第3章基因工程第2節(jié)基因工程的基本操作程序（填空版）1．培育轉(zhuǎn)基因抗蟲棉主要需要四個(gè)步驟：__________________________、__________________________、__________________________、_________________________。（P76）2．PCR是聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的縮寫。它是一項(xiàng)根據(jù)_____________的原理，在體外提供參與DNA復(fù)制的各種組分與反應(yīng)條件，對目的基因的核苷酸序列進(jìn)行_____________的技術(shù)。（P77）3．PCR技術(shù)可以分為_____________、_____________和_____________三步。（如下圖）（P78）4．PCR反應(yīng)過程可以在_____________（PCR儀）中自動完成，完成以后，常采用_____________來鑒定PCR的產(chǎn)物。（P79）5．基因表達(dá)載體要包括以下四個(gè)基本的結(jié)構(gòu)：_____________、_____________、_____________、_____________。（P80）6．構(gòu)建基因表達(dá)載體的目的：___________________________________________________________________________________________。（P80）7．啟動子位于目的基因的_____________，它是_____________識別和結(jié)合的部位。（P80）8．標(biāo)記基因的作用：_________________________________________________________________________________________________________________。9．熟悉基因表達(dá)載體構(gòu)建的過程。10．花粉管通道法有多種操作方式。例如，可以用_____________將含目的基因的DNA溶液直接注入子房中；可以在植物受粉后的一定時(shí)間內(nèi)，剪去_____________，將DNA溶液滴加在_____________上，使目的基因借助_____________進(jìn)入胚囊。除此之外，將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞常用的方法還有_____________法。（P81）11．轉(zhuǎn)化是指____________________________________________________的過程。（P81“資料卡”）12．農(nóng)桿菌是一種在土壤中生活的微生物，能在自然條件下侵染雙子葉植物和裸子植物，而對大多數(shù)單子葉植物沒有侵染能力。農(nóng)桿菌細(xì)胞內(nèi)含有_____________質(zhì)粒，當(dāng)它侵染植物細(xì)胞后，能將_____________質(zhì)粒上的T－DNA（可轉(zhuǎn)移的DNA）轉(zhuǎn)移到被侵染的細(xì)胞，并且將其整合到該細(xì)胞的__________________________。根據(jù)農(nóng)桿菌的這種特點(diǎn)，如果將目的基因插入Ti質(zhì)粒的T－DNA中，通過農(nóng)桿菌的轉(zhuǎn)化作用，就可以使目的基因進(jìn)入植物細(xì)胞。（如下圖）（P81“資料卡”）13．檢查轉(zhuǎn)基因抗蟲棉是否培育成功，首先是分子水平的檢測，包括通過_____________等技術(shù)檢測_______________________________________或檢測__________________________；從轉(zhuǎn)基因棉花中提取蛋白質(zhì)，用相應(yīng)的抗體進(jìn)行_____________雜交，檢測_______________________________________等。其次，還需要進(jìn)行_____________水平的鑒定。例如，通過采摘抗蟲棉的葉片飼喂棉鈴蟲來確定Bt基因是否賦予了棉花抗蟲特性以及抗性的程度。（P82）14．培育轉(zhuǎn)基因抗蟲棉的四個(gè)步驟，其實(shí)就反映了基因工程的基本操作程序。（P82）基因工程的基本操作流程圖15．在獲得轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品的過程中，還可以通過構(gòu)建_____________來獲取目的基因。（P82）16．將目的基因?qū)雱游锸芫炎畛Ｓ玫囊环N方法是利用_____________將目的基因注入動物的受精卵中，這個(gè)受精卵將發(fā)育成為具有新性狀的動物。在基因工程操作中，常用原核生物作為受體細(xì)胞，其中以_____________應(yīng)用最為廣泛。研究人員一般先用_____________處理大腸桿菌細(xì)胞，使細(xì)胞處于一種能__________________________的生理狀態(tài)，然后再將重組的基因表達(dá)載體導(dǎo)入其中。（P82）

第3章基因工程第2節(jié)基因工程的基本操作程序（答案版）1．培育轉(zhuǎn)基因抗蟲棉主要需要四個(gè)步驟：目的基因的篩選與獲取、基因表達(dá)載體的構(gòu)建、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞、目的基因的檢測與鑒定。（P76）2．PCR是聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的縮寫。它是一項(xiàng)根據(jù)DNA半保留復(fù)制的原理，在體外提供參與DNA復(fù)制的各種組分與反應(yīng)條件，對目的基因的核苷酸序列進(jìn)行大量復(fù)制的技術(shù)。（P77）3．PCR技術(shù)可以分為變性、復(fù)性和延伸三步。（如下圖）（P78）4．PCR反應(yīng)過程可以在PCR擴(kuò)增儀（PCR儀）中自動完成，完成以后，常采用瓊脂糖凝膠電泳來鑒定PCR的產(chǎn)物。（P79）5．基因表達(dá)載體要包括以下四個(gè)基本的結(jié)構(gòu)：目的基因、啟動子、終止子、標(biāo)記基因。（P80）6．構(gòu)建基因表達(dá)載體的目的：使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在，并且遺傳給下一代，同時(shí)，使目的基因能夠表達(dá)和發(fā)揮作用。（P80）7．啟動子位于目的基因的上游，它是RNA聚合酶識別和結(jié)合的部位。（P80）8．標(biāo)記基因的作用：鑒別受體細(xì)胞中是否含有目的基因，從而將含有目的基因的細(xì)胞篩選出來。（或供重組DNA的鑒定和選擇）。9．熟悉基因表達(dá)載體構(gòu)建的過程。10．花粉管通道法有多種操作方式。例如，可以用微量注射器將含目的基因的DNA溶液直接注入子房中；可以在植物受粉后的一定時(shí)間內(nèi)，剪去柱頭，將DNA溶液滴加在花柱切面上，使目的基因借助花粉管通道進(jìn)入胚囊。除此之外，將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞常用的方法還有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法。（P81）11．轉(zhuǎn)化是指目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞內(nèi)，并且在受體細(xì)胞內(nèi)維持穩(wěn)定和表達(dá)的過程。（P81“資料卡”）12．農(nóng)桿菌是一種在土壤中生活的微生物，能在自然條件下侵染雙子葉植物和裸子植物，而對大多數(shù)單子葉植物沒有侵染能力。農(nóng)桿菌細(xì)胞內(nèi)含有Ti質(zhì)粒，當(dāng)它侵染植物細(xì)胞后，能將Ti質(zhì)粒上的T－DNA（可轉(zhuǎn)移的DNA）轉(zhuǎn)移到被侵染的細(xì)胞，并且將其整合到該細(xì)胞的染色體DNA上。根據(jù)農(nóng)桿菌的這種特點(diǎn)，如果將目的基因插入Ti質(zhì)粒的T－DNA中，通過農(nóng)桿菌的轉(zhuǎn)化作用，就可以使目的基因進(jìn)入植物細(xì)胞。（如下圖）（P81“資料卡”）13．檢查轉(zhuǎn)基因抗蟲棉是否培育成功，首先是分子水平的檢測，包括通過PCR等技術(shù)檢測棉花的染色體DNA上是否插入了Bt基因或檢測Bt基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA；從轉(zhuǎn)基因棉花中提取蛋白質(zhì)，用相應(yīng)的抗體進(jìn)行抗原—抗體雜交，檢測Bt基因是否翻譯成Bt抗蟲蛋白等。其次，還需要進(jìn)行個(gè)體生物學(xué)水平的鑒定。例如，通過采摘抗蟲棉的葉片飼喂棉鈴蟲來確定Bt基因是否賦予了棉花抗蟲特性以及抗性的程度。（P82）14．培育轉(zhuǎn)基因抗蟲棉的四個(gè)步驟，其實(shí)就反映了基因工程的基本操作程序。（P82）基因工程的基本操作流程圖15．在獲得轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品的過程中，還可以通過構(gòu)建基因文庫來獲取目的基因。（P82）16．將目的基因?qū)?/p>