2.2.2動物細(xì)胞融合技術(shù)與單克隆抗體“生物導(dǎo)彈”追蹤癌細(xì)胞抗體植物體細(xì)胞雜交植物細(xì)胞融合植物組織培養(yǎng)溫故而知新植物體細(xì)胞雜交技術(shù)實驗：人——鼠細(xì)胞熒光標(biāo)記融合實驗融合細(xì)胞細(xì)胞融合37℃40min正在融合的細(xì)胞紅色熒光染料標(biāo)記膜蛋白綠色熒光染料標(biāo)記膜蛋白人細(xì)胞小鼠細(xì)胞1、概念：指兩個或多個動物細(xì)胞結(jié)合形成一個細(xì)胞的技術(shù)。融合后形成的雜交細(xì)胞具有原來兩個或多個細(xì)胞遺傳信息的單核細(xì)胞。3、誘導(dǎo)方式：物理法：離心法、電融合法化學(xué)法：聚乙二醇（PEG)融合法生物法：滅活病毒誘導(dǎo)法（動物細(xì)胞融合特有的誘導(dǎo)方法）一、動物細(xì)胞融合技術(shù)（不能，動物細(xì)胞的全能性受限）注意：誘導(dǎo)融合之前，用胰蛋白酶或膠原蛋白酶使細(xì)胞分散。思考：通過動物細(xì)胞融合技術(shù)能否形成完整個體？2、原理：細(xì)胞膜的流動性

滅活是指用物理或化學(xué)手段使病毒失去感染能力，但是并不破壞病毒的抗原結(jié)構(gòu)。病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能夠與細(xì)胞膜上的糖蛋白發(fā)生作用，使細(xì)胞互相凝聚，細(xì)胞膜上的蛋白質(zhì)分子和脂質(zhì)分子重新排布，細(xì)胞膜打開，細(xì)胞發(fā)生融合。一、動物細(xì)胞融合技術(shù)滅活病毒誘導(dǎo)法（P48相關(guān)信息

）不滅活的病毒的不可以用作細(xì)胞融合誘導(dǎo)劑，會感染動物細(xì)胞。融合完成的標(biāo)志病毒顆粒用滅活的病毒誘導(dǎo)動物細(xì)胞融合過程：正在融合的淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞5．意義：細(xì)胞融合技術(shù)突破了有性雜交的局限，使遠(yuǎn)緣雜交成為可能。6．應(yīng)用(1)成為研究細(xì)胞遺傳、細(xì)胞免疫、腫瘤和培育生物新品種等的重要手段。(2)用于制造單克隆抗體。生產(chǎn)單克隆抗體一、動物細(xì)胞融合技術(shù)一、動物細(xì)胞融合技術(shù)比較植物體細(xì)胞雜交動物細(xì)胞融合原理

步驟酶解法去掉

后，誘導(dǎo)

融合，形成

，再經(jīng)植物組織培養(yǎng)形成

。

分散成

后誘導(dǎo)細(xì)胞融合，形成

。

方法聚乙二醇（PEG）融合法、高Ca2＋—高pH融合法、電融合法、離心法PEG融合法、電融合法、

誘導(dǎo)法用途

獲得完整的雜種植株

主要用于制造單克隆抗體意義打破生殖隔離，實現(xiàn)遠(yuǎn)緣雜交育種突破有性雜交的局限，使遠(yuǎn)緣雜交成為可能細(xì)胞膜的流動性細(xì)胞的全能性細(xì)胞膜的流動性細(xì)胞壁原生質(zhì)體雜種細(xì)胞雜種植株單個細(xì)胞雜交細(xì)胞滅活病毒植物體細(xì)胞雜交和動物細(xì)胞融合的比較二、單克隆抗體及其應(yīng)用什么細(xì)胞能產(chǎn)生抗體？能產(chǎn)生抗體的細(xì)胞能否大量無限增殖？什么細(xì)胞具有無限增殖的能力？要制備單克隆抗體，就需要找到一種能分泌抗體且增殖能力強的細(xì)胞。有沒有方法讓兩種動物細(xì)胞進(jìn)行雜交，培育出既能產(chǎn)生抗體，又能大量增殖的細(xì)胞呢？二、單克隆抗體及其應(yīng)用1、概念：在抗原物質(zhì)的刺激下，由漿細(xì)胞產(chǎn)生的，可與相應(yīng)抗原發(fā)生特異性結(jié)合的免疫球蛋白。

抗體抗原

免疫傳統(tǒng)抗血清2、傳統(tǒng)抗體制備方法及缺陷動物體內(nèi)多種抗原

刺激多種漿細(xì)胞多種抗體多種B細(xì)胞增殖分化產(chǎn)量低、純度低，且抗體的特異性差、靈敏度低。（2）缺陷：（1）方法：向動物體內(nèi)反復(fù)注射某種抗原，從動物血清中分離所需抗體。二、單克隆抗體及其應(yīng)用3、科學(xué)家發(fā)現(xiàn)B淋巴細(xì)胞具有的特點：（１）動物體內(nèi)產(chǎn)生的特異性抗體種類多達(dá)百萬種；（２）每個B淋巴細(xì)胞（漿細(xì)胞）只分泌一種特異性的抗體。大量制備單一抗體的思路：體外培養(yǎng)時，B淋巴細(xì)胞不具有無限增殖的能力。一個B淋巴細(xì)胞克隆細(xì)胞群4、一個極富創(chuàng)造性的試驗方案：動物細(xì)胞融合雜交細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞（癌細(xì)胞，能無限增殖）一個B淋巴細(xì)胞（只分泌一種特異性抗體）米爾斯坦【英國】科勒【德國】雜交瘤細(xì)胞動物細(xì)胞培養(yǎng)單克隆抗體既能迅速大量增殖，又能產(chǎn)生專一抗體。抗體二、單克隆抗體及其應(yīng)用二、單克隆抗體及其應(yīng)用

注射特定抗原

從脾臟中獲取B淋巴細(xì)胞

骨髓瘤細(xì)胞目的是獲得產(chǎn)生特定抗體的B淋巴細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞與B淋巴細(xì)胞融合誘導(dǎo)融合多種雜交細(xì)胞培養(yǎng)骨髓瘤細(xì)胞5、單克隆抗體的制備過程誘導(dǎo)細(xì)胞融合過程中形成的細(xì)胞類型：未融合的B淋巴細(xì)胞、未融合的骨髓瘤細(xì)胞融合的細(xì)胞：BB、B-瘤、瘤-瘤選擇培養(yǎng)基培養(yǎng)（HAT培養(yǎng)基）第一次篩選：篩選雜交瘤細(xì)胞（多種）雜交瘤細(xì)胞既能迅速大量增殖又能產(chǎn)生抗體特點二、單克隆抗體及其應(yīng)用知識拓展：第一次篩選獲得雜交瘤細(xì)胞。資料：已知細(xì)胞合成DNA有D和S兩條途徑，其中D途徑能被氨基蝶呤阻斷。B淋巴細(xì)胞及同型融合細(xì)胞不能無限增殖，死亡骨髓瘤細(xì)胞及同型融合細(xì)胞不能合成DNA，死亡雜交瘤細(xì)胞能無限增殖，生長培養(yǎng)基中加入氨基喋呤任務(wù)：請根據(jù)以上信息，設(shè)計一種方法，從培養(yǎng)液中篩選出雜交瘤細(xì)胞。①人淋巴細(xì)胞中有這兩種DNA的合成途徑，但不能分裂增殖。

②鼠骨髓瘤細(xì)胞中只有D途徑，沒有S途徑，但能不斷分裂增殖。二、單克隆抗體及其應(yīng)用雜交瘤細(xì)胞克隆化培養(yǎng)和抗體檢測5、單克隆抗體的制備過程96多孔細(xì)胞培養(yǎng)板①

將雜交瘤細(xì)胞群稀釋，約每孔1個細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)（克隆化培養(yǎng)）②

一段時間后，用標(biāo)記的抗原檢測每個小孔上清液里是否含有我們需要的特異性的抗體（抗體檢測）抗體檢測（1）方法:（2）原理:抗原—抗體雜交法抗原和抗體能夠特異性結(jié)合二、單克隆抗體及其應(yīng)用上清液可與特定抗原結(jié)合的培養(yǎng)孔為陽性孔抗體檢測板分泌抗體能跟特定抗原結(jié)合的細(xì)胞即為所需雜交瘤細(xì)胞第二次篩選：篩選抗體檢測呈陽性的雜交瘤細(xì)胞陽性孔二、單克隆抗體及其應(yīng)用在體外培養(yǎng)注射到小鼠腹腔內(nèi)培養(yǎng)液中獲取從腹水中獲取篩選抗體檢測呈陽性的雜交瘤細(xì)胞單克隆抗體5、單克隆抗體的制備過程靈敏度高、特異性強、可以大量制備。思考：運用到的細(xì)胞工程技術(shù)手段有哪些？動物細(xì)胞融合、動物細(xì)胞培養(yǎng)二、單克隆抗體及其應(yīng)用注射抗原用特定抗原對小鼠免疫，并從其脾中獲取能產(chǎn)生特定抗體的B淋巴細(xì)胞多種B淋巴細(xì)胞培養(yǎng)骨髓瘤細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞細(xì)胞融合誘導(dǎo)融合多種雜交細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞用特定的選擇培養(yǎng)基進(jìn)行篩選：只有融合的雜交瘤細(xì)胞才能生長多輪次的克隆化培養(yǎng)和抗體檢測抗體檢測呈陽性的雜交瘤細(xì)胞體外培養(yǎng)或注射到小鼠腹腔內(nèi)增殖體外培養(yǎng)注射到腹腔單克隆抗體從培養(yǎng)液或小鼠腹水中獲得大量的單克隆抗體練習(xí)1.犬細(xì)小病毒(CPV)單克隆抗體(CpvMcAb)可抑制病毒對宿主細(xì)胞的侵染及病毒的復(fù)制，進(jìn)而殺滅幼犬體內(nèi)病毒。下列相關(guān)敘述，錯誤的是()A．在Cpv、McAb的制備過程中用到了動物細(xì)胞培養(yǎng)和動物細(xì)胞融合技術(shù)B．給幼犬注射CPV后，CPV抗體檢測呈陽性，說明發(fā)生了體液免疫反應(yīng)C．經(jīng)選擇性培養(yǎng)基篩選出來的雜交瘤細(xì)胞即可直接生產(chǎn)CpvMcAbD．對雜交細(xì)胞培養(yǎng)時，需要無菌無毒環(huán)境，且溫度、氣體環(huán)境等要適宜2.關(guān)于動物細(xì)胞融合的說法錯誤的是()A.動物細(xì)胞融合后形成的具有原來兩個或多個動物細(xì)胞遺傳信息的多核細(xì)胞稱為雜交細(xì)胞B.動物細(xì)胞融合己成為研究細(xì)胞遺傳、細(xì)胞免疫、腫瘤和生物新品種培育的重要手段C.常用于誘導(dǎo)動物細(xì)胞融合手段有聚乙二醇、滅活的病毒、電激等D.細(xì)胞融合技術(shù)突破了有性雜交方法的局限，使遠(yuǎn)緣雜交成為可能C鞏固提升A練習(xí)3.如圖2-2-6為單克隆抗體的制備流程示意圖。下列敘述正確的是()圖2-2-6A.甲是從已免疫的小鼠脾臟中獲得的T淋巴細(xì)胞B.①表示將骨髓瘤細(xì)胞去核后進(jìn)行細(xì)胞融合C.乙為融合細(xì)胞，同時具有細(xì)胞甲和骨髓瘤細(xì)胞的特性D.②表示篩選能產(chǎn)生特異性抗體的細(xì)胞D鞏固提升練習(xí)B4.如圖所示為雜交瘤細(xì)胞的制備示意圖。骨髓瘤細(xì)胞由于缺乏次黃嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶(HGPRT-),在HAT選擇培養(yǎng)液中不能正常合成DNA，無法生長。下列敘述錯誤的是 ()A.可用滅活的病毒誘導(dǎo)B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合B.兩兩融合的細(xì)胞都能在HAT選擇培養(yǎng)液中生長C.雜交瘤細(xì)胞需進(jìn)一步篩選才能用于生產(chǎn)D.細(xì)胞膜的流動性是細(xì)胞融合的基礎(chǔ)鞏固提升單克隆抗體應(yīng)用①作為診斷試劑

(最廣泛的用途)

在受精后不久，胎盤滋養(yǎng)層細(xì)胞就會分泌人絨毛膜促性腺激素(HCG)，是由受孕婦女體內(nèi)胎盤產(chǎn)生的一種糖蛋白類激素，在孕婦的尿液中大量存在。而在非妊娠婦女尿液中幾乎不含有。抗（人絨毛膜促性腺激素）單克隆抗體資料1

用抗人絨毛膜促性腺激素單克隆抗體做成的“早早孕診斷試劑盒”，在妊娠第8天就可以作出診斷，這比原來的診斷方法提前了10d左右，可以避免孕婦在不知道妊娠的情況下因服用藥物而對胎兒造成不利影響。該方法檢測的準(zhǔn)確率在90%以上。二、單克隆抗體及其應(yīng)用單克隆抗體應(yīng)用①作為診斷試劑

(最廣泛的用途)二、單克隆抗體及其應(yīng)用原理：準(zhǔn)確識別各種抗原的細(xì)微差別，與抗原特異性結(jié)合，并可大量制備。優(yōu)點：準(zhǔn)確、高效、簡易、快速同位素標(biāo)記或熒光標(biāo)記的單克隆抗體，在特定組織中成像，定位診斷腫瘤、心血管畸形等疾病。二、單克隆抗體及其應(yīng)用資料2：使用高效的細(xì)胞毒素類藥物進(jìn)行化療，可以有效殺傷腫瘤細(xì)胞。但細(xì)胞毒素沒有特異性，在殺傷腫瘤細(xì)胞的同時還會對健康細(xì)胞造成傷害，這限制了它在臨床上的應(yīng)用?？贵w—藥物偶聯(lián)物（antibody-drugconjugates，ADC）通過將細(xì)胞毒素與能特異性識別腫瘤抗原的單克隆抗體結(jié)合，實現(xiàn)了對腫瘤細(xì)胞的選擇性殺傷。ADC通常由抗體、接頭和藥物（如細(xì)胞毒素）三部分組成，它的作用機制如下圖所示。②用于運載藥物(主要用于癌癥的治療)

抗體主要發(fā)揮靶向運輸作用，即通過特異性結(jié)合靶細(xì)胞表面的抗原，將連接的藥物輸送到靶細(xì)胞。1

藥物發(fā)揮治療效應(yīng)，如殺傷靶細(xì)胞。21.(2022·廣西南寧高二階段練習(xí))如圖是一種“生物導(dǎo)彈”的作用原理示意圖，沒有與腫瘤細(xì)胞結(jié)合的“生物導(dǎo)彈”一段時間后被機體清除。阿霉素是一種抗腫瘤藥，可抑制DNA和RNA的合成，對正常細(xì)胞也有一定毒性。下列說法不正確的是()A.單克隆抗體是由雜交瘤細(xì)胞合成和分泌的B.活化阿霉素能抑制細(xì)胞中的DNA復(fù)制和轉(zhuǎn)錄過程C.在治療中，應(yīng)先注射非活化磷酸阿霉素再注射生物導(dǎo)彈D.單克隆抗體特異性強，能減輕阿霉素對正常細(xì)胞的傷害鞏固提升C2.科研人員將抗癌藥物連接在單克隆抗體上制成“生物導(dǎo)彈”用于癌癥治療?！吧飳?dǎo)彈”由兩部分組成，一是“瞄準(zhǔn)裝置”，二是“殺傷性彈頭”。分析下列有關(guān)描述，其中不正確的是()A.“瞄準(zhǔn)裝置”由識別腫瘤的單克隆抗體組成B.“彈頭”由放射性同位素、化學(xué)藥物或毒素等物質(zhì)構(gòu)成C.“彈頭”中的藥物有選擇殺傷腫瘤細(xì)胞的功能D.“生物導(dǎo)彈”的制備應(yīng)用了細(xì)胞工程鞏固提升C3.(2022·北京海淀高二期中)為降低人的乳腺癌治療藥物的副作用，科研人員嘗試在單克隆抗體技術(shù)的基礎(chǔ)上，構(gòu)建抗體—藥物偶聯(lián)物(ADC)，過程如圖1所示。請回答下列問題：(1)本實驗中，小鼠注射的特定抗原應(yīng)取自_______________。(2)步驟①常用方法包括_____融合法、電融合法和滅活病毒誘導(dǎo)法等。人的乳腺癌細(xì)胞PEG鞏固提升(3)步驟②的細(xì)胞必須經(jīng)過步驟③克隆化培養(yǎng)和__________才能篩選得到符合要求的雜交瘤細(xì)胞，雜交瘤細(xì)胞的特點是____________________。雜交瘤細(xì)胞可采用注射到小鼠腹腔內(nèi)培養(yǎng)或進(jìn)行_____培養(yǎng)的方式進(jìn)行擴大培養(yǎng)?？贵w檢測既能大量增殖，又能產(chǎn)生特定