1植物提取物金銀花提取物(25%綠原酸)1范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了金銀花提取物(25%綠原酸)的技術(shù)要求、檢驗方法、檢驗規(guī)則、包裝、運輸、貯存和保質(zhì)期要求。本標(biāo)準(zhǔn)適用于以忍冬科植物忍冬LonicerajaponicaThunb.的干燥花蕾或帶初開的花為原料，經(jīng)提2規(guī)范性引用文件下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件?！吨腥A人民共和國藥典(2015版)》第四部通則0512高效液相色譜法《中華人民共和國藥典(2015版)》第四部通則0821重金屬檢查法《中華人民共和國藥典(2015版)》第四部通則0832水分測定法《中華人民共和國藥典(2015版)》第四部通則0982粒度和粒度分布測定法《中華人民共和國藥典(2015版)》第四部通則1105《中華人民共和國藥典(2015版)》第四部通則1106《中華人民共和國藥典(2015版)》第四部通則2302灰分測定法《中華人民共和國藥典(2015版)》第四部通則2321《中華人民共和國藥典(2015版)》第四部通則8000試劑和標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)3技術(shù)要求3.1工藝要求3.1.1植物原料忍冬科植物忍冬LonicerajaponicaThunb.的干燥花3.1.2工藝過程金銀花→粉碎→提取→過濾→濃縮→柱層析分離→濃縮→干燥→產(chǎn)品3.2產(chǎn)品要求3.2.1感官要求應(yīng)符合表1的規(guī)定。表1感官要求淡黃色、色澤均勻2應(yīng)符合表2的規(guī)定。鑒別S峰，且各特征峰的相對保留時間在規(guī)定值的±5%之內(nèi)，規(guī)定值為0.76(峰1),1.00(峰2,S峰),1.04(峰3)重金屬(以Pb計)/(mg/kg)鉛(Pb)/(mg/kg)砷(As)/(mg/kg)汞(Hg)/(mg/kg)鎘(Cd)/(mg/kg)應(yīng)符合表3的規(guī)定。需氧菌總數(shù)/(CFU)/g大腸埃希菌不得檢出不得檢出按第A.2章中規(guī)定的方法進行檢驗，供試品的特征圖譜上應(yīng)呈現(xiàn)3個特征峰，與對照品(綠原酸)色值為：0.76(峰1,新綠原酸),1.00(峰2(S),綠原酸),1.04(峰3,隱綠原酸)。3按《中華人民共和國藥典(2015版)》第四部通則0982粒度和粒度分布測定法進行檢驗。按《中華人民共和國藥典(2015版)》第四部通則0832水分測定法進行檢驗。按《中華人民共和國藥典(2015版)》第四部通則2302灰分測定法進行檢驗。4.2.6重金屬(以Pb計)檢驗按《中華人民共和國藥典(2015版)》第四部通則0821重金屬檢查法進行檢驗。非無菌產(chǎn)品微生物限度檢查：微生物計非無菌產(chǎn)品微生物限度檢查：微生物計非無菌產(chǎn)品微生物限度檢查：控制菌檢非無菌產(chǎn)品微生物限度檢查：控制菌檢46.3運輸產(chǎn)品應(yīng)貯存于陰涼、清潔和干燥的倉庫中。堆碼距墻壁和地面20cm以5(規(guī)范性附錄)檢驗方法A.1一般規(guī)定本標(biāo)準(zhǔn)所用水，在沒有注明其他要求時，指純化水，應(yīng)符合《中華人民共和國藥典(2015版)》第四部通則0261制藥用水和《中華人民共和國藥典(2015版)》第二部純化水的要求。本標(biāo)準(zhǔn)所用試劑，在沒有注明其他要求時，均指分析純試劑。本標(biāo)準(zhǔn)所用試劑和標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)符合《中華人民共和國藥典(2015版)》第四部通則8000試劑和標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)要求。實驗中所用溶液在未注明用何種溶劑配制時，均指水溶液。A.2鑒別方法A.2.1方法提要金銀花提取物(25%)中一般至少含有3種綠原酸類物質(zhì)，分別為新綠原酸、綠原酸和隱綠原酸，可以通過帶有紫外檢測器的高效液相色譜儀得到其特征圖譜，從而對其進行鑒別。A.2.2儀器和用具A.2.2.1分析天平，感量0.01mg。A.2.2.2超聲波清洗儀。A.2.2.3高效液相色譜儀(附紫外檢測器、柱溫箱)。A.2.2.5溶劑過濾器。A.2.2.6無油真空泵。A.2.2.7棕色量瓶。A.2.3試劑和溶液A.2.3.3磷酸。A.2.3.4純化水。A.2.3.5綠原酸標(biāo)準(zhǔn)品：CAS327-97-9,含量96.2%(HPLC),購自中國食品藥品檢定研究院。A.2.4色譜條件及系統(tǒng)適用性A.2.4.1色譜條件色譜條件如下：a)色譜柱：HypersilGoldC??(4.6mm×250mm,5μm)(或其他相當(dāng)者);表A.1梯度洗脫程序時間/min6A.2.4.2系統(tǒng)適用性理論塔板數(shù)按綠原酸峰計算應(yīng)不低于6000。A.2.5操作方法A.2.5.1標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備取綠原酸對照品適量，精密稱定，加50%甲醇制成每1mL含0.2mg的溶液，即得。A.2.5.2供試品溶液的制備取本品0.5g,精密稱定，置25mL棕色量瓶中，加50%甲醇適量，超聲處理30min(功率500W,頻率40kHz)使溶解，放冷，并稀釋至刻度，搖勻，精密量取1mL,用50%甲醇稀釋至25mL,搖勻，濾過，即得。A.2.5.3測定分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μL,注入液相色譜儀，測定，記錄色譜圖。A.2.6結(jié)果判定供試品溶液中應(yīng)呈現(xiàn)3個特征峰，與參照物峰對應(yīng)的峰為S峰，計算各特征峰與S峰的相對保留時間，其相對保留時間應(yīng)在規(guī)定值的±5%之內(nèi)。規(guī)定值為0.76(峰1,新綠原酸),1.00(峰2(S),綠原酸),1.04(峰3,隱綠原酸)。A.3綠原酸含量的測定方法A.3.1方法提要綠原酸為金銀花提取物(25%)中的主要生物活性物質(zhì)，采用高效液相色譜法測定。A.3.2儀器和用具A.3.2.1分析天平，感量0.01mg。A.3.2.2超聲波清洗儀。A.3.2.3高效液相色譜儀(附紫外檢測器、柱溫箱)。A.3.2.5溶劑過濾器。A.3.2.6無油真空泵。A.3.2.7棕色量瓶。A.3.3試劑和溶液A.3.3.3磷酸。A.3.3.4純化水。A.3.3.5綠原酸標(biāo)準(zhǔn)品：CAS327-97-9,含量96.2%(HPLC),購自中國食品藥品檢定研究院。A.3.4色譜條件及系統(tǒng)適用性A.3.4.1色譜條件色譜條件如下：a)色譜柱：HypersilGoldC??(4.6mm×250mm,5μm)(或其他相當(dāng)者)。7A.3.4.2系統(tǒng)適用性理論塔板數(shù)按綠原酸峰計算應(yīng)不低于6000。A.3.5操作方法A.3.5.1對照品溶液的制備取綠原酸對照品適量，精密稱定，加50%甲醇制成每1mL含0.2mg的溶液，即得。A.3.5.2供試品溶液的制備取本品0.5g,精密稱定，置25mL棕色量瓶中，加50%甲醇適量，超聲處理30min(功率500W,頻率40kHz)使溶解，放冷，并稀釋至刻度，搖勻，精密量取1mL,用50%甲醇稀釋至25mL,搖勻，濾過，即得。A.3.5.3測定分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μL,注入液相色譜儀，測定并記錄色譜圖。A.3.6結(jié)果計算供試品中待測組分含量以質(zhì)量分?jǐn)?shù)w計，數(shù)值以%表示，按式(A.1)計算。式中：w——供試品中綠原酸的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，%;A——供試品溶液中綠原酸的峰面積；c——對照品溶液的濃度，mg/mL;V——供試品溶液的稀釋體積，mL;As——對照品溶液中綠原酸的峰面積；P——綠原酸標(biāo)準(zhǔn)品的純度，%。8(資料性附錄)HPLC色譜圖及保留時間B.1HPLC特征圖譜及參考保留時間B.1.1HPLC特征圖譜B.1.1.1HPLC特征圖譜鑒別中對照品圖譜對照品(綠原酸)HPLC圖譜見圖B.1。25.0030.0035.0040.00圖B.1對照品(綠原酸)HPLC圖譜B.1.1.2HPLC特征圖譜鑒別中供試品圖譜金銀花提取物(25%)HPLC特征圖譜見圖B.2。圖B.2金銀花提取物(25%)HPLC特征圖譜9HPLC特征圖譜各特征峰參考保留時間見表B.1。表B.1HPLC特征圖譜各特征峰參考保類別對照品峰2(S)綠原酸—供試品峰1新綠原酸峰2(S)綠原酸峰3隱綠原酸B.2綠原酸含量測定HPLC圖譜及參考保留時間B.2.1綠原酸含量測定HPLC圖譜對照品(綠原酸)HPLC圖譜見圖B.3。金銀花提取物(2