第1部分專題訓練

專題8生物技術(shù)與工程（二）

一、單項選擇題（每題給出的四個選項中，只有一個選項是符合題目要求的）

1.（2023?湖北部分重點中學第一次聯(lián)考）與啤酒、葡萄酒并稱世界三大古酒的黃酒

是中國特產(chǎn)，即墨老酒是黃酒中的珍品，按照"黍米必齊，曲篥必時，水泉必香，陶器

必良，湛熾必潔，火劑必得”的古代造酒六法（古遺六法）釀制而成。下列關(guān)于我國傳統(tǒng)

黃酒發(fā)酵的敘述，錯誤的是（）

A.“黍米”中所含物質(zhì)只能為微生物提供碳源和氮源

B.“曲藁”指釀造老酒的酵母菌，其在釀造黃酒過程中進行有氧呼吸和無氧呼吸

C.“湛熾必潔”是為消除雜菌對釀酒過程的影響

D.“火劑必得”的目的是控制適宜的溫度，保證酵母菌發(fā)酵所需

答案A

解析“黍米”中含有蛋白質(zhì)、糖類等，其所含物質(zhì)不僅能為微生物提供碳源和氮源,

還能為微生物提供無機鹽等，A錯誤；“曲篥”指釀造老酒的酵母菌，酵母菌是兼性厭氧

微生物，在有氧條件下，酵母菌進行有氧呼吸，大量繁殖，而后進行無氧呼吸產(chǎn)生酒精,

B正確；在釀酒過程中需要避免雜菌污染，“湛熾必潔”的目的是消除雜菌對釀酒過程的

影響，C正確；“火劑必得”是為了控制適宜的溫度，保證酵母菌發(fā)酵所需，D正確。

2.（2023?棗莊模擬）自生固氮菌是土壤中能獨立進行固氮的細菌。科研人員進行了

土壤中自生固氮菌的分離和固氮能力測定的研究，部分實驗流程如圖。已知步驟④獲得

的三個平板的菌落數(shù)分別為90、95、100,對照組平板為0。相關(guān)敘述正確的是（）

0.5mL0.5mL0.1擴大

培養(yǎng)

固氮

能力

鑒定

⑤

A.步驟②振蕩20min的目的是擴大菌種數(shù)量,屬于選擇培養(yǎng)

B.步驟④使用接種環(huán)劃線接種，使用前需要灼燒滅菌

C.1g土壤中平均自生固氮菌數(shù)約為9.5x106個

D.所用培養(yǎng)基應(yīng)加入碳源、氮源、無機鹽、水和瓊脂

答案C

解析由圖觀察可知，步驟②振蕩20min的目的是讓樣品中的微生物充分釋放到

無菌水中，A錯誤；由圖觀察可知，步驟④獲得的菌落分散在平板上，利用的是涂布平

板法，使用的接種工具是涂布器，使用前需要灼燒滅菌，B錯誤；1g土壤中平均自生

固氮菌數(shù)約為（90+95+100）^3-0.1X104=9.5X106個，C正確；由題干信息可知，該實

驗的目的是分離土壤中自生固氮菌和固氮能力的測定，自生固氮菌能夠利用空氣中的氮

作為氮源，故培養(yǎng)基中不需要加入氮源，D錯誤。

3.（2023?遼寧省協(xié)作校高三第二次模擬略改）通過植物細胞工程技術(shù),可利用甲（高

產(chǎn)不耐鹽），乙（低產(chǎn)耐鹽）兩種二倍體植物培育高產(chǎn)耐鹽的雜種植株，實驗流程如圖所示,

下列敘述錯誤的是（）

甲種植物細胞〉JXL甲原生質(zhì)體）

乙種植物細胞,處理乙原生質(zhì)體/兩

目的植株

［選擇

r-!-i含高濃度鈉鹽

愈傷組織?

衛(wèi)而固體④培養(yǎng)---基---培---養(yǎng)---------------

A.經(jīng)①處理后，可采用質(zhì)壁分離實驗檢測制備的原生質(zhì)體的活性情況

B.②?③過程中，雜種細胞內(nèi)高爾基體和線粒體活動明顯增強

C.由④到目的植株需進一步篩選的原因是④中含有低產(chǎn)耐鹽品種

D.目的植株相對于甲、乙而言發(fā)生了染色體數(shù)目變異但植株仍可育

答案A

4.（2023?海南,7）某團隊通過多代細胞培養(yǎng),將小鼠胚胎干細胞的Y染色體去除,

獲得XO胚胎干細胞，再經(jīng)過一系列處理，使之轉(zhuǎn)變?yōu)橛泄δ艿穆涯讣毎Ｏ铝杏嘘P(guān)敘

述錯誤的是（）

A.營養(yǎng)供應(yīng)充足時，傳代培養(yǎng)的胚胎干細胞不會發(fā)生接觸抑制

B.獲得XO胚胎干細胞的過程發(fā)生了染色體數(shù)目變異

C.XO胚胎干細胞轉(zhuǎn)變?yōu)橛泄δ艿穆涯讣毎倪^程發(fā)生了細胞分化

D,若某瀕危哺乳動物僅存雄性個體，可用該法獲得有功能的卵母細胞用于繁育

答案A

解析傳代培養(yǎng)的胚胎干細胞增殖到貼滿瓶壁時會發(fā)生接觸抑制，A錯誤；據(jù)題干

“將小鼠胚胎干細胞的Y染色體去除，獲得XO胚胎干細胞”可知，該過程中發(fā)生了染色

體數(shù)目變異，B正確；XO胚胎干細胞轉(zhuǎn)變?yōu)橛泄δ艿穆涯讣毎^程中，細胞的形態(tài)、

結(jié)構(gòu)和生理功能發(fā)生了變化，即發(fā)生了細胞分化，C正確；若某瀕危哺乳動物僅存雄性

個體，可以通過去除胚胎干細胞的Y染色體等一系列處理獲得有功能的卵母細胞，用

于繁殖后代，D正確。

5.（2023弓胡北省十一校高三第二次聯(lián)考）利用甲基化酶、去甲基化酶和基因編輯技

術(shù)，改變了小鼠生殖細胞的“基因組印記”，使其“變性”。我國科研人員將一個第二極體

注入修飾后的次級卵母細胞后（類似受精作用），最終創(chuàng)造出“孤雌生殖”的小鼠。實驗過

程如下圖所示。下列敘述正確的是（）

第二極體

尸、卵母細胞H19和CU2基注入，

⑥-恒鬻格艱鑼Q?嗎一

薪！個基因去甲基化給杳囊胚代孕孤雌

瑞母鼠小鼠

A.體外培養(yǎng)卵母細胞時，為防止污染需將培養(yǎng)皿密閉培養(yǎng)在二氧化碳培養(yǎng)箱中

B.胚胎移植前，需對供體和受體進行免疫檢查，避免發(fā)生免疫排斥反應(yīng)

C.甲基化會關(guān)閉基因的活性，對某些基因進行去甲基化后該基因可正常表達

D.“孤雌小鼠”的誕生過程沒有精子參與，其基因型與提供卵母細胞的雌鼠相同

答案C

解析動物細胞培養(yǎng)過程中，為防止雜菌污染,需要對培養(yǎng)液和所有培養(yǎng)用具進行

滅菌處理以及在無菌環(huán)境下進行操作，A錯誤；胚胎移植不會發(fā)生免疫排斥，B錯誤；

DNA分子甲基化會影響基因的表達，從而關(guān)閉基因的活性，而對某些基因進行去甲基

化后該基因可正常表達，C正確；“孤雌小鼠”是由次級卵母細胞發(fā)育而來，如果提供卵

細胞的雌鼠基因型是AaBb,經(jīng)過減數(shù)分裂形成的次級卵母細胞基因型可以是AABB,

產(chǎn)生的卵細胞的基因型是AB,若第二極體的基因型也是AB,則獲得的“孤雌小鼠”的

基因型是AABB,所以二者基因型可能不同,D錯誤。

6.（2023,蘇州模擬）熒光定量PCR技術(shù)可定量檢測樣本中某種DNA含量。其原理

是在PCR體系中每加入一對引物的同時加入一個與某條模板鏈互補的熒光探針，當耐

高溫的DNA聚合酶催化子鏈延伸至探針處，會水解探針，使熒光監(jiān)測系統(tǒng)接收到熒光

信號，即每擴增一次，就有一個熒光分子生成。下列有關(guān)敘述正確的是（）

熒光探針

5'

3'

3,5'

5"3'

A.加入的引物是單鏈DNA,引物1、2的堿基序列相同

B.耐高溫的DNA聚合酶催化DNA的合成方向總是從子鏈的3,端向5,端延伸

C.達到設(shè)定熒光強度所經(jīng)過的循環(huán)次數(shù)與其起始模板量關(guān)系不大

D.該項技術(shù)可用于檢測某種細胞中不同基因的轉(zhuǎn)錄水平

答案D

解析加入的引物是單鏈DNA，但由于引物1、2的結(jié)合位點不同,故引物1、2

的堿基序列不同,A錯誤；由圖分析可知，耐高溫的DNA聚合酶催化DNA的合成方

向總是從子鏈的5,端向3,端延伸，B錯誤；由熒光定量PCR技術(shù)原理分析可知，達到

設(shè)定熒光強度所經(jīng)過的循環(huán)次數(shù)與其起始模板量呈正相關(guān),C錯誤；cDNA是以mRNA

為模板逆轉(zhuǎn)錄形成的，故若以cDNA為模板，該項技術(shù)便可用于檢測某種細胞中不同

基因的轉(zhuǎn)錄水平，D正確。

二、不定項選擇題（每題給出的四個選項中，有的只有一個選項符合題目要求，有

的有多個選項符合題目要求）

7.（20235胡北武漢聯(lián)考改編）野生型大腸桿菌菌株能在基本培養(yǎng)基上生長,氨基酸

營養(yǎng)缺陷型菌株由于發(fā)生基因突變而無法合成某種氨基酸，只能在完全培養(yǎng)基上生長,

如圖為純化某氨基酸營養(yǎng)缺陷型突變株的部分流程圖，數(shù)字代表培養(yǎng)基，A、B、C表

示操作步驟。下列有關(guān)說法正確的是（）

A.①②④為完全培養(yǎng)基，③為基本培養(yǎng)基

B.A操作的目的是提高該突變菌株的濃度

C.B操作不可直接用涂布器蘸取菌液均勻地涂布在②表面

D.經(jīng)C過程原位影印及培養(yǎng)后，可從④中挑取D菌落進行純化培養(yǎng)

答案ABCD

解析對比分析③和④，兩個培養(yǎng)基上接種的細菌相同，而④中菌落數(shù)比③中多，

說明④為完全培養(yǎng)基，而③為基本培養(yǎng)基；①②中突變株和野生型大腸桿菌都能生長,

則①②為完全培養(yǎng)基，A正確；B操作需用移液槍將菌液滴加到②表面，再用涂布器將

菌液均勻地涂布在②表面，C正確；在③中不能生長而在④中能生長的菌落為突變株形

成的，因此可從④中挑取D菌落進行純化培養(yǎng)，D正確。

8.（2023?丹東模擬改編）如圖是培養(yǎng)轉(zhuǎn)基因大腸桿菌的相關(guān)圖示,圖中標注了相關(guān)

限制酶的切割位點。下列相關(guān)敘述中正確的是（）

BamWI

\四環(huán)素抗性基因

RellBamWI引物甲Hind]]]

I質(zhì)粒KBamWI

kIII

卜）鼠半青霉素BelI目的基因/'sl3Al

啟動子抗性基因引物丙引物乙

乙

A.若通過PCR技術(shù)擴增該目的基因,應(yīng)該選用引物甲和引物丙

B.圖中質(zhì)粒和目的基因構(gòu)建表達載體時，應(yīng)選用Bell和H沅dill剪切，斷裂氫鍵

C.檢測目的基因在受體細胞中是否表達出蛋白質(zhì)，采用抗原一抗體雜交技術(shù)

D.質(zhì)粒上的抗性基因有利于篩選含目的基因的細胞和促進目的基因的表達

答案AC

解析根據(jù)乙圖引物引導子鏈延伸的方向可知，若通過PCR技術(shù)擴增該目的基因，

應(yīng)該選用引物甲和引物丙，A正確；根據(jù)質(zhì)粒上限制酶識別序列的分布位點可知，構(gòu)建

表達載體時，不能選用限制酶及加HI,否則會導致兩種抗性基因都被破壞，因此應(yīng)該

選擇Bell和印“din這兩種限制酶"艮制酶破壞的是磷酸二酯鍵,B錯誤；檢測目的基

因在受體細胞中是否表達出蛋白質(zhì)，應(yīng)采用抗原一抗體雜交技術(shù)，c正確；質(zhì)粒上的抗

性基因有利于篩選含目的基因的細胞，但不能促進目的基因的表達，D錯誤。

三、非選擇題

9.（2023?湖南,21）某些植物根際促生菌具有生物固氮、分解淀粉和抑制病原菌等

作用?；卮鹣铝袉栴}：

⑴若從植物根際土壤中篩選分解淀粉的固氮細菌，培養(yǎng)基的主要營養(yǎng)物質(zhì)包括水

和O

（2）現(xiàn)從植物根際土壤中篩選出一株解淀粉芽胞桿菌H,其產(chǎn)生的抗菌肽抑菌效果

見表。據(jù)表推測該抗菌肽對____________________________的抑制效果較好，若要確定其有

抑菌效果的最低濃度，需在pig-mL-1濃度區(qū)間進一步實驗。

抗菌肽濃度（Rg,mL-1）

測試菌

55.2027.6013.806.903.451.730.86

金黃色葡萄球菌-----++

枯草芽胞桿菌-----++

禾谷鐮抱菌-++++++

假絲酵母-++++++

注：“+”表示長菌，“-”表示未長菌。

（3）研究人員利用解淀粉芽胞桿菌H的淀粉酶編碼基因M構(gòu)建高效表達質(zhì)粒載體，

轉(zhuǎn)入大腸桿菌成功構(gòu)建基因工程菌A。在利用A菌株發(fā)酵生產(chǎn)淀粉酶M過程中，傳代

多次后，生產(chǎn)條件未變，但某子代菌株不再產(chǎn)生淀粉酶Mo分析可能的原因是

________________________________________（答出兩點即可）。

(4)研究人員通過肺上皮干細胞誘導生成肺類器官，可自組裝或與成熟細胞組裝成

肺類裝配體，如圖所示。肺類裝配體培養(yǎng)需要滿足適宜的營養(yǎng)、溫度、滲透壓、pH以

及___________________________(答出兩點)等基本條件。肺類裝配體形成過程中是否

運用了動物細胞融合技術(shù)？_______(填“是”或“否

gg翳

肺上皮干細胞體細胞

I一扁而一］卜選

肺類器官A肺類器官BV"

|共,養(yǎng)||共‘養(yǎng)|

卷石

肺類裝配體1肺類萎配體2

(5)耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(MRSA)是一種耐藥菌,嚴重危害人類健康?？蒲腥?/p>

員擬用MRSA感染肺類裝配體建立感染模型,來探究解淀粉芽胞桿菌H抗菌肽是否對

MRSA引起的肺炎有治療潛力。以下實驗材料中必備的是_______0

①金黃色葡萄球菌感染的肺類裝配體②MRSA感染的肺類裝配體③解淀粉芽

胞桿菌H抗菌肽④生理鹽水⑤青霉素(抗金黃色葡萄球菌的藥物)⑥萬古霉素(抗

MRSA的藥物)

答案(1)淀粉、無機鹽

(2)金黃色葡萄球菌和枯草芽胞桿菌1.73~3.45

(3)淀粉酶M基因發(fā)生突變或含有M基因的表達載體丟失

(4)適宜的氣體和無菌、無毒的環(huán)境否

⑸②③④⑥

解析⑴培養(yǎng)基的成分一般包含水、碳源、氮源和無機鹽等營養(yǎng)成分，篩選分解

淀粉的固氮細菌所需要的選擇培養(yǎng)基中，除含水、無機鹽外，還應(yīng)含有淀粉，而不能含

有有機氮。

（2）從表中數(shù)據(jù)可以看出,抗菌肽濃度為3.45~55.20|ig-mL-1時，金黃色葡萄球菌

和枯草芽胞桿菌均無法存活,禾谷鐮抱菌和假絲酵母在抗菌肽濃度為55.20pig-mL-1時

無法存活,而在抗菌肽濃度低于27.6照nL-i（含）時可存活,故抗菌肽對金黃色葡萄球

菌和枯草芽胞桿菌抑制效果較好?？咕臐舛葹?.73陷mL-i時，金黃色葡萄球菌和枯

草芽胞桿菌均能存活,而在3.45pig-mL-1時均不能存活,所以若要確定抗菌肽有抑菌效

果的最低濃度,應(yīng)在1.73~3.45pig-mL-1濃度區(qū)間進一步實驗。

（3）淀粉酶M基因發(fā)生突變或含有M基因的表達載體丟失時,菌株不能再產(chǎn)生淀粉

酶M。

（4）動物細胞培養(yǎng)除需要滿足適宜的營養(yǎng)、溫度、滲透壓和pH條件外，還需要適宜

的氣體環(huán)境（95%空氣和5%CO2）以滿足代謝需求和維持培養(yǎng)液pH,以及無菌、無毒的

環(huán)境防止其他微生物的污染和細胞代謝物的危害。肺類裝配體形成過程涉及兩種或多種

細胞的共培養(yǎng)，但并未運用動物細胞融合技術(shù)。

（5）若要探究解淀粉芽胞桿菌H抗菌肽是否對MRSA引起的肺炎有治療潛力,需至

少取三組MRSA感染的肺類裝配體進行培養(yǎng),第一組加入解淀粉芽胞桿菌H抗菌肽,

第二組加入萬古霉素（作為有抗菌效果的對照），第三組加入等量生理鹽水（作為無抗菌效

果的對照），觀察并比較三組肺類裝配體的生長情況，若第一組肺類裝配體生長情況明

顯好于第三組，且與第二組類似或好于第二組，說明該抗菌肽對MRSA引起的肺炎有

治療潛力。

10.（2023?張家口模擬）SRV基因是哺乳動物Y染色體上具有決定雄性性別作用的基

因片段。某人的性染色體組成為XX，但表現(xiàn)為男性體征，調(diào)查發(fā)現(xiàn)其1條X染色體上

帶有Y染色體的DNA片段。回答下列相關(guān)問題：

⑴在確定該DNA片段中是否含有SRF基因時,先從被測試者細胞中提取該DNA

片段,然后和引物（根據(jù)設(shè)計的一段堿基序列）混合,進行PCR擴增；在

PCR的延伸階段,需加熱至72℃左右,主要依據(jù)

和^_______________因素考慮。最后，用作為探針

對擴增產(chǎn)物進行檢測,若出現(xiàn)陽性反應(yīng),則（填“含有”或“不含有”）SRV基因。

（2）為驗證該DNA片段能否決定雄性性別,將含該DNA片段的基因表達載體導入

小鼠體內(nèi)。一種操作方法是將目的基因?qū)胄墼?，而不是雌原核，過程如圖所示，從

兩者形態(tài)差異上分析，主要原因是

待轉(zhuǎn)入的

叫j基因

雄原核

黔贛檢測小鼠性別

雌原核2培養(yǎng)早期胚胎

受精卵

（3）為篩選出性染色體組成為XX的小鼠胚胎，可對時期胚胎的滋養(yǎng)層細

胞進行鑒別。將符合條件的早期胚胎移入代孕母鼠子宮中，胚胎移植時代孕母鼠的選擇

條件是_____________________________________（寫出2項即可），代孕母鼠對移入子

宮的外來胚胎基本不發(fā)生________________________，這為胚胎在代孕母鼠子宮內(nèi)的存

活提供了可能。在獲得的子代小鼠中出現(xiàn)（性別）小鼠，證明該DNA片段含SRY

基因。

答案（DSRy基因保證耐高溫的DNA聚合酶所需溫度條件防止DNA變性

標記的含SAV基因的DNA片段含有

（2）雄原核較大,更容易容納外源DNA

（3）囊胚同種、具有健康體質(zhì)和正常繁殖能力免疫排斥雄性

解析⑴引物是根據(jù)目的基因的一段序列設(shè)計的，在本檢測中目的基因是SRY基

因，因此引物是根據(jù)SRY基因的一段序列設(shè)計的。在PCR的延伸階段，需加熱至72℃

左右，主要依據(jù)保證耐高溫的DNA聚合酶所需溫度條件和防止DNA變性因素考慮。

用標記的含SRY基因的DNA片段作為探針對擴增產(chǎn)物進行檢測,若出現(xiàn)陽性反應(yīng),則

含有SRV基因。

(2)雄原核較大,更容易容納外源DNA,故可將外源基因?qū)氲叫墼酥小?/p>

(3)當DNA片段導入受體細胞后,可控制小鼠的性別，使小鼠表現(xiàn)為雄性，但應(yīng)排

除原細胞中Y染色體的影響，可對囊胚的滋養(yǎng)層細胞的性染色體進行鑒別并選取性染

色體為XX的小鼠胚胎，選擇接受胚胎的代孕母鼠時，應(yīng)選擇同種、具有健康體質(zhì)和正

常繁殖能力個體，將符合條件的胚胎導入代孕母鼠子宮后，外來胚胎不被免疫排斥，這

為胚胎在代孕母鼠子宮內(nèi)的存活提供了可能。在獲得的子代小鼠中出現(xiàn)雄性小鼠，證明

該DNA片段含SRV基因。

11.(2023?河南九師聯(lián)盟)油菜是一種常見的油料作物。維生素E有延緩衰老的作用,

是一種脂溶性維生素。尿黑酸植基轉(zhuǎn)移酶(HPT)是擬南芥中天然維生素E合成途徑中的

關(guān)鍵酶。為獲得高產(chǎn)維生素E的油菜種子,科研工作者將編碼HPT的基因HPT1轉(zhuǎn)入

油菜細胞并獲得轉(zhuǎn)基因油菜，流程如圖。請回答相關(guān)問題：

HindIIIBamHISalI

含7/P77基?|」I?

因的DNA~\

Sal1基因'

小甫-四環(huán)素抗性基因重組

氨芳青隹素貝巴2二I質(zhì)粒

抗性基因ID

農(nóng)桿菌油菜細胞愈傷組織

轉(zhuǎn)基因油菜

(1)為獲得目的基因，科研工作者用擬南芥基因組DNA為模板，用基因HPT1兩端

的已知序列設(shè)計_______進行PCR擴增。PCR擴增的原理是.

⑵用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將目的基因?qū)胗筒思毎?，其中用到的質(zhì)粒是_______;該質(zhì)

粒含有一段特殊的DNA片段，稱為；該方法中農(nóng)桿菌的作用是

(3)構(gòu)建重組質(zhì)粒時選用的酶是

。該操作與常用的同一種酶切割相比，優(yōu)點是

(4)含有目的基因的農(nóng)桿菌可根據(jù)標記基因進行篩選。若農(nóng)桿菌在含有氨茶青霉素

和四環(huán)素的培養(yǎng)基上都可以生長繁殖,農(nóng)桿菌中是否已含有目的基因？(填

“是”或“否”)。為什么？

⑸將已經(jīng)轉(zhuǎn)化的農(nóng)桿菌進行如下操作，篩選出符合要求的農(nóng)桿菌。先把轉(zhuǎn)化的農(nóng)

桿菌接種到A培養(yǎng)基中培養(yǎng)，長出菌落后，用無菌牙簽挑取A上的單個菌落，分別接

種到B(含氨黃青霉素)和C(含四環(huán)素和氨節(jié)青霉素)兩個培養(yǎng)基的相同位置上,一段時

間后，菌落的生長狀況如圖所示。含目的基因的菌落位于B或C上的哪些菌落中？請

在圖中相應(yīng)的位置上圈出來。

含四環(huán)素和含氨芾

氨茉青霉素青霉素

答案⑴引物DNA半保留復制

(2)Ti質(zhì)粒T-DNA感染油菜細胞，把目的基因插入到油菜細胞的染色體DNA上

⑶印“dill和Sall兩種限制酶和DNA連接酶防止目的基因和質(zhì)粒的自身環(huán)化和

反向連接，以提高目的基因正向連接的重組質(zhì)粒的合成效率

(4)否含有目的基因的重組質(zhì)粒中四環(huán)素抗性基因被破壞

(5)如圖所示

。

菌落o

。oo

。oo

OO

含四環(huán)素和氨半"青霉素含氨苫青寄索

解析(2)農(nóng)桿菌Ti質(zhì)粒上有T-DNA,目的基因插入到T-DNA上,農(nóng)桿菌感染油

菜細胞后,才能把T-DNA上的目的基因插入到油菜細胞的染色體DNA上。

(3)根據(jù)題圖可知，選用H%dni和Sall兩種限制酶可以不破壞目的基因，同時質(zhì)粒

上有相應(yīng)的限制酶切割位點；目的基因要插入到切割后的質(zhì)粒的T-DNA上,還需要

DNA連接酶的連接。兩種限制酶切割的黏性末端不同,可防止目的基因和質(zhì)粒的自身

環(huán)化和反向連接，可以提高目的基因正向連接的重組質(zhì)粒的合成效率。

(4)由于含有目的基因的重組質(zhì)粒中四環(huán)素抗性基因被破壞，則含有目的基因的農(nóng)

桿菌只能在含氨莘青霉素的培養(yǎng)基上生長，而不能在含四環(huán)素的培養(yǎng)基上生長。

(5)根據(jù)上述分析，含有目的基因的農(nóng)桿菌只能在含氨半青霉素的培養(yǎng)基B上生長,

對比C可得出答案。

12.(2023福州市普通高中畢業(yè)班4月質(zhì)量檢測改編)基因組中大片段DNA的定向

整合擁有廣闊的應(yīng)用前景。目前細菌中的定向整合系統(tǒng)存在諸多不足，如效率偏低，缺

乏有效的篩選標記物,可整合的片段大小有限(3~4kb)等。研究者嘗試構(gòu)建CRISPR

RNA-guided定向整合系統(tǒng)以改善上述缺陷。

(l)Cas蛋白是一種RNA引導的內(nèi)切酶，能催化雙鏈DNA在特定位點斷裂。crRNA

是一種短鏈RNA,它一端可與Cas蛋白結(jié)合，另一端通過_____________原則與目標

DNA序列結(jié)合。

(2)轉(zhuǎn)座子(Tn)是一段特殊的DNA片段。轉(zhuǎn)座酶A和轉(zhuǎn)座酶B相互結(jié)合后可將Tn

從原有的DNA鏈上切下,并將其整合到其他DNA片段上。為了使轉(zhuǎn)座子定向整合到

特定的位置,研究者構(gòu)建了圖1所示的CRISPRRNA-guided定向整合系統(tǒng),導入大腸

桿菌，并統(tǒng)計定向整合的效率，結(jié)果如圖20

轉(zhuǎn)座子方向

①構(gòu)建重組質(zhì)粒時，應(yīng)將翻譯終止序列設(shè)置在Cas基因和轉(zhuǎn)座酶A基因之后而不

是設(shè)置在兩者之間，目的是

②由圖2結(jié)果可知，轉(zhuǎn)座子的定向整合效率高低與___________________密切相

關(guān)。為保證轉(zhuǎn)座子連接方向與預期相同，構(gòu)建重組質(zhì)粒的過程中，對切割轉(zhuǎn)座子和切割

載體的限制酶的要求是_______________________________________________O

③由圖2結(jié)果可知，該系統(tǒng)還能有效解決篩選標記物缺乏的問題，理由是

(3)研究者替換了不同長度的轉(zhuǎn)座子，繼續(xù)檢測定向整合效率，結(jié)果如圖30

定

向

整

合

效

率

(%

1

o

b)

度(k

子長

轉(zhuǎn)座

10

7.5

5.3

2.5

0.98

圖3

片段大

整合的

系統(tǒng)可

整合

d定向

guide

NA-

PRR

，CRIS

相比

系統(tǒng)

整合

定向

有的

與現(xiàn)

____O

____

____

____

____

____

____

據(jù)是_

判斷依

提高，

小得到

有哪

可以

中還

研究

科學

其在

說出

，舉例

特點

合的

向整

因定

現(xiàn)基

能實

系統(tǒng)

用該

⑷利