DB51DB51/T1521—2012金針菇菌種生產技術規(guī)程2012-12-20發(fā)布2013-03-01實施四川省質量技術監(jiān)督局發(fā)布I 12規(guī)范性引用文件 13術語和定義 1 15生產工藝 3附錄A(資料性附錄)母種常用培養(yǎng)基及其配方 7附錄B(資料性附錄)原種和栽培種常用培養(yǎng)基及其配方 8Ⅱ本標準附錄A、附錄B為資料性附錄。本標準按照GB/T1.1-2009給出的規(guī)則進行編寫。本標準由四川省農業(yè)廳提出并歸口。本標準由四川省質量技術監(jiān)督局批準。本標準由四川省食用菌菌種場、四川省農業(yè)科學院土壤肥料研究所負責起草。本標準主要起草人：唐利民、姜鄰、陳曉娟、王蓓、周潔、高興祥。1件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。NY5099無公害食品食用菌栽培基質安全技術要求NY/T528食用菌菌種生產技術規(guī)程中華人民共和國農業(yè)部第62號令(2006)食用菌菌種管理辦法經各種方法選育得到的具有結實性的菌絲體純培養(yǎng)物及其繼代培養(yǎng)物，也稱一級種。原種由母種移植、擴大培養(yǎng)而成的菌絲體純培養(yǎng)物，也稱二級種。2各級菌種場應根據《食用菌菌種管理辦法》的規(guī)定取得相應的《食用菌菌種生產經營許可證》。母種和原種由所在地縣級人民政府農業(yè)行政主管部門審核，省級人民政府農業(yè)行政主管部門核發(fā)，報農業(yè)部備案。栽培種由所在地縣級人民政府農業(yè)行政主管部門核發(fā)，報省級人民政府農業(yè)行政主管部門備案。4.2技術人員各級菌種場應按照《食用菌菌種管理辦法》的規(guī)定配備經省級人民政府農業(yè)行政主管部門考核合格的生產技術人員和檢驗人員。4.3場地環(huán)境要求應符合NY/T528的規(guī)定。4.4廠房設置與布局4.4.1設置應設置原材料庫、曬料場、配料分裝場、滅菌間、冷卻室、接種室、培養(yǎng)室、菌種檢驗室、菌種貯存室和出菇試驗場等。廠房建造從結構和功能上應滿足食用菌菌種生產的基本需要。4.4.2布局廠房按照菌種制種工藝流程布局，各操作環(huán)節(jié)按順序形成一條流水線，滅菌前的操作區(qū)域與滅菌后的操作區(qū)域相隔離，出菇場與菌種生產、培養(yǎng)車間隔離。儲料室(庫)、曬料場、廢物堆集場等帶有雜菌的區(qū)域應處于場地的下風口。4.5設施設備4.5.1基本設施4.5.1.1原材料庫防潮防雨、通風、遠離火源。4.5.1.2配料分裝場水電齊備，空間充裕，通風良好，地面便于沖洗。水電齊備，空間充裕，通風散熱。4.5.1.4冷卻室配備散熱設備，墻壁和地面便于沖洗消毒。4.5.1.5接種室配備降溫、除塵設備，四周墻面及屋頂、地面光潔，可清洗消毒。4.5.1.6培養(yǎng)室具有與生產量相適應的培養(yǎng)室面積。培養(yǎng)室應具備控溫和通風換氣設備，通風良好，無直射陽光，能密閉熏蒸消毒殺蟲。具備防蚊蟲、鼠害設施。3備、接種工具、恒溫培養(yǎng)箱、培養(yǎng)架、烘箱、除濕機、電冰箱、質量檢測儀器設備及其它工器具。5生產工藝菌種分為母種(一級種)、原種(二級種)、栽培種(三級種)。原材料配制→分裝→滅菌→冷卻擺斜面→無菌檢驗→接種→培養(yǎng)→檢驗→成品。以配制1000mlPDA培養(yǎng)基為例，選無青皮、未發(fā)芽的新鮮馬鈴薯洗凈、去皮、去芽眼，稱取200g切成5m左右的薄片。加水1200ml左右煮20～30分鐘，煮至熟而不爛，用先預濕的4層紗布過濾。取濾裝量為試管長度的1/5～1/4,管口不能粘上培養(yǎng)基。4滅菌結束，自然降壓至零。打開鍋蓋，利用余熱烘干棉塞。將試每批次隨機抽取3%～5%的試管置于28℃恒溫培養(yǎng)72h,無微生物菌落出現，即為滅菌合格。5.2.5.1接種室(箱)消毒方法清潔接種室(箱)后，用氣霧消毒劑熏蒸，接種室熏蒸2h～3h,接種箱熏蒸30min。并用紫外燈照射。凈化工作臺臺面先用75%酒精或其它消毒劑擦拭消毒，開機30min后接種。左手平托母種試管和待接種試管，并使管口位于火焰上方無菌區(qū)域，但不直接接種后置于23℃~25℃的恒溫培養(yǎng)箱內培養(yǎng)。定期檢查，及時揀出污染和不合格個體。菌絲白色、整齊、均勻，無角變、無雜菌，生活力強，培使用750ml無色或近無色專用玻璃菌種瓶，或850ml～1000ml耐126℃高溫白色半透明塑料菌種瓶。按培養(yǎng)基配方備料→預濕和拌料→裝瓶→高壓滅菌→冷卻(至30℃左右)→接種→培養(yǎng)、檢查→成嚴格控制含水量60%～65%。培養(yǎng)料裝至瓶肩處，稍作壓實，松緊適度。將瓶口和外瓶壁洗擦干凈，封瓶口。5培養(yǎng)基中，于28℃恒溫培養(yǎng)72h,無微生物長出為滅菌合格。5.3.5接種室(箱)消毒接種室(箱)用氣霧消毒劑熏蒸，接種室熏蒸2h～3h,接種箱熏蒸40min,并用紫外線燈照射。接種前30min,用衛(wèi)生消毒劑噴霧降塵消毒。檢查、核對菌種。接種人員換上接種工作服。接種人員的手用75%酒精棉球擦拭消毒，接種鉤和母培養(yǎng)室內控制室溫23℃~25℃,空氣相對濕度60%～70%,保持空氣清新，避光培養(yǎng)。定期檢查菌菌絲白色、整齊、均勻，無角變、無雜菌、無病蟲，生活力強，培——栽培種的容器還可選用規(guī)格為12cm~15cm×2——菌種袋裝料時要求袋面平整無皺褶，袋內料面無空隙，松緊適度，用手輕壓袋面有彈性為宜；——栽培種也可以采用常壓滅菌。常壓滅菌時，宜在4h內使滅菌鍋內溫度達100℃,保持恒溫12h~6菌種生產各環(huán)節(jié)均應做好原始記錄，存檔備查。各級菌種都應留樣備查。各級菌種各個批次留樣數量不得少于3支(瓶、袋),至該批菌種正常生產條件下出菇后方可處置。(資料性附錄)A.1PDA培養(yǎng)基(馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基)馬鈴薯200g,葡萄糖20g,馬鈴薯200g,麥麩50g,葡萄糖20g,瓊脂20g,水1000m1,pH值自然。黃豆芽200g,葡萄糖20g,瓊脂20g,水1000ml,pH值自然。A.4洋蔥醬油培養(yǎng)基洋蔥汁*100ml,醬油50ml,蔗糖50g,瓊脂20g,水850ml,pH值自然。8(資