第56講動物細(xì)胞工程【課標(biāo)內(nèi)容】1．闡明動物細(xì)胞培養(yǎng)是從動物體獲得相關(guān)組織，分散成單個細(xì)胞后，在適宜的培養(yǎng)條件下讓細(xì)胞生長和增殖的過程，動物細(xì)胞培養(yǎng)是動物細(xì)胞工程的基礎(chǔ)；2．闡明動物細(xì)胞核移植一般是將體細(xì)胞核移入一個去核的卵母細(xì)胞中，并使重組細(xì)胞發(fā)育成新胚胎，繼而發(fā)育成動物個體的過程；3．闡明動物細(xì)胞融合是指通過物理、化學(xué)或生物學(xué)等手段，使兩個或多個動物細(xì)胞結(jié)合形成一個細(xì)胞的過程；4．概述細(xì)胞融合技術(shù)是單克隆抗體制備的重要技術(shù)；5．簡述干細(xì)胞在生物醫(yī)學(xué)工程中有廣泛的應(yīng)用價值。考點1動物細(xì)胞培養(yǎng)與干細(xì)胞考點落實知識1動物細(xì)胞培養(yǎng)1．概念：動物細(xì)胞培養(yǎng)是指從動物體中取出相關(guān)的組織，將它分散成__單個細(xì)胞__，然后在適宜的培養(yǎng)條件下，讓這些細(xì)胞__生長和增殖__的技術(shù)。2．條件營養(yǎng)營養(yǎng)物質(zhì)糖類、__氨基酸__、無機鹽、維生素等__血清__含有多種維持細(xì)胞正常代謝和生長的物質(zhì)，如蛋白質(zhì)、氨基酸、未知的促生長因子等，可以補充培養(yǎng)液中尚未研究清楚的成分環(huán)境無菌培養(yǎng)液和__培養(yǎng)用具_(dá)_滅菌處理、無菌環(huán)境下操作__無毒__定期更換培養(yǎng)液穩(wěn)態(tài)溫度哺乳動物細(xì)胞的溫度多以(36.5±0.5)℃為宜pH多數(shù)動物細(xì)胞生存的適宜pH為__7.2～7.4____滲透壓__維持細(xì)胞正常的形態(tài)和功能氣體95%空氣其中的__O2__為細(xì)胞代謝所必需5%CO2維持__培養(yǎng)液的pH__3．動物細(xì)胞培養(yǎng)的過程及相關(guān)概念(1)過程圖示(2)懸浮生長：細(xì)胞懸浮在培養(yǎng)液中生長增殖。密度過大時，由于__有害代謝物__積累和培養(yǎng)液中__營養(yǎng)物質(zhì)缺乏__等因素，細(xì)胞分裂受阻。(3)細(xì)胞貼壁：多數(shù)細(xì)胞貼附在__培養(yǎng)瓶的瓶壁__上生長。(4)接觸抑制：當(dāng)貼壁細(xì)胞分裂生長到表面__相互接觸__時，細(xì)胞會__停止分裂增殖__的現(xiàn)象稱為細(xì)胞的接觸抑制。(5)原代培養(yǎng)：指動物組織經(jīng)處理后的__初次培養(yǎng)__。(6)傳代培養(yǎng)：分瓶后的細(xì)胞培養(yǎng)。當(dāng)出現(xiàn)接觸抑制，需要傳代培養(yǎng)時要先用__胰蛋白酶__等處理，使貼壁生長的細(xì)胞從瓶壁上脫離下來，再用__離心__法收集。解疑釋惑(1)培養(yǎng)前分散成單個細(xì)胞的原因：①分散后細(xì)胞的生長與增殖不會被彼此限制；②分散有利于細(xì)胞__與培養(yǎng)液充分接觸__，保證O2與營養(yǎng)的供應(yīng)和__代謝物__的及時排出。(2)區(qū)分兩種“培養(yǎng)”的關(guān)鍵是看用胰蛋白酶處理的對象。(3)用酶兩次處理的目的：第一次使用的目的是__使組織細(xì)胞分散開__；第二次使用的目的是__使細(xì)胞從瓶壁上脫離下來__，便于分散后繼續(xù)培養(yǎng)。4．動物細(xì)胞培養(yǎng)的應(yīng)用：除了用于生物醫(yī)藥產(chǎn)品的工業(yè)化生產(chǎn)，還用于基因治療、組織工程、藥物篩選和毒性檢測等領(lǐng)域的基礎(chǔ)研究和臨床實踐。歸納總結(jié)動物細(xì)胞培養(yǎng)和植物組織培養(yǎng)的比較項目動物細(xì)胞培養(yǎng)植物組織培養(yǎng)原理細(xì)胞增殖植物細(xì)胞的全能性取材動物胚胎或幼齡動物的組織、器官外植體(離體植物器官、組織、細(xì)胞)培養(yǎng)基性質(zhì)液體培養(yǎng)基(又稱培養(yǎng)液)固體培養(yǎng)基培養(yǎng)基主要成分糖類、氨基酸、無機鹽、維生素等營養(yǎng)物質(zhì)；一些天然成分，如血清有機營養(yǎng)成分、無機營養(yǎng)成分、植物激素特殊環(huán)境條件氣體環(huán)境再分化需要光照結(jié)果獲得大量細(xì)胞一般獲得新的植株關(guān)鍵過程制細(xì)胞懸液→原代培養(yǎng)→傳代培養(yǎng)脫分化→再分化相同點均需無菌操作，需要適宜的溫度、pH等條件知識2干細(xì)胞1．干細(xì)胞概念及來源(1)干細(xì)胞是指動物(包括人)胚胎及某些器官中同時具有自我更新和分化能力的細(xì)胞。在一定條件下，可以分化成__其他類型的細(xì)胞__。(2)干細(xì)胞的存在部位：__早期胚胎__、__骨髓__和臍帶血等多種組織和器官中。2．干細(xì)胞的種類及功能/應(yīng)用(1)按來源分eq\a\vs4\al(①胚胎干細(xì)胞,（ES細(xì)胞）)eq\b\lc\{(\a\vs4\al\co1(存在：__早期胚胎__中,功能：具有分化成為成年動物體內(nèi)的任何一種,

類型的細(xì)胞，并進(jìn)一步形成機體的所有組織,

和器官甚至__個體__的潛能))eq\a\vs4\al(②成體,干細(xì)胞)eq\b\lc\{(\a\vs4\al\co1(存在：成體組織或器官，包括骨髓中的__造血干細(xì)胞__、,神經(jīng)系統(tǒng)中的神經(jīng)干細(xì)胞和睪丸中的精原干細(xì)胞等,功能：只能分化成__特定的細(xì)胞和組織__，不具有,發(fā)育成__完整個體__的能力))eq\a\vs4\al(③誘導(dǎo)多能,干細(xì)胞,（iPS細(xì)胞）)eq\b\lc\{(\a\vs4\al\co1(來源：體外誘導(dǎo)__體細(xì)胞__產(chǎn)生,應(yīng)用：分化形成各種功能細(xì)胞，用于治療疾病,應(yīng)用優(yōu)點：避免__免疫排斥反應(yīng)__))(2)按分化潛能：__全能__干細(xì)胞、多能干細(xì)胞、單能干細(xì)胞。概念思辨1．判斷下列說法的正誤：(1)動物細(xì)胞培養(yǎng)要定期更換培養(yǎng)液，其目的是便于清除代謝物，防止代謝物積累對細(xì)胞自身造成傷害。(√)(2)在培養(yǎng)皿中培養(yǎng)的動物細(xì)胞多數(shù)懸浮，有利于細(xì)胞與培養(yǎng)液之間進(jìn)行物質(zhì)交換。(×)提示：體外培養(yǎng)的動物細(xì)胞多數(shù)進(jìn)行貼壁生長。(3)培養(yǎng)保留接觸抑制的細(xì)胞在培養(yǎng)瓶壁上可形成多層細(xì)胞。(×)提示：當(dāng)貼壁細(xì)胞分裂生長到表面相互接觸時，細(xì)胞通常會停止分裂增殖，形成單層細(xì)胞。(4)體外培養(yǎng)動物細(xì)胞分裂受阻的共同原因有營養(yǎng)物質(zhì)缺乏、有害代謝物積累和接觸抑制。(×)提示：體外動物細(xì)胞培養(yǎng)有兩種類型，分別是懸浮和貼壁，接觸抑制是貼壁生長具有的特點。(5)造血干細(xì)胞屬于胚胎干細(xì)胞，主要存在于成體的骨髓、外周血和臍帶血中。(×)提示：造血干細(xì)胞屬于成體干細(xì)胞。(6)誘導(dǎo)多能干細(xì)胞只能由成纖維細(xì)胞誘導(dǎo)分化而來。(×)提示：已分化的T細(xì)胞、B細(xì)胞等也能被誘導(dǎo)為多能干細(xì)胞。2．制備肝細(xì)胞懸液__不能__(選填“能”或“不能”)用胃蛋白酶處理，原因是__胃蛋白酶發(fā)揮作用的最適pH為2.0左右，當(dāng)pH大于6時，胃蛋白酶就會失活，而大多數(shù)動物細(xì)胞培養(yǎng)的適宜pH為7.2～7.4__。3．根據(jù)癌細(xì)胞的特點，請思考：培養(yǎng)的癌細(xì)胞有沒有接觸抑制現(xiàn)象？為什么？提示：沒有。癌細(xì)胞細(xì)胞膜上糖蛋白減少，細(xì)胞間的黏著性降低，在適宜的條件下可以無限增殖，因此培養(yǎng)的癌細(xì)胞無接觸抑制現(xiàn)象，在培養(yǎng)瓶中能夠生長成多層。典題說法考向1動物細(xì)胞培養(yǎng)(2022·江蘇卷)航天員葉光富和王亞平在天宮課堂上展示了培養(yǎng)的心肌細(xì)胞跳動的視頻。下列相關(guān)敘述正確的是(B)A．培養(yǎng)心肌細(xì)胞的器具和試劑都要先進(jìn)行高壓蒸汽滅菌B．培養(yǎng)心肌細(xì)胞的時候既需要氧氣，也需要二氧化碳C．心肌細(xì)胞在培養(yǎng)容器中通過有絲分裂不斷增殖D．心肌細(xì)胞在神經(jīng)細(xì)胞發(fā)出的神經(jīng)沖動的支配下跳動解析：培養(yǎng)心肌細(xì)胞的器具要先進(jìn)行高壓蒸汽滅菌，但是試劑并不都需要滅菌，如動物血清不能進(jìn)行高壓蒸汽滅菌，需用過濾法除去細(xì)菌，否則會使其中的成分失活，A錯誤；培養(yǎng)心肌細(xì)胞的時候既需要氧氣(有助于進(jìn)行有氧呼吸)，也需要二氧化碳(有助于維持培養(yǎng)液的pH)，B正確；心肌細(xì)胞體外培養(yǎng)時，當(dāng)細(xì)胞數(shù)量足夠多時，營養(yǎng)物質(zhì)大量消耗，有害代謝產(chǎn)物增加，使得細(xì)胞停止生長，因此不能不斷增殖，C錯誤；培養(yǎng)心肌細(xì)胞時沒有神經(jīng)細(xì)胞，心肌細(xì)胞跳動的節(jié)律性不依賴神經(jīng)控制，D錯誤?？枷?干細(xì)胞及其應(yīng)用(多選)(2023·江蘇卷)我國科學(xué)家利用猴胚胎干細(xì)胞首次創(chuàng)造了人工“猴胚胎”，研究流程如圖所示。下列相關(guān)敘述正確的有(AD)A．猴的成纖維細(xì)胞和胚胎干細(xì)胞功能不同，但具有相同的基因組B．囊胚細(xì)胞②③都由細(xì)胞①分裂分化形成，但表達(dá)的基因都不同C．移植前細(xì)胞和囊胚的培養(yǎng)都要放在充滿CO2的培養(yǎng)箱中進(jìn)行D．移植后胚胎的發(fā)育受母體激素影響，也影響母體激素分泌解析：同一個體不同的體細(xì)胞遺傳物質(zhì)相同，不同類型細(xì)胞形成的原因是基因的選擇性表達(dá)，A正確；囊胚細(xì)胞②③都由細(xì)胞①分裂、分化形成，但由于基因的選擇性表達(dá)，表達(dá)的基因不完全相同，B錯誤；細(xì)胞和胚胎培養(yǎng)一般放在含有95%空氣和5%CO2混合氣體的CO2培養(yǎng)箱中進(jìn)行，C錯誤；胚胎移植后胚胎的發(fā)育受母體激素影響，也影響母體激素分泌，D正確?？键c2動物體細(xì)胞核移植技術(shù)和克隆動物考點落實知識1動物體細(xì)胞核移植技術(shù)1．概念理解(1)核供體：動物一個細(xì)胞的__細(xì)胞核__。(2)質(zhì)供體：去掉細(xì)胞核的__卵母細(xì)胞__。(3)結(jié)果：形成__重組細(xì)胞__并發(fā)育成新胚胎，最終發(fā)育成__動物個體__(得到克隆動物)。深度指津供體和受體的選擇(1)供體①提供核的一方一般選用傳代10代以內(nèi)的細(xì)胞，因為10代以內(nèi)的細(xì)胞一般能保持正常的二倍體核型，保證了核供體細(xì)胞正常的遺傳基礎(chǔ)。②提供細(xì)胞質(zhì)的一方選擇減數(shù)分裂Ⅱ中期(MⅡ期)的卵母細(xì)胞，其原因：a．卵母細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)內(nèi)存在__激發(fā)細(xì)胞核全能性表達(dá)__的物質(zhì)；b．卵母細(xì)胞__體積大__，便于操作；c．卵母細(xì)胞營養(yǎng)物質(zhì)豐富。(2)受體：一般選擇繁殖性能好的同種生物雌性代孕。2．類型種類難易程度原因__胚胎細(xì)胞__核移植較容易分化程度低，全能性容易表現(xiàn)__體細(xì)胞__核移植較難分化程度高，全能性難表現(xiàn)注：非人靈長類動物的體細(xì)胞核移植非常困難，其主要原因一方面是供體細(xì)胞的細(xì)胞核在去核卵母細(xì)胞中不能__完全恢復(fù)其分化前的功能狀態(tài)__，這導(dǎo)致了胚胎發(fā)育率低；另一方面是對非人靈長類動物胚胎進(jìn)行操作的技術(shù)尚不完善。3．原理：動物細(xì)胞核具有__全能性__。4．基本過程深度指津(1)上圖中核移植操作是把供體細(xì)胞導(dǎo)入去核的卵母細(xì)胞透明帶下，然后促進(jìn)細(xì)胞融合，該法因?qū)β涯讣?xì)胞損傷較小且操作簡便，現(xiàn)較為常用。還有一種操作是用微型注射針吸出供體細(xì)胞核后，直接導(dǎo)入去核的卵母細(xì)胞中。(2)對卵母細(xì)胞去核時，實質(zhì)上是去除__紡錘體—染色體復(fù)合物__。核的位置靠近第一極體，因此在去核的同時連同第一極體一起去掉。目的：使核移植后得到的胚胎或動物的核遺傳物質(zhì)__全部來自有重要利用價值的動物提供的體細(xì)胞__。知識2動物體細(xì)胞核移植技術(shù)的應(yīng)用前景及存在的問題應(yīng)用①加速家畜__遺傳改良進(jìn)程__、促進(jìn)優(yōu)良畜群繁育；②增加瀕危動物存活數(shù)量；③轉(zhuǎn)基因克隆動物作為__生物反應(yīng)器__，生產(chǎn)珍貴的醫(yī)用蛋白；④用于細(xì)胞、組織或器官的__移植__(由轉(zhuǎn)基因克隆動物提供或人的核移植胚胎干細(xì)胞誘導(dǎo)分化提供)；⑤用于科學(xué)研究存在的問題①成功率非常低；②克隆動物存在著__健康問題__，表現(xiàn)出遺傳和生理缺陷等概念思辨1．判斷下列說法的正誤：(1)與克隆羊培養(yǎng)相比較，克隆猴的體細(xì)胞核移植更加困難。(√)(2)用物理、化學(xué)或生物的方法激活重構(gòu)胚，使其完成細(xì)胞分裂和發(fā)育進(jìn)程。(×)提示：激活重構(gòu)胚的方法是物理或化學(xué)方法。(3)克隆牛的遺傳物質(zhì)全部來自供體奶牛，克隆牛犢和供體完全相同。(×)提示：克隆牛的核遺傳物質(zhì)全部來自供體奶牛，但是細(xì)胞質(zhì)中的遺傳物質(zhì)來自卵母細(xì)胞。2．通過體細(xì)胞核移植產(chǎn)生的克隆動物屬于__無性__生殖，因為__沒有經(jīng)過生殖細(xì)胞的結(jié)合__。3．克隆動物的親本有三個，即體細(xì)胞核供體、卵母細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)供體和代孕母體(受體)。簡述一下克隆動物的遺傳與三個親本的關(guān)系。提示：①克隆動物細(xì)胞核基因來自體細(xì)胞核供體，因此，克隆動物的性狀與體細(xì)胞核供體基本相同；②克隆動物的細(xì)胞質(zhì)基因來自卵母細(xì)胞，因此，克隆動物的性狀與卵母細(xì)胞供體極少部分相同；③代孕母體沒有為克隆動物提供遺傳物質(zhì)，因此，克隆動物的性狀與代孕母體沒有直接關(guān)系。典題說法考向體細(xì)胞核移植與克隆動物(多選)(2023·連云港2月調(diào)研)為研究治療性克隆能否用于帕金森病的治療，科研人員利用“人帕金森病模型鼠”進(jìn)行了如圖所示實驗，相關(guān)說法正確的是(BC)A．上述過程體現(xiàn)了動物細(xì)胞的全能性B．過程③選取的胚胎干細(xì)胞具有細(xì)胞體積小、細(xì)胞核大、核仁明顯等特點C．鼠皮膚細(xì)胞培養(yǎng)與過程②所用的培養(yǎng)液中都需要添加血清等物質(zhì)D．過程⑤需要對受體小鼠注射相應(yīng)的免疫抑制劑，以避免發(fā)生免疫排斥反應(yīng)解析：圖示過程中體現(xiàn)了動物細(xì)胞核的全能性，A錯誤；胚胎干細(xì)胞體積小、細(xì)胞核大、核仁明顯，且具發(fā)育的全能性，B正確；血清中存在未知的營養(yǎng)物質(zhì)，動物細(xì)胞培養(yǎng)過程中需要添加血清等物質(zhì)，C正確；過程⑤移植的神經(jīng)元由小鼠自身細(xì)胞誘導(dǎo)分化而來，不會發(fā)生免疫排斥反應(yīng)，D錯誤?？键c3細(xì)胞融合與單克隆抗體的制備考點落實知識1動物細(xì)胞融合技術(shù)概念使兩個或多個動物細(xì)胞結(jié)合形成一個細(xì)胞的技術(shù)，融合后的細(xì)胞稱為__雜交細(xì)胞__過程膜融合→質(zhì)融合→核融合常用方法__PEG__融合法、電融合法和__滅活病毒__誘導(dǎo)法等成功標(biāo)志細(xì)胞核融合，能進(jìn)行有絲分裂原理細(xì)胞膜具有__流動性__的結(jié)構(gòu)特點意義突破了有性雜交的局限，使__遠(yuǎn)緣雜交__成為可能應(yīng)用①成為研究__細(xì)胞遺傳__、__細(xì)胞免疫_(dá)_、腫瘤和培育生物新品種等的重要手段；②發(fā)展出雜交瘤技術(shù)，制造__單克隆抗體__知識2單克隆抗體及其應(yīng)用1．單克隆抗體的制備(1)制備原理①每一個B淋巴細(xì)胞只分泌一種特異性抗體。②骨髓瘤細(xì)胞能在體外大量__增殖__。③B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合得到的__雜交瘤細(xì)胞__，既能迅速大量增殖，又能產(chǎn)生__抗體__。(2)制備過程解疑釋惑(1)兩次篩選的方法和目的不同第一次是用特定的__選擇培養(yǎng)基__篩選雜交瘤細(xì)胞：未融合的細(xì)胞和同種細(xì)胞融合后形成的細(xì)胞都會死亡，只有融合的雜交瘤細(xì)胞才能生長。第二次是用多孔培養(yǎng)皿(如96孔板)__克隆化培養(yǎng)__和抗體檢測，經(jīng)多次篩選得到能分泌所需抗體的細(xì)胞群。利用了__抗原—抗體特異性結(jié)合__的免疫學(xué)原理。(2)雜交瘤細(xì)胞的克隆化培養(yǎng)①新融合的雜交瘤細(xì)胞不穩(wěn)定，容易失去分泌抗體的性質(zhì)，一般需要進(jìn)行幾次檢測以確保其穩(wěn)定性。②克隆化培養(yǎng)是指由單個細(xì)胞分裂增殖獲得細(xì)胞團的培養(yǎng)過程。將雜交瘤細(xì)胞用培養(yǎng)液充分稀釋，接種到96孔細(xì)胞培養(yǎng)板，且每個孔中盡量只接種__1__個，通過培養(yǎng)使其增殖為單克隆。一般經(jīng)過3～4次培養(yǎng)才可以獲得穩(wěn)定的單克隆。若再次檢測抗體為陽性，就可以大規(guī)模生產(chǎn)。2．單克隆抗體的優(yōu)點：能準(zhǔn)確地識別__抗原的細(xì)微差異__，與特定抗原發(fā)生特異性結(jié)合，并且可以__大量制備__。(與從血清中提取的血清抗體相比)3．單克隆抗體的應(yīng)用(1)作為__診斷試劑__，具有準(zhǔn)確、高效、簡易、快速的優(yōu)點。(2)用于治療疾病和__運載藥物__。歸納總結(jié)植物體細(xì)胞雜交與動物細(xì)胞融合的比較比較項目植物體細(xì)胞雜交動物細(xì)胞融合原理細(xì)胞膜的流動性、細(xì)胞的全能性細(xì)胞膜的流動性、細(xì)胞增殖融合前處理先除去細(xì)胞壁先使細(xì)胞分散開使用的酶纖維素酶和果膠酶胰蛋白酶或膠原蛋白酶誘導(dǎo)手段電融合法、離心法(物理法)；PEG融合法、高Ca2+—高pH融合法(化學(xué)法)等PEG融合法、電融合法、滅活的病毒誘導(dǎo)法等過程細(xì)胞A、B↓去壁原生質(zhì)體A、B↓融合融合的原生質(zhì)體再生出↓細(xì)胞壁雜種細(xì)胞植物組↓織培養(yǎng)雜種植株細(xì)胞A、B↓融合雜交細(xì)胞↓有絲分裂多個相同雜交細(xì)胞結(jié)果雜種植株雜交細(xì)胞應(yīng)用培育植物新品種如用于制備單克隆抗體意義克服了遠(yuǎn)緣雜交不親和的障礙，打破了生殖隔離，擴展了雜交的親本組合突破有性雜交的局限，使遠(yuǎn)緣雜交成為可能概念思辨1．判斷下列說法的正誤：(1)動物細(xì)胞融合過程中既有細(xì)胞膜融合也有核的融合。(√)(2)動物細(xì)胞融合與植物原生質(zhì)體融合都利用了膜流動性的原理。(√)(3)植物原生質(zhì)體融合后再生出細(xì)胞壁，形成雜交細(xì)胞；動物細(xì)胞融合后形成重組細(xì)胞。(×)提示：植物體細(xì)胞雜交過程中形成的是雜種細(xì)胞，動物細(xì)胞融合得到雜交細(xì)胞，而核移植后得到的是重組細(xì)胞(重構(gòu)胚)。(4)用特定的抗原對小鼠進(jìn)行免疫后，從小鼠脾臟中只能得到一種B淋巴細(xì)胞。(×)提示：免疫后的小鼠從脾臟中獲取的是多種B淋巴細(xì)胞。(5)B淋巴細(xì)胞在體外培養(yǎng)條件下只能存活幾天，而且它不可能無限增殖，因此不會影響雜交瘤細(xì)胞的生長。(√)(6)單克隆抗體是單個B淋巴細(xì)胞增殖并產(chǎn)生的抗體。(×)提示：單克隆抗體是雜交瘤細(xì)胞產(chǎn)生的抗體。(7)單克隆抗體制備過程中，取材和培養(yǎng)階段都用到了動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)，原理是細(xì)胞增殖。(√)2．制備單克隆抗體前，對動物免疫的原因：__B淋巴細(xì)胞要經(jīng)過免疫過程，即接觸抗原，增殖分化為有特異性免疫功能的B淋巴細(xì)胞，才能產(chǎn)生相應(yīng)的抗體__。3．細(xì)胞會自發(fā)融合，但頻率很低，滅活的仙臺病毒在細(xì)胞融合中的應(yīng)用較為廣泛。什么是滅活？滅活病毒誘導(dǎo)融合的原理是什么？提示：滅活是指用物理或化學(xué)手段使病毒或細(xì)菌失去感染能力，但是并不破壞這些病原體的抗原結(jié)構(gòu)，如新冠病毒滅活疫苗。滅活病毒誘導(dǎo)細(xì)胞融合的原理是病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能夠與細(xì)胞膜上的糖蛋白發(fā)生作用，使細(xì)胞互相凝聚，細(xì)胞膜上的蛋白質(zhì)分子和脂質(zhì)分子重新排布，細(xì)胞膜打開，細(xì)胞發(fā)生融合。典題說法考向1動物細(xì)胞融合(多選)(2022·江蘇卷)下圖表示利用細(xì)胞融合技術(shù)進(jìn)行基因定位的過程，在人—鼠雜種細(xì)胞中人的染色體會以隨機方式丟失，通過分析基因產(chǎn)物進(jìn)行基因定位?，F(xiàn)檢測細(xì)胞Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ中人的4種酶活性，只有Ⅱ具有芳烴羥化酶活性，只有Ⅲ具有胸苷激酶活性，Ⅰ、Ⅲ都有磷酸甘油酸激酶活性，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ均有乳酸脫氫酶活性。下列相關(guān)敘述正確的有(ACD)A．加入滅活仙臺病毒的作用是促進(jìn)細(xì)胞融合B．細(xì)胞Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ分別為人—人、人—鼠、鼠—鼠融合細(xì)胞C．芳烴羥化酶基因位于2號染色體上，乳酸脫氫酶基因位于11號染色上D．胸苷激酶基因位于17號染色體上，磷酸甘油酸激酶基因位于X染色體上解析：細(xì)胞Ⅰ和細(xì)胞Ⅲ中均有人類染色體丟失，均為人—鼠雜種細(xì)胞，B錯誤。考向2單克隆抗體的制備及其應(yīng)用(多選)(2023·揚州期初)如圖是單克隆抗體制備過程示意圖，1～3代表相關(guān)過程，a～e代表相關(guān)細(xì)胞，其中c是兩兩融合的細(xì)胞。以下敘述錯誤的是(BC)A．過程1是給小鼠注射特定抗原蛋白，可刺激小鼠產(chǎn)生特異性免疫反應(yīng)B．過程2的促融方法可采用電融合技術(shù)，該技術(shù)能擊穿核膜促使核融合C．c細(xì)胞有3種，每種細(xì)胞染色體組數(shù)不相等，e細(xì)胞是雜交瘤細(xì)胞D．過程3是進(jìn)行抗體檢測，并克隆產(chǎn)生陽性細(xì)胞的過程解析：過程2的促融方法可采用電融合技術(shù)，能擊穿細(xì)胞膜促使不同細(xì)胞的細(xì)胞膜融合，B錯誤；c細(xì)胞為雜交瘤細(xì)胞，圖中的3種雜交瘤細(xì)胞均由B細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合產(chǎn)生，因B細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞都有2個染色體組，3種雜交瘤細(xì)胞均含4個染色體組，e細(xì)胞是能產(chǎn)化特定抗體的雜交瘤細(xì)胞，C錯誤。(2023·南通三模)如圖為制備新冠病毒S蛋白的單克隆抗體的流程圖，相關(guān)敘述錯誤的是(C)A．過程①用S蛋白反復(fù)注射小鼠的目的是產(chǎn)生足夠多的已免疫的B淋巴細(xì)胞B．過程②通過聚乙二醇或滅活的病毒誘導(dǎo)融合可得到多種細(xì)胞1C．過程③使用選擇培養(yǎng)基篩選獲得多種雜交瘤細(xì)胞，這些細(xì)胞中染色體數(shù)目一般不同D．過程④通過多次克隆化培養(yǎng)和抗體檢測獲得的細(xì)胞3能分泌抗S蛋白的抗體解析：由圖示可知，過程①是用S蛋白反復(fù)注射小鼠以獲得足夠多的已免疫的B淋巴細(xì)胞，A正確；過程②通過聚乙二醇或滅活的病毒誘導(dǎo)骨髓瘤細(xì)胞與B淋巴細(xì)胞融合，可得到多種融合細(xì)胞1，B正確；過程③使用選擇培養(yǎng)基篩選獲得多種雜交瘤細(xì)胞，這些細(xì)胞中染色體數(shù)目一般相同，C錯誤；過程④通過多次克隆化培養(yǎng)和抗體檢測獲得的細(xì)胞3既能無限增殖，又能分泌抗S蛋白的抗體，D正確。1．(2023·蘇錫常鎮(zhèn)一模)下列關(guān)于小鼠腎小管上皮細(xì)胞體外培養(yǎng)及應(yīng)用的敘述，錯誤的是(B)A．將腎皮質(zhì)充分剪碎、過濾、離心，獲得腎小管上皮組織塊B．實驗開始前，實驗器械和試劑都必須經(jīng)過高壓蒸汽滅菌處理C．進(jìn)行傳代培養(yǎng)時，貼壁腎小管上皮細(xì)胞需用胰蛋白酶等處理D．建立小鼠腎小管上皮細(xì)胞培養(yǎng)體系可為腎病的體外研究提供實驗基礎(chǔ)解析：在無菌條件下，將腎皮質(zhì)充分剪碎、過濾、離心，獲得腎小管上皮組織塊，再用胰蛋白酶等處理，形成分散的懸浮細(xì)胞，A正確；不同的用具、材料要用不同的滅菌方法，不能耐高溫的試劑及要求保持干燥的用具不能采用高壓蒸汽滅菌法滅菌，B錯誤；在進(jìn)行傳代培養(yǎng)時，貼壁腎小管上皮細(xì)胞需用胰蛋白酶等處理，分散為單個細(xì)胞制成細(xì)胞懸液，然后分瓶培養(yǎng)，C正確；動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)為細(xì)胞加工改造提供了大量的動物細(xì)胞原材料，建立小鼠腎小管上皮細(xì)胞培養(yǎng)體系可為腎病的體外研究提供實驗基礎(chǔ)，D正確。2．(多選)如圖為細(xì)胞融合的示意圖，下列敘述正確的是(BC)A．若a細(xì)胞和b細(xì)胞是植物細(xì)胞，需先去分化再誘導(dǎo)融合B．a(chǎn)細(xì)胞和b細(xì)胞之間的融合需要促融處理后才能實現(xiàn)C．c細(xì)胞的形成與a、b細(xì)胞膜的流動性都有關(guān)D．c細(xì)胞將同時表達(dá)a細(xì)胞和b細(xì)胞中的所有基因解析：若a細(xì)胞和b細(xì)胞是植物細(xì)胞，需先去細(xì)胞壁再誘導(dǎo)融合；細(xì)胞之間的融合需要促融處理；細(xì)胞融合與細(xì)胞膜的流動性有關(guān)；由于基因的選擇性表達(dá)及基因間的相互作用，c細(xì)胞不能表達(dá)a細(xì)胞和b細(xì)胞中的所有基因。3．(2021·遼寧卷)下圖是利用體細(xì)胞核移植技術(shù)克隆優(yōu)質(zhì)奶牛的簡易流程圖，有關(guān)敘述正確的是(B)A．后代丁的遺傳性狀由甲和丙的遺傳物質(zhì)共同決定B．過程①需要提供95%空氣和5%CO2的混合氣體C．過程②常使用顯微操作去核法對受精卵進(jìn)行處理D．過程③將激活后的重組細(xì)胞培養(yǎng)至原腸胚后移植解析：后代丁的細(xì)胞核的遺傳物質(zhì)來自甲，細(xì)胞質(zhì)的遺傳物質(zhì)來自乙，則丁的遺傳性狀由甲和乙的遺傳物質(zhì)共同決定，A錯誤；動物細(xì)胞培養(yǎng)過程中需要提供95%空氣(保證細(xì)胞的有氧呼吸)和5%CO2(維持培養(yǎng)液的pH)的混合氣體，B正確；過程②常使用顯微操作去核法對卵母細(xì)胞進(jìn)行處理，C錯誤；過程③將激活后的重組細(xì)胞培養(yǎng)至囊胚或桑葚胚后移植，D錯誤。4．中藥在我國憑借切實的療效得到了廣泛應(yīng)用。芍藥的主要藥效成分是芍藥苷，研究人員制備了抗芍藥苷的單克隆抗體。下列敘述錯誤的是(A)A．抗芍藥苷的單克隆抗體由淋巴細(xì)胞產(chǎn)生B．抗芍藥苷的單克隆抗體的本質(zhì)是蛋白質(zhì)C．抗芍藥苷的單克隆抗體可在體外大量制備D．抗芍藥苷的單克隆抗體特異性強、靈敏度高解析：抗芍藥苷的單克隆抗體由雜交瘤細(xì)胞產(chǎn)生，A錯誤。5．(2022·山東卷)如圖所示，將由2種不同的抗原分別制備的單克隆抗體分子，在體外解偶聯(lián)后重新偶聯(lián)可制備雙特異性抗體，簡稱雙抗。下列說法錯誤的是(D)A．雙抗可同時與2種抗原結(jié)合B．利用雙抗可以將蛋白類藥物運送至靶細(xì)胞C．篩選雙抗時需使用制備單克隆抗體時所使用的2種抗原D．同時注射2種抗原可刺激B細(xì)胞分化為產(chǎn)雙抗的漿細(xì)胞解析：根據(jù)題意，雙抗具有雙特異性，即可同時與2種抗原發(fā)生特異性結(jié)合，A正確；根據(jù)抗體與抗原特異性結(jié)合的原理，利用雙抗可以將蛋白類藥物運送至靶細(xì)胞，從而使藥物作用于特定的靶細(xì)胞，B正確；雙抗是由2種不同的抗原分別制備的單克隆抗體分子經(jīng)過解偶聯(lián)后重新偶聯(lián)形成的，故篩選時需要使用制備單克隆抗體時所使用的2種抗原來進(jìn)行抗原—抗體檢測，從而篩選出具有雙特異性的抗體，C正確；同時注射2種抗原會刺激B細(xì)胞分化形成不同的漿細(xì)胞，進(jìn)而產(chǎn)生兩種抗體，一種漿細(xì)胞只能產(chǎn)生一種抗體，并不能產(chǎn)生雙抗，D錯誤。配套精練一、單項選擇題1．(2024·海安期初監(jiān)測)反應(yīng)器細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)是以反應(yīng)器懸浮培養(yǎng)動物細(xì)胞生產(chǎn)或研制生物制品的一種通用平臺技術(shù)，相關(guān)敘述正確的是(A)A．懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞會因密度過大等因素使細(xì)胞分裂受阻B．細(xì)胞培養(yǎng)時需通入一定量的二氧化碳刺激細(xì)胞進(jìn)行有氧呼吸C．傳代培養(yǎng)時，懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞需用胰蛋白酶處理，再用離心法收集D．為了保證細(xì)胞培養(yǎng)的無毒條件，可以添加適量的抗生素解析：懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞因細(xì)胞密度過大、有害代謝物積累和營養(yǎng)物質(zhì)缺乏而使分裂受阻，A正確；細(xì)胞培養(yǎng)時，需通入95%的空氣和5%CO2，其中5%CO2的主要作用是維持培養(yǎng)液的pH，B錯誤；進(jìn)行傳代培養(yǎng)時，懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞可直接用離心法收集后用胰蛋白酶處理制成細(xì)胞懸液，然后分瓶培養(yǎng)，C錯誤；抗生素可用于殺滅細(xì)菌，動物細(xì)胞培養(yǎng)時可添加適量抗生素創(chuàng)造無菌環(huán)境，D錯誤。2．(2023·南京、鹽城二模)科研人員利用動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)生產(chǎn)可食用“人造肉”的基本流程如下圖。下列有關(guān)敘述正確的是(D)eq\x(\a\al(動物,組織))eq\o(―――→,\s\up7(分離))eq\x(干細(xì)胞)eq\o(―――→,\s\up7(擴大培養(yǎng)),\s\do5(分化))eq\x(3D打印技術(shù))―→eq\x(\a\al(肌肉,組織))A．干細(xì)胞在培養(yǎng)過程中可能會發(fā)生同源染色體的分離B．干細(xì)胞能分化為成年動物體內(nèi)任何一種類型的細(xì)胞C．評價人造肉質(zhì)量的標(biāo)準(zhǔn)是細(xì)胞內(nèi)控制蛋白質(zhì)合成基因的含量D．從食品安全角度考慮，制作人造肉的過程一般不添加抗生素解析：干細(xì)胞進(jìn)行有絲分裂，不會發(fā)生同源染色體的分離，A錯誤；干細(xì)胞是已經(jīng)分化的細(xì)胞，其全能性受到抑制，不能分化成任意細(xì)胞，B錯誤；評價人造肉質(zhì)量的標(biāo)準(zhǔn)主要是必需氨基酸的含量和種類，C錯誤。3．(2024·連云港調(diào)研一)科學(xué)家已把多種器官的細(xì)胞轉(zhuǎn)變成了誘導(dǎo)多功能干細(xì)胞，并讓誘導(dǎo)多功能干細(xì)胞分化成了皮膚、肌肉、軟骨、神經(jīng)細(xì)胞以及可以同步搏動的心臟細(xì)胞。下列相關(guān)敘述正確的是(D)A．成熟細(xì)胞被重新編程的過程中細(xì)胞的分化程度逐漸升高B．多能干細(xì)胞分化成神經(jīng)細(xì)胞的過程中發(fā)生了基因突變，有些基因不能表達(dá)C．多能干細(xì)胞與成熟細(xì)胞相比，細(xì)胞內(nèi)核酸相同，蛋白質(zhì)卻不完全相同D．誘導(dǎo)多能干細(xì)胞分化的過程與基因有關(guān)，與細(xì)胞直接生活的微環(huán)境也有關(guān)解析：成熟細(xì)胞被重新編程的過程中細(xì)胞的分化程度逐漸降低，A錯誤；多能干細(xì)胞分化成神經(jīng)細(xì)胞的過程中發(fā)生了細(xì)胞分化，進(jìn)行了基因的選擇性表達(dá)，有些基因不能表達(dá)，B錯誤；多能干細(xì)胞與成熟細(xì)胞相比，細(xì)胞經(jīng)歷了細(xì)胞分化，在分化過程中，表達(dá)了一些相同的基因，也表達(dá)了一些不同的基因，使得細(xì)胞內(nèi)的mRNA不完全相同，所以細(xì)胞內(nèi)核酸和蛋白質(zhì)都不完全相同，C錯誤；細(xì)胞分化的過程是基因的選擇性表達(dá)過程，基因的選擇性表達(dá)過程不僅與基因有關(guān)，也會受細(xì)胞直接生活的微環(huán)境影響，D正確。4．世界首例體細(xì)胞克隆北極狼在我國誕生。克隆北極狼的供體細(xì)胞來自一只野生北極狼的皮膚樣本，卵母細(xì)胞來自一只處于發(fā)情期的母犬，代孕母體則是一只比格犬。下列有關(guān)敘述正確的是(B)A．供體細(xì)胞注入卵母細(xì)胞透明帶內(nèi)后，可自行進(jìn)入卵母細(xì)胞B．MⅡ期卵母細(xì)胞中含有促進(jìn)體細(xì)胞核表現(xiàn)出全能性的物質(zhì)條件C．細(xì)胞分裂、分化形成克隆胚胎的過程中發(fā)生了基因重組D．對比格犬進(jìn)行胚胎移植前需要進(jìn)行免疫排斥反應(yīng)檢測解析：供體細(xì)胞注入卵母細(xì)胞透明帶內(nèi)后，還需要采用電融合法等誘導(dǎo)才能使供體細(xì)胞進(jìn)入卵母細(xì)胞形成重構(gòu)胚，A錯誤；細(xì)胞分裂、分化形成克隆胚胎的過程是有絲分裂過程，而基因重組發(fā)生在減數(shù)分裂過程中，C錯誤；受體不會對移植的胚胎產(chǎn)生免疫排斥反應(yīng)，進(jìn)行胚胎移植前不需要進(jìn)行免疫排斥反應(yīng)檢測，D錯誤。5．在將動物組織塊分散成單個細(xì)胞時，可以使用胰蛋白酶。由此判斷，以下推測不合理的是(C)A．動物細(xì)胞之間可能依靠蛋白質(zhì)相互聯(lián)系B．處理時一定要注意處理時間、加酶量C．胰蛋白酶一定不會對動物細(xì)胞造成損傷D．哺乳動物細(xì)胞培養(yǎng)液的pH應(yīng)與胰蛋白酶作用的適宜pH基本一致解析：使用胰蛋白酶可以將動物組織塊分散成單個細(xì)胞，故動物細(xì)胞之間可能依靠蛋白質(zhì)相互聯(lián)系；使用胰蛋白酶處理，使動物組織變?yōu)閱蝹€細(xì)胞時，一定要注意處理時間、加酶量，否則會造成細(xì)胞膜的破壞；酶作用的發(fā)揮需要適宜的條件，故動物細(xì)胞培養(yǎng)液pH應(yīng)與胰蛋白酶作用的適宜pH基本一致。6．(2022·福建卷)我國科研人員在航天器微重力環(huán)境下對多能干細(xì)胞的分化進(jìn)行了研究，發(fā)現(xiàn)與正常重力相比，多能干細(xì)胞在微重力環(huán)境下加速分化為功能健全的心肌細(xì)胞。下列敘述錯誤的是(A)A．微重力環(huán)境下多能干細(xì)胞和心肌細(xì)胞具有相同的細(xì)胞周期B．微重力環(huán)境下進(jìn)行人體細(xì)胞的體外培養(yǎng)需定期更換培養(yǎng)液C．多能干細(xì)胞在分化過程中蛋白質(zhì)種類和數(shù)量發(fā)生了改變D．該研究有助于了解微重力對細(xì)胞生命活動的影響解析：心肌細(xì)胞已經(jīng)高度分化，不能再分裂，沒有細(xì)胞周期，A錯誤；進(jìn)行細(xì)胞的體外培養(yǎng)需定期更換培養(yǎng)液，避免代謝廢物對細(xì)胞的毒害作用，B正確；分化過程的本質(zhì)是基因的選擇性表達(dá)，所以多能干細(xì)胞在分化過程中蛋白質(zhì)種類和數(shù)量發(fā)生了改變，C正確；多能干細(xì)胞在微重力環(huán)境下能加速分化，所以該研究有助于了解微重力對細(xì)胞生命活動的影響，D正確。7．(2023·南京、鹽城一模)下圖是生產(chǎn)抗新冠病毒的單克隆抗體的過程。下列有關(guān)敘述正確的是(C)A．②過程經(jīng)細(xì)胞融合，獲得的雜交瘤細(xì)胞只有一種B．③過程經(jīng)過選擇培養(yǎng)后，只有自身融合的細(xì)胞死亡C．④過程進(jìn)行抗體檢測，若結(jié)果為陰性，則應(yīng)重新實驗D．為保證獲得足量相應(yīng)的B淋巴細(xì)胞，①過程應(yīng)給小鼠注射大量的新冠病毒解析：從小鼠體內(nèi)分離出的B淋巴細(xì)胞有多種，②過程融合形成的雜交瘤細(xì)胞有多種，A錯誤；③過程經(jīng)過選擇培養(yǎng)后，自身融合細(xì)胞和未融合的細(xì)胞都死亡，B錯誤；④過程若進(jìn)行專一抗體檢測結(jié)果為陰性，說明沒有形成符合要求的雜交瘤細(xì)胞，需要重新實驗，C正確；為保證獲得相應(yīng)的B淋巴細(xì)胞，①過程應(yīng)給小鼠反復(fù)注射適量的新冠病毒的抗原，而非直接注射病毒，D錯誤。8．科學(xué)家通過兩個關(guān)鍵因子誘導(dǎo)DNA去甲基化，將人類多能性干細(xì)胞轉(zhuǎn)化為8細(xì)胞階段全能性胚胎樣細(xì)胞(8CL細(xì)胞)，相比于誘導(dǎo)多能干細(xì)胞(iPS細(xì)胞)，它不僅能分化成胎盤組織，還有潛力發(fā)育成更成熟的器官。下列說法錯誤的是(D)A．DNA去甲基化未改變靶基因的堿基排序，有利于基因的表達(dá)B．體外培養(yǎng)時，細(xì)胞密度、有害代謝物等可影響8CL細(xì)胞的增殖C．利用iPS細(xì)胞誘導(dǎo)產(chǎn)生的器官進(jìn)行移植，可避免免疫排斥反應(yīng)D．制備8CL細(xì)胞的過程，細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)和功能不發(fā)生改變解析：DNA的甲基化中生物基因的堿基序列沒有變化，DNA去甲基化也未改變靶基因的堿基排序，有利于基因的表達(dá)，A正確；體外培養(yǎng)時，8CL細(xì)胞的增殖受細(xì)胞密度、有害代謝物等的影響，B正確；iPS細(xì)胞來自自身，利用iPS細(xì)胞誘導(dǎo)產(chǎn)生的器官進(jìn)行移植，可避免免疫排斥反應(yīng)，C正確；制備8CL細(xì)胞的過程，細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)和功能均發(fā)生改變，D錯誤。9．(2024·如皋期初)綠斑駁花葉病毒常導(dǎo)致西瓜發(fā)病或減產(chǎn)，下圖示科研人員制備抗綠斑駁花葉病毒單克隆抗體的部分過程，有關(guān)敘述錯誤的是(B)A．以提純的綠斑駁花葉病毒作為抗原對小鼠甲進(jìn)行免疫B．單細(xì)胞懸液可由小鼠甲的脾臟用鹽酸解離分散制得C．制備過程中篩選1和篩選2的原理和目的均不相同D．制成的單克隆抗體可用于檢測西瓜是否感染綠斑駁花葉病毒解析：制備抗綠斑駁花葉病毒的單克隆抗體，要用特異性抗原對小鼠進(jìn)行免疫，即以提純的綠斑駁花葉病毒作為抗原對小鼠甲進(jìn)行免疫，A正確；鹽酸會破壞細(xì)胞，單細(xì)胞懸液不可由小鼠甲的脾臟用鹽酸解離分散制得，B錯誤；制備過程中篩選1是篩選出雜交瘤細(xì)胞，利用選擇培養(yǎng)基進(jìn)行選擇，篩選2的目的是篩選出產(chǎn)生單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞，原理是抗原和抗體特異性結(jié)合，C正確；制成的單克隆抗體和綠斑駁花葉病毒特異性結(jié)合，可用于檢測西瓜是否感染綠斑駁花葉病毒，D正確。10．某研究小組為測定某種藥物對體外培養(yǎng)細(xì)胞的毒性，準(zhǔn)備對某種動物的肝腫瘤細(xì)胞(甲)和正常肝細(xì)胞(乙)進(jìn)行動物細(xì)胞培養(yǎng)。下列敘述正確的是(B)A．取出動物組織后，用胃蛋白酶處理組織塊可分散成單個細(xì)胞B．乙細(xì)胞可能需要貼附于某些基質(zhì)表面才能生長增殖C．甲的培養(yǎng)過程一定會出現(xiàn)接觸抑制，隨后細(xì)胞停止增殖D．若甲、乙來源于同一生物個體，則其基因組成相同解析：由于胃蛋白酶的適宜pH為2左右，所以要用胰蛋白酶、膠原蛋白酶等處理動物組織以分散成單個細(xì)胞，A錯誤；體外培養(yǎng)的正常動物細(xì)胞，大多數(shù)細(xì)胞需要貼附于某些基質(zhì)表面才能生長增殖，B正確；肝腫瘤細(xì)胞能無限增殖，其培養(yǎng)過程中不會出現(xiàn)接觸抑制，細(xì)胞也不會停止增殖，C錯誤；肝腫瘤細(xì)胞是正常肝細(xì)胞發(fā)生基因突變后產(chǎn)生的，若甲、乙來源于同一生物個體，則其基因組成不相同，D錯誤。11．江蘇省研究人員利用體細(xì)胞核移植技術(shù)成功培育出蘇淮豬“龍鳳胎”，主要步驟如下。相關(guān)敘述錯誤的是(C)步驟①：分離培養(yǎng)一對蘇淮豬的耳組織體細(xì)胞，低溫保存步驟②：從其他品種母豬卵巢中獲取卵母細(xì)胞并培養(yǎng)步驟③：細(xì)胞核移植獲得重構(gòu)胚步驟④：將不同性別的多個胚胎移植到代孕母豬體內(nèi)步驟⑤：孕育出蘇淮小豬“龍鳳胎”A．步驟①分離獲取蘇淮豬耳組織體細(xì)胞時需要使用胰蛋白酶、動物細(xì)胞培養(yǎng)液等B．步驟②培養(yǎng)卵母細(xì)胞時，應(yīng)一直培養(yǎng)到卵母細(xì)胞外出現(xiàn)1個極體C．步驟③可將步驟①獲得的體細(xì)胞直接顯微注射到培養(yǎng)成熟的卵母細(xì)胞中D．步驟④移植胚胎的性別可依據(jù)步驟①提供體細(xì)胞個體的性別確定解析：步驟①分離獲取蘇淮豬耳組織體細(xì)胞時需要使用胰蛋白酶處理，目的是獲得單細(xì)胞懸液，也需要動物細(xì)胞培養(yǎng)液等，以保持細(xì)胞的活性，A正確；步驟②培養(yǎng)卵母細(xì)胞時，應(yīng)培養(yǎng)到減數(shù)分裂Ⅱ期，此時卵母細(xì)胞外存在一個極體，B正確；步驟③可將步驟①獲得的體細(xì)胞直接顯微注射到培養(yǎng)成熟的去核卵母細(xì)胞中，C錯誤；步驟④移植胚胎的性別由步驟①中提供體細(xì)胞個體的性別確定，D正確。12．(2023·蘇錫常鎮(zhèn)二模)電穿孔法通過將高濃度動物細(xì)胞懸液短暫暴露于高壓脈沖電流中，外源DNA可經(jīng)高電壓在細(xì)胞膜上形成的可復(fù)性閉合小孔進(jìn)入細(xì)胞并整合到染色體上，以實現(xiàn)細(xì)胞轉(zhuǎn)染。下列敘述正確的是(B)A．培養(yǎng)動物細(xì)胞懸液需要定期添加KCl以維持pH穩(wěn)定B．小孔形成后，適當(dāng)降溫可以延長外源DNA分子可進(jìn)入時間C．貼壁生長細(xì)胞比懸浮生長細(xì)胞更適合用電穿孔法進(jìn)行轉(zhuǎn)染D．高電壓會導(dǎo)致大部分細(xì)胞凋亡，采用高濃度細(xì)胞懸液可提高轉(zhuǎn)染成功率解析：培養(yǎng)動物細(xì)胞懸液需要定期提供CO2以維持pH穩(wěn)定，A錯誤；小孔形成后，適當(dāng)降溫可以降低細(xì)胞膜的流動性，延長外源DNA分子可進(jìn)入時間，B正確；電穿孔法通過將高濃度動物細(xì)胞懸液短暫暴露于高壓脈沖電流中，所以懸浮生長細(xì)胞比貼壁生長細(xì)胞更適合用電穿孔法進(jìn)行轉(zhuǎn)染，C錯誤；高電壓會導(dǎo)致大部分細(xì)胞壞死，采用高濃度細(xì)胞懸液可提高轉(zhuǎn)染成功率，D錯誤。13．(2023·南京三模)我國科學(xué)家成功地用iPS細(xì)胞克隆出了活體小鼠，部分流程如下圖所示，其中Kdm4d為組蛋白去甲基化酶，TSA為組蛋白脫乙酰酶抑制劑。下列有關(guān)敘述正確的是(A)A．組蛋白乙?；腿ゼ谆欣谥貥?gòu)胚后續(xù)的胚胎發(fā)育過程B．①過程的小分子化合物誘導(dǎo)小鼠成纖維細(xì)胞突變?yōu)閕PS細(xì)胞C．③過程中使用有活性的病毒處理的目的是誘導(dǎo)細(xì)胞融合D．圖示流程運用了重組DNA、體細(xì)胞核移植、胚胎移植等技術(shù)解析：突變具有不定向性，①過程中小分子化合物誘導(dǎo)小鼠成纖維細(xì)胞脫分化為iPS細(xì)胞，并未發(fā)生突變，B錯誤；③為動物細(xì)胞融合的過程，誘導(dǎo)動物細(xì)胞融合使用的是滅活的病毒，C錯誤；圖示流程運用了體細(xì)胞核移植、胚胎移植等技術(shù)，并未運用重組DNA技術(shù)，D錯誤。14．抗PD－L1單克隆抗體能與癌細(xì)胞膜表面的PD－L1特異性結(jié)合，因而具有治療某些癌癥的作用。如圖是制備抗PD－L1單克隆抗體的示意圖，下列敘述錯誤的是(B)A．在分離B淋巴細(xì)胞前，需要對小鼠注射PD－L1進(jìn)行免疫處理B．多孔玻璃板中的細(xì)胞為B淋巴細(xì)胞和鼠骨髓瘤細(xì)胞的融合細(xì)