生化檢測常識

目錄

第一章生化檢測根本常識

1.1標本的獲得..........................................12）

第二章常規(guī)生化檢測工程簡介

2.1生化工程的臨床意義................................（2）

第三章生化儀參數(shù)測量原理

3.1自動生化儀的分類.......................................（3）

3.2分立式生化儀結(jié)構(gòu).......................................（5）

3.3生化檢驗的原理和方法..................................（6）

3.4生化分析儀測定方法的分類及應(yīng)用度的計算................（9）

3.5.測定值計算方程......................................（10）

3.6定標參數(shù)和濃度的計算...................................（17）

第四章兒個重要概念

5.1試劑空白...................................................................（21）

5.2樣本空白...................................................................（21）

5.3水空白...................................................................（21）

5.4樣本......................................................................（21）

5.5質(zhì)控物質(zhì)...................................................................（21）

5.6底物控制...................................................................（21）

第一章生化檢測根本常識

生化檢測是醫(yī)院檢驗科（或化驗室）常用的檢測手段，通常以人的血清為標本，通過測量血清中各

生化成份的含量，為臨床診斷提供依據(jù)。

1.1標本的獲得

一股要求病人空腹時果靜脈血（全血）。全血經(jīng)過離心機離心，分層為血清和血細胞，正常情況下，上

層顏色淺■透明（血清），下層顏色深且不透明（血細胞）。有的血清較為特殊，或分層不明顯（融血），

或如清不透明（脂血，呈牛奶狀）。

第二章常規(guī)生化檢測工程簡介

2.1生化工程的臨床意義

?丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）：又稱為谷丙轉(zhuǎn)氨酶（GPT）是衡量肝功能的重要指標，許多低端醫(yī)療

機構(gòu)在做體檢時僅測此一項生化工程。正常人一般在40U/L以內(nèi)。干粉試劑復(fù)溶后為單試劑，液體

試劑?股為雙試劑，應(yīng)用動力學(xué)法可計算結(jié)果。

?蛋白：通常測白蛋白（ALB）和總蛋白（TPJ,終點法。一般用單試劑，有的TP試劑為雙試劑，

可用兩點終點法測。蛋白質(zhì)是血清的主要成份，大部份由肝細胞合成。通過蛋白的測定可以協(xié)助其

些疾病的診斷。

?血糖：血液中的葡萄糖簡稱血胞（GLU）o常用于糖尿病的診斷。正常人空腹血糖一般為3.9?

6.1mmol/Lo市場上單、雙試劑的商品化試劑盒都有，可用終點法（單試劑）或兩點終點法測量（雙

試劑)。

?門冬氨酸契基轉(zhuǎn)移函(AST)：又稱為谷草轉(zhuǎn)獲釀IGOT),主要用于心肌和肝膽疾病及骨骼肌病的

診斷。是肝功能測試的常用指標之一。正常人一般在40U/L以內(nèi)。同ALT一樣，無論單、雙試劑,

用動力學(xué)法可計算結(jié)果0

?堿性磷酸酶(ALP)：主要用于肝膽疾病及骨骼病的診斷。是肝功能測試的常用指標之一。正常人

一般在240U/L以內(nèi)。用動力學(xué)法計算結(jié)果。

?Y-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶(GGT)：主要用于肝膽疾病診斷。是肝功能測試的常用指標之一。正常人一般在

50U/L以內(nèi)。用動力學(xué)法計算結(jié)果。

?膽紅素(BiL)：膽紅素的測定，能準確反映黃疸的程度，判斷黃疸的類型。一般測量總膽紅素(TBil)

和直接膽紅素(DBil).

?甘油三酯(TG)：其含量測定是血脂分析的重要內(nèi)容之一。

?總膽固醇(CHOL)：是游離膽固醉和膽固醇酯的總稱，其測定對高脂蛋白血癥和冠心病的診斷及

發(fā)病機理的研究有一定意義。

?高密度脂蛋白膽固醇(HDL.C)：主要在肝臟中合成，是血清中顆粒數(shù)最多的脂蛋白。其含量是冠

心病診斷的重要依據(jù)之一。

?肌肝(CREA)：是肌酸代謝的最終產(chǎn)物，由腎臟排出。是腎功能的重要指標之一。

?尿素(Urea)：是蛋白質(zhì)分解代謝的終產(chǎn)物。血尿素測定是腎功能的最敏感指標。

?載脂蛋白Al(APOAl):是高密度脂蛋白的主要組成成分，臨床上主要用于腦血管病風(fēng)險度的估計。

?載脂蛋白B(APOB):是低密度脂蛋白的主要組成成分，臨床上主要用于冠心病的風(fēng)險度的估計。

?肌酸激酶(CK)：肌酸激酶通常存在于動物的心臟、肌肉以及腦等組織的細胞漿和線粒體中，是一

個與細胞內(nèi)能量運轉(zhuǎn)、肌肉收縮、ATP再生行直接關(guān)系的重要激酶?？捎糜谠缙谠\斷急性心肌梗，

常見肌病(如進行性肌營養(yǎng)不良發(fā)作期、病毒性心肌炎、多發(fā)性肌炎、擠壓綜合征等嚴重肌肉損傷)

及腦血管疾病的診斷。

?a-羥丁酸脫氫酶(HBDH):與肌酸激的相同，用于診斷心肌梗死。

?a.淀粉酶(AMY)：在臨床應(yīng)用方面，Q-淀粉酶活力升高與急性胰腺炎、胰腺管道阻塞、腹內(nèi)疾

病、流行性腮腺炎及細菌性腮腺炎。

?鈣、氯、鐵、鉀、鈉、鎂、磷：這7項都屬于離子組合，用于診斷人體中離子的含量。

常用檢測工程表

序號工程名稱縮寫組合參考值

1.白蛋白ALB35?55g/L

2.總蛋白TP60?80g/L

3.堿性磷酸酶ALP15?U2U/L

4.門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移前AST(GOT)8?37U/L

肝功能

5.丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移的ALT(GPT)0?65U/L

6.Y-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶GGT0-50U/L

7.直接膽紅素DB0?6umol/L

8.總膽紅素TB0?18umol/L

9.肌酎CREA53?115umol/L

10.尿酸UA腎功能210~-430umol/L

11.尿素UREA2.5?6.4mmol/L

12.膽固醇CHOL3.6~6.5mmol/L

13.甘油三酯TG0.45—1.81mmol/L

14.高密度脂蛋白HDL0.9?1.68mmol/L

15.低密度脂蛋白LDL血脂2.7?3.1mmol/L

16.我脂蛋白A1APOA11.0?1.6g/L

17.載脂蛋白BAPOB0.6?l.lg/L

18.脂蛋白Lp(a)0?30mg/dL

19.肌酸激酶CK21-190U/L

20.肌酸激酶同工酶CK-MB0?25U/L

心肌酶類

21.a-羥丁酸脫氫酶HBDH70?180U/L

22.乳酸脫乳酹LDHII4-240U/L

23.鈣Ca離子2.0?2.6mmol/L

24.氯C195?105mmol/L

25.鐵Fe9?30pmol/L

26.鉀K3.5?5.5mmol/L

27.鎂Mg0.6~l.lmmol/L

28.鈉Na135?145mmoI/L

29.磷P0.8?1.6mmol/L

30.?-淀粉酶AMY100?220U/L

其它

31.葡萄糖GLU3.9?5.8mmol/L

第三章生化儀參數(shù)測量原理

3.1自動生化儀的分類

連續(xù)流動式自動化分析儀

連續(xù)流動式自動化分析儀也叫管道式分析儀，其特點是測定工程相同的各待測樣本與試劑混合

后的化學(xué)反響，是在同一管道中經(jīng)流動過程完成的。這類儀器一般可分為空氣分段系統(tǒng)式和非分段

系統(tǒng)式。所謂空氣分段系統(tǒng)是指在吸入管道的每一個樣品、試劑以及混合后的反響液之間，均由一

小段空氣間隔開：而非分段系統(tǒng)是靠試劑空白或緩沖液來間隔每個樣品的反響液。在管道式分析儀

中，以空氣分段系統(tǒng)式最多，且較典型，整套儀器是由樣品盤、比例泵、混合管、透析器、恒溫器、

比色計和記錄器幾個部件所組成。管道內(nèi)的圓圈表示氣泡，氣泡可將樣品及試劑分隔為許多液柱，

并起一定的攪拌作用。但氣泡影響比色，必須在比色前除去。

將幾個單通道管道式分析儀結(jié)合起來，對一個樣品同時測定匚個工程。著名的有12通道分析儀,

命名為順序多項自動分析儀(sequentialmultipleautoanalyzer)簡稱SMA12/60。同時開展為SMAC,

C為計算

機

(computer)的縮寫。這類大型分析儀至今仍有使用者。它對每個樣品可同時分析12個工程，每個

時可分析60個樣品。后來發(fā)現(xiàn)不參加空氣泡，更有利于結(jié)果的檢測，開展為流動注射分析法(flow

injectionanalysis)。試劑的流動仍用比例泵驅(qū)動，樣品用轉(zhuǎn)動閥參加液流，反響后比色檢測。

離心式生化分析儀

離心式分析儀是1969年以后開展起來的?種分析儀，由Anderson設(shè)計，其特點是化學(xué)反響器

裝在離心機的轉(zhuǎn)子位置，該圓形反響器稱為轉(zhuǎn)頭，先將樣品和試劑分別置與轉(zhuǎn)頭內(nèi)，當離心機開動

后，圓盤內(nèi)的樣品和試劑受離心力的作用而相互混合發(fā)生反響，最后流入圓盤外圈的比色槽內(nèi)，通

過比色計進行檢測。

離

心式分

析儀主

要由兩

局部經(jīng)

成，一為

加樣局

部，二為

分析局

部。加樣

局部包

離。氏柏括樣品

盤、試劑

盤、吸樣臂(或管)、試劑臂(加液器)和電子控制局部(鍵盤和顯示器等)。加樣時轉(zhuǎn)頭置丁?加樣

局部。加樣完畢后將轉(zhuǎn)頭移至離心機上。分析局部，除安裝轉(zhuǎn)頭的離心機外，還有溫控和光學(xué)檢測

系統(tǒng)，并有微機信息處埋和顯示系統(tǒng)。

1.3分立式生化分析儀

所謂分立式，是指按手工操作的方式編排程序，并以有節(jié)奏的機械操作代替手工，各環(huán)節(jié)用傳

送帶連接起來，按順序依次操作。分立式分析儀與管道式分析儀在結(jié)構(gòu)上的主要區(qū)別為：前者各人

樣品和試劑在各自的試管中起反響，而后者是在同一管道中起反響；前者采用由采樣器和加液器組

成的稀釋器來取樣和加試劑，而不用比例泵：前者一般沒有透析器，如要除蛋白質(zhì)等干擾，需另行

處理。恒溫器必須能容納需保溫的試管和試管架，所以比管道式分析儀的體積要大。除此以外，其

它部件與管道式的根本相似。分立式分析儀的根本結(jié)構(gòu)如以下圖所示。Dcpout公司還推出一種袋式

分析儀，即試管變?yōu)樗芰洗?，反響在袋?nèi)進行，也以袋作比色杯,這種袋只能一次性使用。

干片式分析儀

干片式分析儀是80年代問世的。首先Eastmankodak公司以其精湛的化學(xué)工藝造出了測定血清

中血糖、尿素、蛋白偵、膽固醇等的干式試劑片。當加上定量的血清后，在干片的前面產(chǎn)生顏色反

響，用反射光度計檢測即可進行定量。這類方法完全革除了液體試劑，故稱干化學(xué)法。Boehringer

Mannheim公司推出了用全血的干征試劑。即將血細胞排除于濾膜之外，而血漿與試劑發(fā)生反響后

顯色檢測。

-保擴網(wǎng)

一血長分離層

匚輛就X劑層

費簾密行

模塊式自動化系列

7600系列全自動生化分析儀是U立公司于1998年開發(fā)出來的系列分析儀。它是由各種不同功

能的模塊組合而成，功能模塊包括有樣本投入部、電解質(zhì)測定的ISE模塊、常規(guī)實驗工程測定的D

模塊、特殊實驗工程測定的P模塊、狂查樣本緩沖部和樣本收納部。根據(jù)D模塊和P模塊數(shù)日組合

成不同型號的分析儀。

模塊組合式實驗室自動化系統(tǒng)包括：

樣品前處理系統(tǒng)，樣品輸送系統(tǒng)和樣品后處理系統(tǒng)（生化分析，電解質(zhì)分析，血液分析等）。樣

品前處理系統(tǒng)由能獨立工作，不同功能的各模塊以同一標準來連接，通過計兌機控制運行。由樣品

投入部，離心別離部，開栓部，在線分注部，非在線分注部，貼條碼部，蓋栓部，樣品分注收存部,

標本接收部等模塊構(gòu)成前處理系統(tǒng)，每一模塊既是系統(tǒng)的一局部,乂是獨立的單元，可根據(jù)不同需

要選擇使用，具有靈活性和擴展性。

后處理系統(tǒng)有電解質(zhì)分析系統(tǒng)，生化分析系統(tǒng)以及血液分析系統(tǒng)等。

1.6全實驗室自幼化分析系統(tǒng)

從檢驗標本處理開始，即標本的識別、傳輸、處理（別離血清等）、分注、分類（按工程分類）、

檢測和收費的白動化流水作業(yè)，到分析后白動儲存標本，檢驗結(jié)果的白動分析、報告與傳送，白動

提示異常值或危險值，申請檢驗醫(yī)師隨時查詢檢驗結(jié)果的全過程實現(xiàn)自動化、網(wǎng)絡(luò)化。

3.2分立式生化儀結(jié)構(gòu)

全自動生化分析儀一般由以下局部構(gòu)成：探針系統(tǒng)、攪拌和沖洗系統(tǒng)、恒溫系統(tǒng)、反響盤、無

路系統(tǒng)構(gòu)成。

2.1探針系統(tǒng)

/面檢測技術(shù)：通過檢測阻抗或電容、電流的變化，感知到空氣和液面，可保證探針

的感應(yīng)裝置至液面時會自動停止下降，即可增加速度也可減少污染，防止堵塞。

2.2攪拌和沖洗系統(tǒng)

攪拌系統(tǒng)是讓樣品和試劑混合后迅速分布均勻，保障測試正常進行。常用的攪拌方法

為沖入空氣、攪拌、振蕩等，但是都容易產(chǎn)生氣泡和外溢等問題。目前最好的方法是螺旋

式攪拌棒附著特富龍涂層，一方面減少氣泡，另一方面減少攜帶和污染。

清洗系統(tǒng)一般包括試劑針的內(nèi)外臂清洗、樣本針的內(nèi)外臂清洗、比色杯的清洗。

2.3恒溫系統(tǒng)

全自動生化儀一般都設(shè)有30和37度兩種溫度。目前常見的有水浴、空氣浴，最新的

是恒溫液循環(huán)加溫方式。

水浴的優(yōu)點是溫度均勻、穩(wěn)定；缺點是升溫緩慢，開機預(yù)熱時間長，因水質(zhì)化（微生

物、礦物質(zhì)沉積）影響則定，因此要定期換水和比色杯。

空氣浴的優(yōu)點是升溫迅速，無需保養(yǎng)：缺點是溫度易受外界環(huán)境影響。

怛溫液循環(huán)加溫集干式空氣浴和水浴的優(yōu)點，即有冰浴溫度穩(wěn)定、均勻的優(yōu)點，又有

空氣浴升溫迅速、無需維護保養(yǎng)的優(yōu)點。

2?4反響盤

現(xiàn)在大多數(shù)采用硬質(zhì)玻璃比色杯（石英杯），其透光性好，易清潔，不易磨損.

2.5光路系統(tǒng)

光源：光源分為鹵素?zé)艉透邏洪W爍枇燈。相對而言鹵素?zé)魤勖L，價格低，是大局部三

化儀的首先。

3.3生化檢驗的原理和方法

臨床生化檢驗，主要在技術(shù)方面的應(yīng)用方面上探討生化檢驗新技術(shù)以及新的標記物的選擇和

評價，用于幫助診斷，又稱“珍斷生化”。主要應(yīng)用于以下技術(shù)：光譜技術(shù)、電化學(xué)分析技術(shù)、層

析技術(shù)、電泳技術(shù)、離心技術(shù)、抗原抗體特異性反響和標記技術(shù)、核酸擴增、朵交及序列分析技

術(shù)等，其中生化分析儀主要運用了光譜技術(shù)中的吸收光譜法和比濁法。分別介紹如下：

3.1吸收光譜法

3.1.1光譜范圍和電子躍遷

波長從200nm—400nm的電磁輻射，稱為紫外光，波長從400nm—760nm的電磁輻射，稱為訂

見光。

3.1.2吸收曲線

以波長（X）為橫坐標，以吸光度為縱坐標而繪制出的一條山線稱為吸收曲線。

在一段波長范圍內(nèi)，有最大吸收波長心的和最小吸收波長機汕在最大吸收波長處測定可獲得最

大的測定靈敏度。

3.1.3吸光度的定義

一束強度為IQ的平行單色光通過一個含有濃度為C的吸光物質(zhì)、厚度為L的吸收池時，如上圖，

一些光子被吸收，光強從Io衰減為I”那么該溶液的吸光度A等于：

3.1.4Lamber-Beer定律

A=cCL

其中€為吸光系數(shù)，有兩種表示方法摩爾吸光系數(shù)和比吸光系數(shù)，摩爾吸光系數(shù)的意義為1摩爾波

度的溶液在厚度為1cm時的吸光度，比吸光系數(shù)的意義為濃度為1%（w/u）的溶液在厚度為1cm時的

吸光度；C為溶液的濃度；L為吸收池的厚度（單位為cm,亦稱光徑）。

Lamber-Beer定律的意義為：某溶液的吸光度等于該物質(zhì)的吸光系數(shù)￡、濃度C和光徑L（cm）的

乘積，當光徑不變時，濃度和吸光度成正比，這是生化分析儀利用吸收光譜法進行定量測定的根底，見

以下圖：

Lamber-Beer定律成立的前提條件是：（1）被吸收光為單色平行光，（2）待測定溶液為稀溶液。

除特種蛋白外的大局部臨床生億工程，配以相應(yīng)的試劑，均可利用吸收光譜法在生化分析儀上進行

測定。如:

函類：包括ALT、AST、ALP、ACP、r-GT、a-HBDH、LDH、CK、CK-MB、a-AMY、等。

底物/代謝產(chǎn)物類:包括TG、TC、HDL-C、LDL-C、UA>UREA、Cr、Glu、TP、Alb、T-BikD-Bik

NHJ、CO2等。

無機離子類：包括Ca、P、Mg、Cl等。

3.2比濁法

3.2.1

比濁法分兩類：透射比濁法和散射比濁法。

帶有小粒的懸浮液和膠體溶液都具有向四面八方散射入射光的性質(zhì)，當一束平行光通過含有懸浮質(zhì)

點的懸浮液或膠體溶液時，同時受到散射和吸收兩個因素的影響，使光的強度減弱。在光源的光路方向

上測量透射光（實際上還包括散射光）強度與入射光強度比值，并通過該比值測定出懸浮液或膠體溶液

中質(zhì)點的溶度，稱為投射比濁法：在光路的其他方向上.測量散射光強度，從而測定出懸浮液或膠體溶液

中旗點的濃度，稱為散射比濁法。

3.2.2測定原理

透射比濁法

超融券轆鷲質(zhì)點（顆粒大個

一束強度為Io的平行10

與光源波長接近）的懸浮一液或膠體溶液時，如上圖，其透射光強度

I可用下式表示：

TL

I=Ioe'L

式中,L為懸浮液或膠?---------體溶液在光前進方向上的長度，訪濁度系

數(shù)，與懸浮質(zhì)點的濃度C成線性關(guān)系。令尸2.3KC,那么：

該式與Lamber-Beer定律相似，這是生化分析儀利用投射比濁法進行定量測定的根底，該法可以與

吸攻光譜法共用一個檢測器，所以生化分析儀，不需增加任何部件，均可利用此法進行測定。大局部特

種蛋白，如載脂蛋白類（apoALapoB等）、補體類（C3,C4等）免疫球蛋白類（IgGJgM等）等，配以

相應(yīng)的試劑，可利用此法在生化分析儀上進行測定。

散射比濁法

一束強度為L平行單色光通過一個含有懸浮質(zhì)點（顆粒大小遠小于無

源波長）的懸浮液或膠體溶液時，如上圖，與入射光垂直方向上，其

散時光強度I可用下式表示：

式中，nl,n2分別表示質(zhì)點與介質(zhì)的折射率.，V表示單位體積內(nèi)

的質(zhì)點數(shù)，r表示質(zhì)點半顆粒大在端叱柵唾獨度與懸浮質(zhì)點的濃度成正

比，這是利用散射比濁法進行定量測定的根底，因另需在光路垂直方

向上增加一檢測器，目前只有極少數(shù)生化分析儀可利用散射比濁法

進行定量測定，而幾乎所有的特種蛋白分析儀、免疫分析儀等都能利用散射比濁法進行定量測定。

3.2.3方法學(xué)分析

（1）散射比濁法與透射比濁法：

散射比濁法靈敏度高，線性范困寬，但干擾因素多。

（2）比濁法與吸收光譜法：

比濁法特異性差，靈敏度低。

3.4生化分析儀測定方法的分類及應(yīng)用度的計算

終點法

概述

指經(jīng)過一段時間（一般為io分鐘左右）的反響，整個反響到達平衡，由于反響的平衡常數(shù)很大，

可認為所有的被測定物已轉(zhuǎn)變?yōu)楫a(chǎn)物，反響液的吸光度不在增加（或降低），吸光度的增加（或降低）

程度與被測定物的濃度成正比。如以下圖：

如卜?圖：r時刻參加試劑（體枳為v）,t2時刻參加樣本（體枳為s）,然后攪拌并反響，之后測量

反響液的吸光度,在t3時刻反響到達終點。T2-t3為測定時間。

4.4.2反響度R（Response）的計算

結(jié)果的計算包括三個局部：反響度R（Response）的計算、定標參數(shù)的計算和濃度（或活性）的計

算,這里僅介紹R的計算，定標參數(shù)的計算和濃度（或活性）的計算在后面專門討論。

1）單試劑單波長終點法

反響度R=t3時刻吸光度-t2前-時刻吸光度x（體積校正因子）

或R=t3時刻吸光度一單試劑空白吸光度。

2）雙試劑單波長終點法

tl時刻參加第一試劑（體積為VI）,t2時刻參加樣本（體積為S）,之后攪拌，t3時刻參加第二試

劑（體積為V2）并立即攪拌，t4時刻反響打到終點。13r2為孵育時間,14r3為測定時間。

反響度R=t4時刻吸光度-雙試劑空白吸光度

一級動力學(xué)

概述

一級動力學(xué)是指在被測物參與反響的條件下，在一定的反響時間內(nèi)，反響速度與反響物濃度的一次

方成正比，由于反響物在不斷的消耗，因此整個反響速度在不斷的減小，表現(xiàn)為吸光度的增加〔或降低〕

速度越來越小，由于這類反響到達平衡的時間很長，且平衡常數(shù)不算很大，必需在特定時間段內(nèi)進行監(jiān)

測，該段時間內(nèi)吸光度的增加（或）降低與被測定物的濃度成正比，見以下圖。一級動力學(xué)法又被稱為

初速率法、固定時間法、二點動力學(xué)等。

如下圖：tl時刻參加試劑（體積為V）,之后測量試劑空白的吸光度，t2時刻參加樣本（體積為S）,

13時刻反響穩(wěn)定，14時刻停止對反響進行監(jiān)測：12-13為延遲時間，t3-t4為測定時間。

反響度R的計算（單、雙試劑相同）

反響度R=t4時刻吸光度一t3時刻吸光度

零級動力學(xué)法

概述

指反響速度與被測定物濃度的零次方成正比，也就是與被測定物濃度無關(guān)，因此，在整個反響過程

中，反響物可以勻速地生成某個產(chǎn)物，導(dǎo)致被測定溶液在某一波長下吸光度均勻地減小或增加，減小或

增加的速度（AA/min）與被測物的活性或濃度成正比。零級動力學(xué)法即通常所說的動力學(xué)法，也被稱

為連續(xù)監(jiān)測法，主要用于酶活性的測定。

實際上，由于底物濃度不可能足夠大，隨著反響的進行:底物消耗到一定的程度后，反響速度不再

與酶活性成正比，因此，零級動力學(xué)法是針對于特定時間段而言的，各試劑商對這段時間有嚴格規(guī)定，

見以下圖中的t3-tn:

tl時刻參加試劑（體積為V）,t2時刻加如樣本（體積為S）,t3時刻反響穩(wěn)定，tn時刻停止對反

響進行監(jiān)測；13到tn之間的時間內(nèi)，吸光度勻速變化，變化的速率和反響物的濃度成線性關(guān)系。t3-t2

為延遲時間，tn-t3為測定時間。

4.3.2反響度R的計算（單、雙試劑相同）

其中n=l3到in間的數(shù)據(jù)個數(shù)

Ti=M間

A尸某一時間的吸光度

3.5.測定值計算方程

以下為各種方法學(xué)的測定值計算方程及監(jiān)察參數(shù)定

三種根本方法的應(yīng)用如下：

終點法

-兩點法

-動力法

終點法-單試劑，單波長及樣本空白扣除

測定值X單位因子-截距

最接輟告結(jié)果=

斜率

Ti-ir

延時時間

反響控制

是用來監(jiān)察在終點法中反響是否己到終點.

Abs(Ti)-Abs(D(反響控制

吸光度一+一參加洋本I

嬸般嘀S，幣―A快71")=0.3336-0.3319=0.0017〈反響控制|

終點法時：溝命喻井前六戒：的吸光度差值要少于儀器給出小闡螺4

兩測的吸光

如達線而止會坤終點本穩(wěn)定；；/C度差值.

固地此問法：判斷參與詁算的町點線性，例9I

T1

試劑白波動

試劑白波動是試劑本身在測讀時間內(nèi)的吸光度變化值.

吸光度

(Ah........................TfRGT波動

RBL............\*

---------------------------------------------------J------------畤周

兩點法(I.R.)-單試劑Tn,

測定值x單位因子-截距

最后報告結(jié)果=----------------------------------

斜率

測定值：好康［Abs樣本-RGT波動］

(Abs)

Abs樣本=Abs樣時(T,)-Abs樣本(T)

Abs(Ti)樣本或..........…….................

RGT波動=標徹)s試劑空白:Abs試劑(T)-Abs試劑(T。)

標準濃度

Abs(To)村

勰囑IF

Ab媒瑞啾劑產(chǎn)白AAbs

測定篇.曾半xI—勒工掛本dGI.滋動1T2讀數(shù)時間樣本/標本

標注濃原

因子"s⑴)

Ti

H2O/STD;RGT漂移

Abs標準土RGT波凄本

起時極限

Afp=Abs(T.)-\bs(T(l-18”)

Asp=Abs(T)-tbs18")

假設(shè)比值瑜合乂下條件:

Afp-覆性E才子IASD＜起始極限

測結(jié)果會有報警反響不符合線性.時間

參加R2延遲時間Ti延遲時間

吸光度

線性困忘)

Afp

比值一=線性區(qū)數(shù)

AspAAlp

底物消耗值

正反響

=消光系數(shù)

1000=單位轉(zhuǎn)換-由ml轉(zhuǎn)換為ul

測定值=因數(shù)XAbs/分.=因配x[Abs(T(1)-Abs(T,)]x60/[(TJ-(Ts)]

3.6定標參數(shù)和濃度的計算

定標參數(shù)的計兜

定標方法分為兩大類，即線性定標和非線性定標，其中線性定標又包括單點線性定標

（乂稱因數(shù)法）、兩點線性定標（乂稱線性法）和多點（大于3點）線性定標（乂稱線性回

歸法），主要適用于比色法測定的工程；非線性定標主要適用于比濁法測定的工程，下面分

別予于介紹。

幾點說明

（1）三種測定方法（終點法、固定時間法和動力學(xué)法）可以和上述的定標方法任意對

應(yīng)。

（2）后面的定標公式中：

R表示反響度（詳見上文“R的計算”）

C表示標準液的濃度（或活性）。

K、R）.a、b、c、d表示定標參數(shù)。

標準液亦稱基準溶液，是濃度已經(jīng)準確測知的溶液。

線性定標

（1）單點線性定標

定標公式：R=KC,只有1個定標參數(shù)K,K=也安

定標曲線如以下圖：0標

只需提供1個標準品。大多數(shù)酶學(xué)工程可以不定標而直接輸入因數(shù)（輸入值

F=l/K）

(2)兩點線性定標

定標公式：R=DC+b,有2個定標參數(shù)，K和b

其中

要求提供兩個標準品，CLC2為標準品1和2的濃度，RI、R2為標準品1和2的反響

度。定標曲線如以下圖：

(3)多點線性定標

定標公式：R=KC+b,有兩個定標參數(shù)，K和b,其中：

要求提供n(n>3)個標準品，Ci為標準品i的濃度，Ri為標準品i的反響度。

3.1.3非線性定標

(1)Legistic-Log4P

定標公式：有4個參數(shù)，即電、K、a和b。

要求提供至少4個標準品，其中第一個標準品的濃度(活性)為零，其對應(yīng)的R就等

于電，用最速下降法+擬牛頓法求解。適用于隨著濃度增加，其反響度增加越來越小的定標

曲線，如圖：

(2)Logistic-Log5P

定標公式：有5個定標參數(shù)即電、K、a、

b和c。要求提供至少5