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DB14DB14/T1153—20152015–12-20發(fā)布2016–01-20實(shí)施山西省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局I 1 1 1 1 1 3 3 3 3 4 4 5 6本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：?jiǎn)逃绖?、馮前進(jìn)、劉根喜、關(guān)1種子扦樣、種子處理、種子DNA提取方法、擴(kuò)增與測(cè)序、序凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所在rDNA基因中，5.8SrDNA和28SrDNA基因間隔序列稱為內(nèi)部轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)2(ITS2)。5.2抗壞血酸鈉），2注：EB有致癌作用，配制和使用時(shí)應(yīng)戴一次性手套操作并妥善處理廢液。），），5.12酚-氯仿-異戊醇（25:24:1）溶液5.1350×TAE緩沖液），3ITS2-R：5′–GACGCTTCTCCAGACTAC用TE緩沖液（5.11）分別將上述引物苦參ITS2序列長(zhǎng)267bp，未發(fā)現(xiàn)變異位CACATCGTTGCCCCAATGCCTCAGCCCTGTTGCTAGGCATAGTAAAGGGGTCCCGTGAGCGATGCCTCGCGGTTGGCTGAAAATTGAGTCCGTGGTGGAGTGCGGGTGGTTGAGTAAGAGCTCGAGACCGATCGTGTGTGTCACCCCTACCGGATTTGTGACTCCCATGAGCGGCCGTTGGC苦參種子表面經(jīng)無(wú)水乙醇處理后，用中藥材粉碎機(jī)或研磨儀粉碎，粉碎后顆粒直徑小于1mm，取a.在有100mg粉末的離心管中加入1000μL65℃預(yù)熱的2%CTAB提取液（5.10），加入1μLβ-巰基乙醇，另加入少許PVP干粉，金屬浴65℃保溫30min），d.取上清液，加入2/3體積的－20℃預(yù)冷的異丙醇，置于－20℃30min。在4℃條件下14000r/mine.棄上清，加入300mL75%乙醇輕振蕩，在4℃條件下12000r/min離心10min。棄上清，室溫下靜4試劑終濃度單樣品體積無(wú)菌水10×PCR緩沖液2.5μLdNTPS0.6mmol/L10μmol/L上游引物0.2μmol/L0.5μL10μmol/L上游引物0.2μmol/L0.5μL5U/μLTaq酶（熱啟動(dòng)）0.025U/μL0.12525g/LDNA模板注：10×PCR緩沖液含氯化鎂，以上反應(yīng)試劑按順序添加。應(yīng)用序列拼接軟件進(jìn)行序列拼接及校對(duì)，去除序列兩端
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