2準確性評價個樣品平行測定不低于6次。計算檢測卡檢測結果與標準樣品的相對偏差，3個樣品的相對偏差均應控制在—20%～+20%之間。A.3精密度評價采用含量為10μg/kg的黃曲霉毒素B?自然污染有證標準物質，平行測定不低于6次，計算檢測卡批內變異系數(shù)，變異系數(shù)應≤20%。A.4批間穩(wěn)定性評價采用含量為10μg/kg的黃曲霉毒素B?自然污染有證標準物質，隨機選取至少6個批次產品，每個批次產品測定不低于2次，批內測定取其平均值，計算檢測卡批間變異系數(shù)，變異系數(shù)